GB5009.154-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素B6的測定.pdf

中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn)G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 6食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素B6的測定2 0 1 6 - 1 2 - 2 3發(fā)布2 0 1 7 - 0 6 - 2 3實施中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會國 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局發(fā) 布G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 6 前 言 本標(biāo)準(zhǔn)代替G B/T5 0 0 9.1 5 42 0 0 3 食品中維生素B6的測定 、G B5 4 1 3.1 32 0 1 0 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素B6的測定 。本標(biāo)準(zhǔn)與G B/T5 0 0 9.1 5 42 0 0 3相比, 主要變化如下: 標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“ 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素B6的測定” ; 增加了高效液相色譜法。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 61 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素B6的測定1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中維生素B6的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)第一法為高效液相色譜法, 適用于添加了維生素B6的食品測定; 第二法為微生物法, 適用于各類食品中維生素B6的測定。第一法 高效液相色譜法2 原理試樣經(jīng)提取等前處理后, 經(jīng)C1 8色譜柱分離, 高效液相色譜-熒光檢測器檢測, 外標(biāo)法定量測定維生素B6( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 的含量。3 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 辛烷磺酸鈉(C8H1 7N a O3S) 。3.1.2 冰乙酸(C2H4O2) 。3.1.3 三乙胺(C6H1 5N) : 色譜純。3.1.4 甲醇(CH4O) : 色譜純。3.1.5 鹽酸(HC l) 。3.1.6 氫氧化鈉(N a OH) 。3.1.7 淀粉酶: 酶活力1.5U/m g。3.2 試劑配制3.2.1 鹽酸溶液(5.0m o l/L) : 量取4 5m L鹽酸, 用水稀釋并定容至1 0 0m L。3.2.2 鹽酸溶液(0.1m o l/L) : 吸取9m L鹽酸, 用水稀釋并定容至10 0 0m L。3.2.3 氫氧化鈉溶液(5.0m o l/L) : 稱取2 0g氫氧化鈉, 加5 0m L水溶解, 冷卻后, 用水定容至1 0 0m L。3.2.4 氫氧化鈉溶液(0.1 m o l/L) : 稱取0.4g氫氧化鈉, 加5 0 m L水溶解, 冷卻后, 用水定容至1 0 0m L。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品3.3.1 鹽酸吡哆醇(C8H1 2C l NO3,C A S號:5 8 - 5 6 - 0) : 純度9 8%, 或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 62 的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。3.3.2 鹽酸吡哆醛(C8H1 0C l NO3,C A S號:6 5 - 2 2 - 5) : 純度9 9%, 或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。3.3.3 雙鹽酸吡哆胺(C8H1 4C l2N2O3,C A S號:5 2 4 - 3 6 - 7) : 純度9 9%, 或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1 吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1m g/m L) : 準(zhǔn)確稱取6 0.8m g鹽酸吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)品, 用0.1m o l/L鹽酸溶液溶解后定容到5 0m L, 在-2 0下避光保存, 有效期1個月。