GB 30615-2014 食品添加劑 竹葉抗氧化物

  中華人民共和國國家標準  0615 2014 2014布  2014施  食品安全國家標準  食品添加劑   竹葉抗氧化物  0615 2014 1 食品安全國家標準  食品添加劑   竹葉抗氧化物  1 范圍  本標準適用于 以剛竹屬  (竹種的葉為原料，經(jīng)提取、精制而成的食品添加劑竹葉抗氧化物。  注： 用于生產(chǎn)食品添加劑竹葉抗氧化物的竹葉原料為被子植物門（ 單子葉植物綱（ 禾本目（ 禾本科（ 竹亞科（ 剛竹屬（ 種 1 2 年生的葉子。  2 分 類  竹葉抗氧化物根據(jù)其溶解性分為水溶性產(chǎn)品和脂溶性產(chǎn)品。其水溶性產(chǎn)品的主要有效成分為竹葉碳苷黃酮（異葒草苷、葒草苷、牡荊苷、異牡荊苷）和對香豆酸、綠原酸等；脂溶性產(chǎn)品的主要有效成分為對香豆酸、阿魏酸、苜蓿素以及竹葉黃酮的酯化產(chǎn)物等。  3 主要成分的 化學名稱、結(jié)構(gòu)式、分子式 和 相對分子質(zhì)量  葒草苷  化學名稱  5,7,3 ,4 6分子式    結(jié)構(gòu)式  相對分子質(zhì)量   2007年國際相對原 子質(zhì)量）  香豆酸  0615 2014 2 化學名稱  3-（ 4烯酸  分子式    結(jié)構(gòu)式  相對分子質(zhì)量   2007年國際相對原子質(zhì)量）  4  技術(shù)要求  感官要求：應(yīng)符合表 1 的規(guī)定。  表 1 感官要求  項    目  要    求  檢驗方法  色澤  黃色至黃棕色或黃褐色，吸濕時色漸變深  取適量 試樣 置于 50 杯中，在自然光下觀察色澤和狀態(tài)，嗅其氣味  氣味  水溶性產(chǎn)品具有典型的竹葉清香；脂溶性產(chǎn)品清香淡、略帶酯味  狀態(tài)  粉末狀，允許有少量顆粒  理化指標：應(yīng)符合表 2 的規(guī)定。  表 2 理化指標  項      目  指     標  檢驗方法  水溶性  脂溶性  總酚 , w/%    錄 A 中 葒草苷 , w/%        附錄 A 中 香豆酸 , w/%      錄 A 中 溶解度 （ 25 ） /( g/100 g)      附錄 A 中 酸乙酯溶解度 （ 25 ） ,( g/100 g)      錄 A 中 燒殘渣 , w /%      錄 A 中 燥減 量 , w /%  B 砷  (以  )/（ mg/  B/T    （ （ mg/  B    ： 水溶性產(chǎn)品可用糊精稀釋 。  0615 2014 3 附   錄   A  檢 驗方法   全提示  本標準試驗方法中使用的部分試劑具有毒性或腐蝕性，按相關(guān)規(guī)定操作，操作時需小心謹慎。若濺到皮膚上應(yīng)立即用水沖洗，嚴重者應(yīng)立即治療。在使用 揮 發(fā) 性酸時，要在通風柜中進行。  般規(guī)定  本標準所用試劑和水，在沒有注明其他要求時，均指分析純試劑和  6682規(guī)定的三級水。試驗中所用 標準溶液、雜質(zhì)標準溶液、制劑及制品 , 在沒有注明其他 要求 時，均按  601、  602、  603的 規(guī)定 制備 。 實驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時 ， 均指水溶液 。  別 試驗  學試劑鑒別  劑和材料  醇 水溶液（ 95+5） 。  氯化鐵 乙醇溶液 ： 10 g/L。  氯化鋁 乙醇溶液 : 10 g/L。  別方法  取約 0.5 g 試樣溶于 100 取此溶液 1 3滴 三氯化鐵 乙醇溶液，溶液顯深藍色或藍紫色 。  取約 0.5 g 試樣溶于 100 此溶液 1 3滴 三氯化鋁 乙醇溶液，溶液顯鮮黃色 。  譜學 鑒別  外透射光譜鑒別  采用溴化鉀壓片法，按照  6040 的規(guī)定 進行試驗，試樣的紅外光譜應(yīng)與對照圖譜一致（對照圖譜見附錄 B）。  