熒光探針及其生物學(xué)研究中的應(yīng)用.ppt

LOGO,有機(jī)熒光探針及其生物學(xué)研究中的應(yīng)用,由Nordri（ ） 設(shè)計(jì)提供,LOGO,由Nordri（ ） 設(shè)計(jì)提供,LOGO,1.金屬離子檢測、PH值測定,由Nordri（ ） 設(shè)計(jì)提供,金屬離子檢測:以Cd2+熒光探針為例。Xiaojun Peng研究組合成了一個(gè)能專識別Cd2+離子的熒光探針，該探針具有較好的細(xì)胞穿透性，并且首次被應(yīng)用于活體細(xì)胞內(nèi)Cd2+的檢測，其機(jī)理為分內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移機(jī)理(IcT)。探針的最大發(fā)射波長為656nm與Cd2+絡(luò)合后藍(lán)移至597nln，而Zn2+及其它金屬離子沒有干擾,PH值測定：Xiaojun Peng 研究組設(shè)計(jì)合成了一個(gè)BODIPY類pH熒光探針，該探針具有很好的化學(xué)穩(wěn)定性，檢測范圍為pH7.6一9.4, 熒光強(qiáng)度隨pH變化15倍之多，而且有很好的水溶性，,LOGO,免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，將已知的抗原或者抗體標(biāo)記上熒光探針，再用這種帶有熒光探針的抗原或者抗體作為分子探針去檢測組織內(nèi)的抗體或者抗原，然后用相應(yīng)的熒光采集器檢測熒光，從而確定抗原或者抗體的位置，性質(zhì)，甚至可以輔以定量檢測技術(shù)，定量檢測抗原或者抗體。 。目前最為常用的有機(jī)熒光探針為異硫氰酸熒光素（FITC），橙黃色，性質(zhì)穩(wěn)定，可保存兩年以上，最大吸收光譜為490-495nm，最大發(fā)射光譜為520-530nm，,2.免疫學(xué)應(yīng)用,由Nordri（ ） 設(shè)計(jì)提供,LOGO,近年來，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，有機(jī)熒光探針在核酸的檢測中發(fā)揮著重要的作用。,3.核酸檢測,由Nordri（ ） 設(shè)計(jì)提供,一：熒光定量PCR:所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法 常用的探針：TaqMan熒光探針 ，SYBR熒光染料 二：熒光原位雜交 ：熒光原位雜交技術(shù)原理是將DNA探針用生物素和毛地黃毒苷等熒光染料標(biāo)記，然后將標(biāo)記的探針直接原位雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異結(jié)合，通過熒光雜交信號來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維上的定位、定性、相對定量分析。,LOGO,熒光探針是一種極好的生物分子傳感器,具備靈敏度高反應(yīng)時(shí)間迅速等特點(diǎn)，特別是在檢測小分子等方面，近年來在細(xì)胞學(xué)檢測中應(yīng)用十分廣泛。,4.細(xì)胞學(xué)應(yīng)用,由Nordri（ ） 設(shè)計(jì)提供,細(xì)胞凋亡的檢測 : 活化的Caspase-3能夠特異切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽鍵。根據(jù)這一特點(diǎn)，設(shè)計(jì)出熒光物質(zhì)偶聯(lián)的短肽Ac-DEVD-AMC。在共價(jià)偶聯(lián)時(shí)，AMC不能被激發(fā)熒光，短肽被水解后釋放出AMC，自由的AMC才能被激發(fā)發(fā)射熒光。根據(jù)釋放的AMC熒光強(qiáng)度的大小，可以測定 caspase-3的活性，從而反映Caspase-3被活化的程度,細(xì)胞表面特征的檢測: 細(xì)胞表面通常表達(dá)大量的分子，如：CD分子，細(xì)胞因子受體等分子，這些分子在不同的細(xì)胞表達(dá)的種類和數(shù)量是不同的，從而不同的細(xì)胞有著不同的表面分子表達(dá)譜，因此可以用相應(yīng)的有機(jī)熒光探針對細(xì)胞表面的分子進(jìn)行標(biāo)記，或者用細(xì)胞表面的分子的單克隆抗體的熒光探針進(jìn)行標(biāo)記，從而實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞表面特征的檢測。如NK細(xì)胞表面的CD56分子，T細(xì)胞表面的CD3分子，CD40L分子等,LOGO,以上概述了部分類型的有機(jī)熒光探針及在生物學(xué)研究中的應(yīng)用情況，其實(shí)它的應(yīng)用遠(yuǎn)不止于此。隨著熒光探針技術(shù)的不斷發(fā)展和完善,必然會給目前較為熱門的基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物芯片以及等藥物作用機(jī)制等領(lǐng)域帶來新的發(fā)展契機(jī),提供非常有價(jià)值的方法和信息。,由Nordri（ ） 設(shè)計(jì)提供,LO