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文檔簡介
1、2009級生物技術 制藥工程實驗,可見分光光度法測定大山楂丸中總黃酮的含量,實驗一,一、目的要求 1、掌握用分光光度法測定藥物中總黃酮含量。 2、掌握可見分光光度計的使用方法。,二、基本原理 大山楂丸由山楂、神曲和麥芽組成,主要功能為開胃消食,其中山楂主要成分為有機酸、黃酮類及多種維生素。 黃酮類化合物具有鄰二酚羥基,或3,5位羥基結構,可與鋁鹽、鉛鹽、鎂鹽等金屬鹽類試劑反應,生成有色配合物,可用可見分光光度法測定其含量。 本實驗利用黃酮類化合物在亞硝酸鈉的堿性溶液中,與Al3+產(chǎn)生高靈敏度的橙紅色配合物(max=510nm),從而用可見分光光度法(比色法)測定大山楂丸中總黃酮的含量。,三、儀
2、器與試藥 1、可見分光光度計、分析天平、回流提取器。 2、乙醇(A.R)、5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、1mol/l氫氧化鈉溶液。 3、蘆?。ㄖ袊幤飞镏破窓z定所)。 4、大山楂丸(市售品)。,四、操作步驟 1、標準液的配制: 精密稱取蘆丁對照品20mg,置100ml容量瓶中,加95%乙醇50ml使溶解,然后加50%乙醇稀釋至刻度,即得0.2mg/ml的對照品溶液。,2、標準曲線的制備: 精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml,分別置于10ml容量瓶中,各加50%乙醇溶液使成5ml,精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml,搖勻,放置6分鐘,加入10%硝酸鋁溶液
3、0.3ml,搖勻,再放置6分鐘,加入1%氫氧化鈉溶液4ml,分別用50%乙醇稀釋至刻度,搖勻,放置15分鐘。以第一瓶作空白,用可見分光光度計在510nm處測其吸收度,作A-C標準曲線(或計算其回歸方程)。,3、樣品液的制備: 精密稱取干燥的大山楂丸9.0g,置回流提取器中,用95%乙醇125ml回流提取1.5小時,提取兩次,合并兩次濾液,減壓濃縮至150ml即得。 4、含量測定: 精密量取提取液1ml,按上述標準曲線制備方法進行測定,并由標準曲線或回歸方程計算樣品中總黃酮的含量。,5、蘆丁的定性反應: 取上述提取溶液2ml,加少許鎂粉,再加5滴濃鹽酸,注意觀察顏色變化。,五、注意事項 1、實驗證明,提取時間為1.5小時,提取兩次,基本能提盡樣品中黃酮。 2、實驗證明,樣品顯色后,在30分鐘內(nèi)測定總黃酮含量,無明顯改變,超過30分鐘,含
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