外吸收光譜鑒別  稱取 約 15 00 醇 中 ，在 200 600 樣的紫外光譜應(yīng)與對照圖譜一致（對照圖譜見附錄 C）。  效成分分析及其指 紋圖譜  法提要  0615 2014 4 試樣用色譜純甲醇溶解，以乙腈  1+99） 為流動相，用以 填料的液相色譜柱和紫外檢測器或二級管陣列檢測器，用含異葒草苷、葒草苷、異牡荊苷、牡荊苷、對香豆酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸等八個對照品的標準圖譜和試樣圖譜進行對照，確定竹葉抗氧化物產(chǎn)品的有效成分及類別差異。  劑和材料  腈（色譜純）。  醇（色譜純）。  乙酸（優(yōu)級純）。   （ 超純水 ）。  葒草苷、葒草苷、異牡荊苷、牡荊苷、對香豆酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸標準品： 純度      標溶 液：分別稱取上述 8個對 照品 （ 各 5 確至 g） ，用甲醇溶解并定容至 10 勻，置冰箱中保存，此溶液為八個對照品的混標溶液。  器和設(shè)備  效液相色譜儀。  外光檢測器：可變波長。  據(jù)處理系統(tǒng)：色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機。  考色譜條件  推薦的色譜柱及典型操作條件見表 葉抗氧化物指紋圖譜測定典型高效液相色譜圖見附錄  他能達到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用 。  表 譜柱和典型色譜操作條件  色譜柱   ， 柱長 250  內(nèi)徑 4.6 裝 充物，粒徑 5 m 或 是相當者  柱溫 / 0 流動相  1+99）  梯度洗脫條件  0 15 A 15%， B 85%； 15 25 A 15% 40%， B 85% 60%； 25  34  40%， B 60%； 34 40 A 40% 15%， B 60% 85 % 流動速度 /（ mL/ 1 檢測器檢測波長 /30 進樣量 /L 10 析步驟   試樣 處理  準確稱取試樣 100 精確至  g） ，用甲醇溶解并定容至 100 微孔濾膜（ m）過濾，即得試樣溶液。  樣 測定  準確吸取試樣溶液 10 L，在規(guī)定色譜條件 下，進行色譜分析，以保留時間定性。試樣的高效液相色譜圖應(yīng)與對照 圖譜一致（對照圖譜見附錄 D）。  酚測定  法提要  0615 2014 5 福林（ 劑在堿性條件下極不穩(wěn)定，可使酚類化合物還原而呈藍色反應(yīng)。mg/mg/濃度與吸光度符合比爾定律，可用對羥基苯甲酸為對照品進 行定量比色測定得試樣的總酚含量 。  劑和材料  醇 水 溶液 （ 3+7） 。  醇 水 溶液 （ 9+1）。  酸鈉 溶液： 200 g/L。  羥基苯甲酸標準品：純度    羥基苯甲酸標準溶液： mg/稱取干燥至恒重的對羥基苯甲酸標準品 25.0 乙醇水 溶液 （ 溶解并定容至 100  林試劑 （自行配制或外購） ：于 2000 00  、 25  、 700 50 5%磷酸 （ 、 100 火沸騰回流 10 h，去除冷凝器后，加入 50  、 50 99%），  搖勻，在通風柜內(nèi)進行，再煮沸 15 去除過量的溴，冷卻后加水定容至 1000 合均勻，過濾。試劑呈金黃色，儲存于棕色瓶內(nèi)，使用時以 1份原液于 2份水稀釋均勻。  器和設(shè)備  光光度計。  分之一電子天平：感量  g。  液槍（或移液管）。  量瓶。  定步驟  樣 處理  準確 稱取竹葉抗氧化物試樣 100 確至 g），水溶性產(chǎn)品用 乙醇 水 溶 液 （ 溶解并定容至 100 溶性產(chǎn)品用少量 乙醇 水 溶液 （ 溶解后、再用乙醇 水 溶液 （ 定容至 100 定性濾紙過濾，即得試樣溶液。  