生物化學實驗記錄和實驗報告的書寫

第二節(jié) 實驗記錄和實驗報告的書寫正確記錄實驗過程及書寫實驗報告，是訓練學生進行正規(guī)實驗訓練的重要內(nèi)容。實驗是在理論指導下的科學實踐，目的在于經(jīng)過實踐，掌握科學觀察的基本方法和技能，培養(yǎng)學生的科學思維、分析判斷和解決實際問題的能力。也是培養(yǎng)探求真知、尊重科學事實和真理的學風，以及培養(yǎng)科學態(tài)度的重要環(huán)節(jié)。為此，要求學生在實驗前必須預習、理解從基本原理和實驗基本操作步驟、注意事項，列出所需試劑和儀器，實驗中組織安排好時間，嚴肅認真地執(zhí)行操作，細致觀察變化，如實作好記錄、書寫實驗報告等。一、實驗記錄實驗記錄要整潔、字跡清楚。實驗中觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果和數(shù)據(jù)，耍及時地直接記在記錄本。原始記錄必須準確簡練、詳盡、清楚。記錄時，應做到如實正確記錄實驗結(jié)果，不可夾雜主觀因素。在實驗條件下觀察到的現(xiàn)象，也應如實仔細地記錄下來。在定量實驗中觀測到的數(shù)據(jù)，如稱量物的重量、滴定管的讀數(shù)、光電比色計的光密度值等，都應設(shè)計一定的表格準確記錄。并應根據(jù)儀器的精確度準確記錄有效數(shù)字。要求對實驗的每個結(jié)果都應正確無遺漏地做好記錄。實驗中使用儀器的類型、試劑的規(guī)格、化學反應式、分子量、濃度等，都應記錄清楚。實踐過程中，應一絲不茍，努力培養(yǎng)嚴謹?shù)目茖W作風。完整的實驗記錄應包括日期、實驗題目、目的、操作、結(jié)果。二、實驗報告實驗結(jié)束后，應及時整理和總結(jié)實驗結(jié)果及記錄，寫出實驗報告。實驗報告應包括實驗名稱、實驗日期、目的要求、原理、試劑配制、儀器設(shè)備、操作方法；實驗結(jié)果、討論等項內(nèi)容。書寫實驗報告時，目的和要求、原理以及操作方法部分應作簡單扼要的敘述，但對實驗條件和操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)必須寫清楚。對于實驗結(jié)果部分，應根據(jù)實驗的要求，把所得的實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)進行整理、歸納、分析和對比，并盡量總結(jié)成各種圖表，如標準曲線圖以及實驗組與對照組實驗結(jié)果的比較表等。還應針對實驗結(jié)果進行必要的說明和分析。討論部分不是對結(jié)果的重述，而是對實驗方法，實驗結(jié)果和異?，F(xiàn)象進行探討和評論，以及對于實驗設(shè)計的認識、體會和建議。一般實驗，要有結(jié)論，結(jié)論要簡要扼要，說明本次實驗所獲得的結(jié)果。1. 實驗報告的書寫包括哪些內(nèi)容？2. 玻璃儀器的清洗有哪些基本要求？3. 請分別敘述分光光度技術(shù)、層析技術(shù)、電泳技術(shù)原理、及實驗注意事項4. 血液樣品、尿液樣品及組織樣品制備的常用方法有哪些？實驗八 血清乳酸含量的測定（乳酸脫氫酶法）實驗目的掌握血清乳酸含量測定的原理，了解血清乳酸測定的常用方法。實驗原理乳酸脫氫酶（LD）在輔酶I(NAD)存在下將乳酸氧化成丙酮酸，同時伴有NAD轉(zhuǎn)化成還原型輔酶I（NADH），其反應式如下：L乳酸NAD丙酮酸NADHH在pH值為9.8時，平衡偏向乳酸氧化為丙酮酸一方。加入肼或氨基脲與丙酮酸生成產(chǎn)物而使丙酮酸不斷被除去，使反應進一步向右移動，從而驅(qū)動反應完成。通過分光光度法（340nm）或熒光法測定NADH的生成量來測得樣本中乳酸得量。NADH吸光度的升高速率與樣品中乳酸濃度成正比，故用連續(xù)監(jiān)測法測定乳酸濃度。實驗器材1. 分光光度計2. 試管3. 移液管4. 恒溫水浴箱5. 注射器6. 