3.4.2 吡哆醛標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1m g/m L) : 準(zhǔn)確稱取6 0.9m g鹽酸吡哆醛標(biāo)準(zhǔn)品, 用0.1m o l/L鹽酸溶液溶解后定容到5 0m L, 在-2 0下避光保存, 有效期1個月。3.4.3 吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1m g/m L) : 準(zhǔn)確稱取7 1.7m g雙鹽酸吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)品, 用0.1m o l/L鹽酸溶液溶解后定容到5 0m L, 在-2 0下避光保存, 有效期1個月。3.4.4 維生素B6混合標(biāo)準(zhǔn)中間液(2 0g/m L) : 分別準(zhǔn)確吸取吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺的標(biāo)準(zhǔn)儲備液各1.0 0m L, 用0.1m o l/L鹽酸溶液稀釋并定容至5 0m L。臨用前配制。3.4.5 維生素B6混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液: 分別準(zhǔn)確吸取維生素B6混合標(biāo)準(zhǔn)中間液0.5m L、1.0m L、2.0m L、3.0 m L、5.0 m L, 至1 0 0 m L容量瓶中, 用水定容。該標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0.1 0g/m L、0.2 0g/m L、0.4 0g/m L、0.6 0g/m L、1.0 0g/m L。臨用前配制。注:標(biāo)準(zhǔn)儲備液在使用前需要進(jìn)行濃度校正, 校正方法參照附錄A。4 儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜儀: 帶熒光檢測器。4.2 天平: 感量1m g和0.0 1m g。4.3 p H計: 精度0.0 1。4.4 渦旋混合器。4.5 超聲波振蕩器。4.6 分光光度計。4.7 恒溫培養(yǎng)箱, 或性能相當(dāng)者。5 分析步驟5.1 試樣制備5.1.1 含淀粉的試樣a) 固體試樣: 稱取混合均勻的固體試樣約5g( 精確至0.0 1g) , 于1 5 0m L錐形瓶中, 加入約2 5m L4 55 0的水, 混勻。加入約0.5g淀粉酶, 混勻后向錐形瓶中充氮, 蓋上瓶塞, 置5 06 0培養(yǎng)箱內(nèi)約3 0m i n。取出冷卻至室溫。b) 液體試樣: 稱取混合均勻的液體試樣約2 0g( 精確至0.0 1g) 于1 5 0m L錐形瓶中, 混勻。加入約0.5g淀粉酶, 混勻后向錐形瓶中充氮, 蓋上瓶塞, 置5 06 0培養(yǎng)箱內(nèi)約3 0m i n。取出冷卻至室溫。5.1.2 不含淀粉的試樣a) 固體試樣: 稱取混合均勻的固體試樣約5g( 精確至0.0 1g) , 于1 5 0m L錐形瓶中, 加入約2 5G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 63 m L4 55 0的水, 混勻。靜置5m i n 1 0m i n, 冷卻至室溫。b) 液體試樣: 稱取混合均勻的液體試樣約2 0g( 精確至0.0 1g) 于1 5 0m L錐形瓶中。靜置5m i n1 0m i n。5.1.3 待測液的制備用鹽酸溶液, 調(diào)節(jié)上述試樣溶液的p H至1.70.1, 放置約1m i n。再用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)試樣溶液的p H至4.50.1。把上述錐形瓶放入超聲波振蕩器中, 超聲振蕩約1 0m i n。將試樣溶液轉(zhuǎn)移至5 0m L容量瓶中, 用水沖洗錐形瓶。洗液合并于5 0m L容量瓶中, 用水定容至5 0m L。另取5 0m L錐形瓶, 上面放入漏斗和濾紙, 把定容后的試樣溶液倒入其中, 自然過濾。濾液再經(jīng)0.4 5m微孔濾膜過濾, 用試管收集, 轉(zhuǎn)移1m L濾液至進(jìn)樣瓶作為試樣待測液。注:操作過程應(yīng)避免強光照射。5.2 儀器參考條件儀器參考條件列出如下:a) 色譜柱:C1 8柱, 柱長1 5 0mm, 柱內(nèi)徑4.6mm, 柱填料粒徑5m, 或相當(dāng)者;b) 流動相: 甲醇5 0m L、 辛烷磺酸鈉2.0g、 三乙胺2.5m L, 用水溶解并定容到10 0 0m L后, 用冰乙酸調(diào)p H至3.00.1, 過0.4 5m微孔濾膜過濾;c) 流速:1m L/m i n;d) 柱溫:3 0;e) 檢測波長: 激發(fā)波長2 9 3n m, 發(fā)射波長3 9 5n m;f) 進(jìn)樣體積:1 0L。