準曲線的繪制  準確吸取對羥基苯甲酸標準溶液 0 當于對羥基苯甲酸 0 入 25 塞試管中，分別用水稀釋至 10.0 加入 1.0 林試劑和 2.0 0%碳酸鈉溶液 ，試管在 50 1 的恒溫水浴中加熱 30 后用水冷卻并稀釋至 25 溫放置 30  1 45 吸收度為縱 坐 標、濃度為橫 坐 標繪制標準曲線或求取線性回歸方程。  樣 測定  準確吸取試樣溶液 1 上述標準曲線制作中的操作步驟 （ 于 745 定。根據(jù)標準工作曲線，求出相當于試樣吸光度的對羥基苯甲酸含量。  果計算  總酚 （以對羥基苯甲酸計） 的質(zhì)量分數(shù)  公式（ 算：  0615 2014 6 100=)(1221 （  式中：   依據(jù)標準曲線計算出的 待 測液中 總酚 含量 的數(shù)值 ，單位為毫克（    待測液總體積 的數(shù)值 ，單位為毫升 （    供試樣取樣 質(zhì) 量 的數(shù)值 ，單位為毫克（    待測液分取體積 的數(shù)值 ，單位為毫升（   實驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準（保留一位小數(shù)）。在 重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的 相 對 差值不超過   葒草苷測定  法提要  試樣經(jīng)甲醇 溶解，以乙腈  1+99） 為流動相，用以 填料的液相色譜柱和紫外檢測器或二極管陣列檢測器，對試樣中的異葒草苷進行反相高效液相色譜分離和測定，與標準品保留時間比較定性，峰面積外標法定量。  劑和材料  腈（色譜純）。  醇（色譜純）。  乙酸（優(yōu)級純）。   （ 超純水 ）。  葒草苷標準品： 純度     葒草苷標準溶液 ： 準確稱取異葒草苷標準品 5 確至  g），用甲醇溶解并定容至 10 勻，置冰箱中保存。此溶液 1 .5  器和設(shè)備   效液相色譜儀。  外光檢測器：可變波長。  據(jù)處理系統(tǒng)：色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機。  考色譜條件  推薦的色譜柱及典型操作條件見表 他能達到同等分離程度的色譜柱和色譜操作條件均可使用 。  表 譜柱和典型色譜操作條件  色譜柱   ， 柱長 250  內(nèi)徑 4.6 裝 充物，粒徑 5 m 或 是相當者  柱溫 / 0 流動相  1+99）  梯度洗脫條件  0 15 A 15%， B 85%； 15 25 A 15% 40%， B 85% 60%； 25  34  40%， B 60%； 34 40 A 40% 15%， B 60% 85 % 流動速度 /（ mL/ 1 檢測器檢測波長 /30 進樣量 /L 10 0615 2014 7 析步驟  樣 處理  準確稱取竹葉抗氧化物試樣 100 精確至 g） ，用甲醇溶解并定容至 100 微孔濾膜（ m ）過濾，即得試樣溶液。  準曲線的繪 制  準確吸取一定量的異葒草苷標準溶液，分別稀釋 4、 8、 10、 16、 20 和 40 倍，進樣 10 L，在規(guī)定色譜條件下，進行色譜分析 。 根據(jù)異葒草苷標準溶液的不同進樣量及相應(yīng)譜峰面積，以色譜峰面積為縱坐標、異葒草苷濃度為橫坐標，繪制標準曲線。  樣 測定  準確吸取試樣溶液 10 L，在規(guī)定色譜條件下，進行色譜分析，以保留時間定性，峰面積外標法定量。  果計算  異葒草苷 的質(zhì)量分數(shù) 公式（ 算：  100=)(331 （  式中：   依 據(jù)標準曲線計算出的 待 測液中的異葒草苷濃度 的數(shù)值 ，單位為毫克每毫升（ mg/；   供試樣定容體積 的數(shù)值 ，單位為毫升（    供試樣取樣 質(zhì)量的數(shù)值 ，單位為毫克（ 。  實驗結(jié)果以平 行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準（保留一位小數(shù)）。