醫(yī)學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)二(新).ppt

1、(新)醫(yī)學(xué)微生物學(xué),（實(shí)驗(yàn)二） 主講人：岳啟安,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,一、細(xì)菌的分布 二、消毒與滅菌 三、細(xì)菌的遺傳變異 四、細(xì)菌的生化反應(yīng) 五、球菌,一、細(xì)菌的分布,1.空氣 2.手指（自做） 3. 齒垢涂片（自做） 4. 泥土（示教）,1.To examine bacteria in air of laboratory,10min,37,24h,cover,To observe the result,2.To examine bacteria on finger,Press as fingerprint,before sterilization,after sterilization,A,Your s

2、ign,3.齒 垢 涂 片,NS,Step of Gram stain,齒垢涂片,二、消毒與滅菌,1.紫外線殺菌試驗(yàn),2.藥敏試驗(yàn),3.化學(xué)消毒劑的殺菌試驗(yàn)（自做）,三、細(xì)菌的遺傳變異,細(xì)菌的變異現(xiàn)象 1.HO變異 2.L型變異 3.耐藥性變異,變形桿菌遷徙生長(zhǎng)現(xiàn)象,1.HO變異,形態(tài)結(jié)構(gòu)變異,青霉素、溶菌酶正常形態(tài)細(xì)菌 L型變異 抗體或補(bǔ)體 (部分或完全失去胞壁),葡萄球菌,葡萄球菌L型,2.L型變異,3. 耐藥性變異,四、細(xì)菌的生化反應(yīng),根據(jù)細(xì)菌含有不相同的酶系統(tǒng)，可分解不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，用生化方法來(lái)鑒定細(xì)菌,稱細(xì)菌的生化反應(yīng),1、細(xì)菌的分解代謝,（1）糖發(fā)酵試驗(yàn)(Fermentation

3、of sugars) 細(xì)菌分解糖時(shí)，則產(chǎn)酸，使指示劑變?yōu)辄S色( “”)；有些細(xì)菌在分解糖產(chǎn)酸的同時(shí)還產(chǎn)生氣體，在管中有氣泡出現(xiàn)()；如細(xì)菌不分解該糖時(shí)，指示劑不變色 ()。,五糖生化反應(yīng)： 葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖 （指示劑-溴甲酚紫） （對(duì)應(yīng)發(fā)酵管顏色：紅、黃、藍(lán)、白、黑） 大腸桿菌： 傷寒桿菌： ,傷寒桿菌,大腸桿菌,（2）吲哚試驗(yàn) 有些細(xì)菌如大腸桿菌等能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），與試劑中的對(duì)二甲基氨基苯甲醛相互作用，形成玫瑰紅色化合物，為吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性。,五、球 菌,1.球菌形態(tài)觀察 2.球菌培養(yǎng)物觀察 3.血漿凝固酶試驗(yàn) 4.抗O試驗(yàn),Staphylococcu

4、s(Gram stain),1.球菌形態(tài)觀察,Streptococcus （Gram stain）,pneumococcus,Meningococcus,淋球菌（gonococcus）,金黃色葡萄球菌菌落,2.球菌培養(yǎng)物觀察,乙型溶血性鏈球菌菌落,3.血漿凝固酶試驗(yàn),血漿凝固酶能使含有枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質(zhì)。 凝固酶有兩種：一種是分泌至菌體外的蛋白質(zhì)稱為游離凝固酶；另一種結(jié)合于菌體表面并不釋放的凝固酶，稱結(jié)合凝固酶或凝聚因子。,凝 固 酶,游離 凝 固 酶,結(jié)合 凝 固 酶,協(xié)同因子,凝血酶樣物質(zhì),纖維蛋白原(液態(tài)）,纖維蛋白（固態(tài)）,血漿凝固,（試管法）,（纖維蛋

5、白原受體）,血漿纖維蛋白原,+,細(xì)菌凝聚,（玻片法）,（1）試管法 取兩支滅菌小試管，每管加入1：4稀釋的兔血漿0.5ml，用滅菌接種環(huán)沾取金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物，在一小試管內(nèi)壁研磨使成均勻的混懸液；另一試管用表皮葡萄球菌做為對(duì)照。將兩試管放在37水浴箱或溫箱中24h 觀察結(jié)果。觀察結(jié)果時(shí)使試管傾斜，凡血漿呈現(xiàn)膠胨樣凝集者即為陽(yáng)性，仍呈液狀者為陰性。,沾菌的接種環(huán)在此處 管內(nèi)壁上輕輕研磨,（2）玻片法 在載玻片上各滴兔血漿、鹽水一滴，取金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌平板培養(yǎng)物加入其中混勻，立即觀察結(jié)果。有明顯小凝塊出現(xiàn)為陽(yáng)性，無(wú)此現(xiàn)象者時(shí)為陰性。此法較簡(jiǎn)便，但不如試管法銳敏、準(zhǔn)確。,Procedu

6、res:,Rabbit plasma,NS,S.aureus,S. epidermidis,After mixing,4.抗 O 試 驗(yàn),原理：乙型溶血性鏈球菌產(chǎn)生溶血毒素“O” （SLO ），具有很強(qiáng)的抗原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體，于感染后23周至病愈后數(shù)月到一年可檢出SLO抗體，風(fēng)濕熱病人血清中SLO抗體顯著升高，一般其效價(jià)在1：400以上。因此，測(cè)定SLO抗體含量，可了解近期內(nèi)有無(wú)鏈球菌感染的病史，作為風(fēng)濕病輔助診斷的指標(biāo)。,SLO膠乳試劑測(cè)定抗O試驗(yàn)（反應(yīng)板法）,血清中ASLO的測(cè)定可用于鏈球菌感染的診斷，ASLO高滴度的病人血清被適量的SLO中和后還有多余的ASLO，這些多余的抗體即與

7、SLO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰、均勻的凝集顆粒。SLO膠乳試劑是根據(jù)免疫學(xué)原理將羥化聚苯乙烯膠乳與SLO共價(jià)交聯(lián)作為抗原，用于測(cè)定受鏈球菌感染病人血清中的ASLO。,2. Soluble streptolysin O，shake up 13 minute;,3. Soluble streptolysin O combine with latex beads ， shake up 58 minute,Negative control,Positive control,Patient Serum,ASO test: ASO titer 1: 400 units, help to diagnose rheumatic fever.,Uniformity tur