離心機實驗試劑1. TrisEDTA肼緩沖液 將三羥甲基氨基甲烷（Tris）60.5g和乙二胺四乙酸（EDTA）4g溶解于800ml水中，加水合肼11ml，調(diào)pH值到9.8，再定容到1000ml。4保存。2. 0.1mmol/L輔酶I 稱輔酶I65.4mg，加塞保存于20。用前加3ml水溶解。3. 乳酸脫氫酶 純化的乳酸脫氫酶硫酸銨懸液，比活力約為550u/mg。4. 應用基質(zhì)液 取緩沖液27ml，輔酶I液3ml，乳酸脫氫酶液40ul混勻。4可穩(wěn)定24h.5. 20mmol/L乳酸儲存標準液 稱取乳酸鋰192mg溶于100ml水中，4可穩(wěn)定6個月。6. 乳酸應用標準液 分別取20mmol/L乳酸儲存液1.0和2.5ml，各用水在10ml容量瓶中定容至10ml，其濃度分別為2和5mmol/L.4下可穩(wěn)定2個月。實驗步驟1. 標本采集：為了避免血液乳酸在采血時發(fā)生變化，受試者應處于空腹休息狀態(tài)，最好不用止血帶以防止前臂缺氧而致乳酸含量增加。進針后不立即采血，等幾分鐘后再采血，然后放入預置有碘乙酸鈉的標本管中，碘乙酸鈉的最終濃度為0.05。待凝固后分離血清。2. 取10X100cm小試管3只，分別寫清測定管，標準管和空白管，然后按下表進行操作。表中所用試劑適合于自動化儀器操作，如用手工法而又無小比色皿可適當放大標本及試劑量。血清乳酸脫氫酶法測定乳酸操作表（單位：ml）測定管標準管空白管血清樣本0.02乳酸應用標準液0.02重蒸餾水0.02應用基質(zhì)1.01.01.0立即混勻，37保溫5min，于340nm用空白管調(diào)零，測定各管吸光度變化速率。結(jié)果分析血清中乳酸量X標準管乳酸濃度（mmoml/L）安靜狀態(tài)下，健康人靜脈血內(nèi)乳酸含量為0.52.2mmoml/L，動脈血乳酸水平低于靜脈血。餐后比基礎(chǔ)水平高2050。腦脊液乳酸水平預血乳酸水平無關(guān)，16歲以下兒童得腦脊液乳酸水平為1.12.8mmoml/L乳酸是糖酵解的最終產(chǎn)物，在生理條件下，大多數(shù)組織以有氧氧化為主，但少數(shù)組織如皮膚，視網(wǎng)膜，腎髓質(zhì)和血細胞等組織在有氧時也能進行糖酵解，其中以皮膚的糖酵解速度最快。成熟的紅細胞僅靠糖酵解獲得能量。在病理情況下，如嚴重貧血、大量出血、呼吸障礙及心血管疾患等所引起的機體缺氧時，致使糖酵解過度，造成乳酸生成過多，導致機體產(chǎn)生乳酸酸中毒。運動時乳酸主要在骨骼肌中生成，然后透過細胞膜進入血液。在正常情況下，乳酸在生成和消除處于動態(tài)平衡中，血乳酸濃度為1-2mmol/L，運動員血乳酸安靜值與常人無差異，但是在賽前情緒緊張時，血乳酸濃度安靜值有可能升高到3mmol/L左右，這與腎上腺分泌增多有關(guān)。運動時血乳酸濃度上升，上升的起始運動強度約在50%-60%VO2max，耐力運動員由于有氧代謝能力強，升高的起始強度推遲到60%-70%VO2max。運動時血乳酸濃度的變化與運動強度有關(guān)。劇烈運動時，肌肉內(nèi)糖的無氧分解加強，血乳酸濃度顯著升高。運動時血乳酸濃度的變化與所動用的能量系統(tǒng)有關(guān)。以磷酸原系統(tǒng)供能為主的運動，血乳酸生成量較少，血乳酸一般不超過4mmol/L；以糖酵解系統(tǒng)供能為主的運動，血乳酸可達15mmol/L 以上；而以有氧氧化系統(tǒng)供能為主的運動，血乳酸在4mmol/L左右。速度耐力性運動項目的高水平運動員，運動成績好者，運動后血乳酸最大濃度值也高；耐力性運動項目的運動員，在完成相同亞極量運動負荷時，優(yōu)秀運動員運動后血乳酸相對較低。根據(jù)這一特點可用以評定運動員訓練水平或選材?？筛鶕?jù)運動后血乳酸的消除速率來評定運動員有氧代謝能力，若恢復速度快，表示有氧代謝能力強。所以用測定血乳酸含量變化作為評定機體有氧化代謝和無氧代謝能力以及訓練手段、方法的重要指標。注意事項血乳酸測定時取樣時間非常重要，安靜值應在早晨起床前安靜時采樣；運動后血乳酸的測定應根據(jù)不