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的 相對 差值不超過   香豆酸測定  法提要  試樣經(jīng)甲醇溶解，以乙腈  1+99） 為流動相，用以 填料的液相色譜柱和紫外檢測器或二極管陣列檢測器，對試樣中的對香豆酸進行反相高效液相色譜分離和測定，與標準品保留 時間比較定性，峰面積外標法定量。  劑和材料  腈（色譜純）。  醇（色譜純）。  乙酸（優(yōu)級純）。   （ 超純水 ）。  香豆酸標準品：純度    香豆酸標準溶液 ：準確稱取對香豆酸標準品 10 確至 g），用甲醇溶解并定容至 10 勻，置冰箱中保存。此溶液 1 香豆酸 1.0  器和設(shè)備  效液相色譜儀。  0615 2014 8 外光檢測器：可變波長。  據(jù)處理系統(tǒng)：色譜工作站或數(shù)據(jù)處理機。  考色譜條件  推薦的色譜柱及典型操作條件見表 他能達到同等分離程度的色譜柱和色譜操作 條件均可使用 。  表 譜柱和典型色譜操作條件  色譜柱   ， 柱長 250  內(nèi)徑 4.6 裝 充物，粒徑 5 m 或 是相當者  柱溫 / 0 流動相  1+99）  梯度洗脫條件  0 15 A 15%， B 85%； 15 25 A 15% 40%， B 85% 60%； 25  34  40%， B 60%； 34 40 A 40% 15%， B 60% 85 % 流動速度 /（ mL/ 1  檢測器檢測波長 /10 進樣量 /L 10 析步驟  樣 處理  準確稱取竹葉抗氧化物試樣 100  精確至 g） ，用甲醇溶解并定容至 100 微孔濾膜（ m ）過濾，即得試樣溶液。  準曲線的繪制  準確吸取一定量的 對香豆酸 標準溶液，分別稀釋 8、 10、 16、 32、 64、 128 和 256 倍，進樣 10 L，在規(guī)定色譜條件下，進行色譜分析，根據(jù) 對香豆酸 標準溶液的不同進樣量及相應(yīng)譜峰面積，以色譜峰面積為縱坐標、對香豆酸濃度為橫坐標，繪制標準曲線。  樣 測定  準確吸取試樣溶液 10 L，在規(guī)定色譜條件下，進行色譜分析，以保留時間定性，峰面積外標法定量。  果計算  對香豆酸 的質(zhì)量分數(shù) 算：  100=(%)4423 （  式中：   依據(jù)標準曲線計算出的 待 測液中 對香豆酸 濃度 的數(shù)值 ，單位為毫克每毫升（ mg/；   供試樣定容體積 的數(shù)值 ，單位為毫升（    供試樣取樣 質(zhì)量的數(shù)值 ，單位為毫克（   實驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準（保留一位小數(shù)）。在重復性條 件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的 相 對差值不超過   溶解度測定  器和設(shè)備   0615 2014 9 熱恒溫干燥箱。  分之一電子天平：感量  g。  析步驟  取 200 具塞 錐形瓶 ，干燥至恒重（ ，準確稱取 100 確至 g），然后加入 6 g10 確至 g），在 25 條件下邊加邊攪拌，在 5 置 10 出上清液，瓶及殘渣干燥至恒重（ 根據(jù)減輕的質(zhì)量計算水溶解度。  果計算  水溶解度以 示，其數(shù)值以 克每百克 （ g/100 g） 表示，按公式（ 算：  7654 - （  式中：   干燥后 錐形瓶 質(zhì)量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）；   供試樣取樣量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）；   干燥后 錐形瓶 和殘渣 質(zhì)量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）。  實驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準（保留一位小數(shù)）。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果 的 相 對差值不超過   酸乙酯溶解度測定  劑和材料  乙酸乙酯。  器和設(shè)備   熱恒溫干燥箱。  分之一電子天平 ：感量  g。  析步驟  取 200 形瓶 ，干燥至恒重（ ，準確稱取 100 確至 g），然后加入 5 g 10 確至 g），在 25 條件下邊加邊攪拌，在 5 置10 出上清液，瓶及殘渣干燥至恒重（ 根據(jù)減輕的質(zhì)量計算乙酸乙酯溶解度。  果計算  乙酸乙酯 溶解度以 示，其數(shù)值以克每百克 （ g/100 g） 表示，按公式（ 算：  10985 - （  式中：   干燥后 錐形瓶 質(zhì)量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）；   供試樣取樣量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）；   干燥后 錐形瓶 和殘渣 質(zhì)量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）。  實驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準（保留一位小數(shù)）。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的 相 對差值不超過   0615 2014 10 燒殘渣測定  析步驟  稱取約 2 g 試樣（精確至 g），置于預先恒重的坩堝內(nèi)，先用小火緩緩加熱至完全炭化，然后小心移入高溫爐內(nèi)于 600 25 灼燒至恒重。  果計算  灼燒殘 渣 的質(zhì)量分數(shù) 公式（ 算：  100)121312116 （  式中：   坩堝和灼燒殘渣質(zhì)量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）；   坩堝質(zhì)量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）；   坩堝和 供 試樣 質(zhì)量 的數(shù)值 ，單位為克（ g）。  實驗結(jié)果以平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為準（保留一位小數(shù)）。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的 相 對差值不超過 0615 2014 11 附  錄  B 竹葉抗氧化物紅外透射光譜圖  溶性竹葉抗氧化物紅外透射光譜示意圖  水溶性竹葉抗氧化物紅外透射光譜 示意圖 見 圖  圖 水溶性竹葉抗氧化物紅外透射光譜 示意 圖  溶性竹葉抗氧化物紅外透射光譜示意圖  脂溶性竹葉抗氧化物紅外透射光譜 示意圖見 圖  圖 脂溶性竹葉抗氧化物紅外透射光譜 示意 圖  注： 水溶性竹葉抗氧化物在 3400 2930 1610 1075 附近有特征性吸收，分別示酚羥基、苯環(huán) 上碳氫鍵、苯環(huán)骨架及羰基的伸縮振動；脂溶性竹葉抗氧化物在 3400 右的酚羥基峰大大減弱， 1700 近出現(xiàn)強的羰基吸收峰。0615 2014 12 附  錄  C 竹葉抗氧化物 紫外吸收 光譜圖  竹葉 抗氧化物 紫 外 吸收 光譜 示意圖見 圖  圖 竹葉抗氧化物紫外吸收光譜 示意 圖  注： 竹葉抗氧化物的紫外光譜圖在 240 280  300 350 濃度下水溶性產(chǎn)品的紫外吸收強度大于脂溶性產(chǎn)品。  0615 2014 13 附  錄  D 竹葉抗氧化物高效 液相色譜示意圖  溶性 竹葉抗氧化物高效 液相色譜示意圖  水溶性竹葉抗氧化物高效 液相色譜示意圖見 圖  1 綠原酸；                             5 對香豆酸；  2  咖啡酸；