5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將維生素B6混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入高效液相色譜儀中, 測定各組分的峰面積, 以相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度為橫坐標(biāo), 以峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.4 試樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中, 得到各組分相應(yīng)的峰面積, 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測試樣溶液中維生素B6各組分的濃度。6 分析結(jié)果的表述試樣中維生素B6各組分的含量按式(1) 計算:Xi=Vm1 0 010 0 0(1) 式中:Xi 試樣中維生素B6各組分的含量, 單位為毫克每百克(m g/1 0 0g) ; 根據(jù) 標(biāo) 準(zhǔn) 曲 線 計 算 得 到 的 試 樣 中 維 生 素B6各 組 分 的 濃 度, 單 位 為 微 克 每 毫升(g/m L) ;V 試樣溶液的最終定容體積, 單位為毫升(m L) ;m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) ;1 0 0 換算為1 0 0克樣品中含量的換算系數(shù);10 0 0 將濃度單位g/m L換算為m g/m L的換算系數(shù)。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 64 試樣中維生素B6的含量按式(2) 計算:X=X醇+X醛1.0 1 2+X胺1.0 0 6(2) 式中:X 試樣中維生素B6( 以吡哆醇計) 的含量, 單位為毫克每百克(m g/1 0 0g) ;X醇 試樣中吡哆醇的含量, 單位為毫克每百克(m g/1 0 0g) ;X醛 試樣中吡哆醛的含量, 單位為毫克每百克(m g/1 0 0g) ;1.0 1 2 吡哆醛的含量換算成吡哆醇的系數(shù);X胺 試樣中吡哆胺的含量, 單位為毫克每百克(m g/1 0 0g) ;1.0 0 6 吡哆胺的含量換算成吡哆醇的系數(shù)。結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的1 5%。8 其他當(dāng)取樣量為5.0 0g時, 方法檢出限為: 吡哆醇0.0 2 m g/1 0 0g, 吡哆醛0.0 2 m g/1 0 0g, 吡哆胺0.0 2m g/1 0 0g; 方法定量限為: 吡哆醇0.0 5m g/1 0 0g, 吡哆醛0.0 5m g/1 0 0g, 吡哆胺0.0 5m g/1 0 0g。第二法 微生物法9 原理食品中某一種細(xì)菌的生長必須要有某一種維生素的存在, 卡爾斯伯(S a c c h a r o m y c e sC a r l s b r g e n s i s)酵母菌在有維生素B6存在的條件下才能生長, 在一定條作下維生素B6的量與其生長呈正比關(guān)系。用比濁法測定該菌在試樣液中生長的渾濁度, 與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較得出試樣中維生素B6的含量。1 0 試劑和材料除非另有說明, 本方法所用試劑均為分析純, 水為G B/T6 6 8 2規(guī)定的二級水。培養(yǎng)基可使用符合測試要求的商品化的培養(yǎng)基。1 0.1 試劑1 0.1.1 鹽酸(HC l) 。1 0.1.2 硫酸(H2S O4) 。1 0.1.3 氫氧化鈉(N a OH) 。1 0.1.4 吡哆醇Y培養(yǎng)基: 不得含維生素B6生長因子。1 0.1.5 瓊脂 (C1 2H1 8O9)n 。1 0.1.6 氯化鈉(N a C l) 。1 0.1.7 溴甲酚綠(C2 1H1 4B r4O5S) 。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 65 1 0.2 試劑配制1 0.2.1 鹽酸溶液(0.0 1m o l/L) : 吸取0.9m L鹽酸, 用水稀釋并定容至10 0 0m L。1 0.2.2 硫酸溶液(0.2 2m o l/L) : 于20 0 0m L燒杯中加入7 0 0m L水、1 2.3 2 m L硫酸, 用水稀釋至10 0 0m L。1 0.2.3 硫 酸 溶 液 (0. 5 m o l/L) : 于20 0 0 m L燒 杯 中 加 入7 0 0 m L水、2 8 m L硫 酸, 用 水 稀 釋 至10 0 0m L。1 0.2.4 氫氧化鈉溶液(1 0 m o l/L) : 稱取4 0g氫氧化鈉, 加4 0 m L水溶解, 冷卻后, 用水定容至1 0 0m L。1 0.2.5 氫氧化鈉溶液(0.1m o l/L) : 移取1 0m o l/L氫氧化鈉溶液1m L, 用水定容至1 0 0m L。1 0.2.6 生理鹽水(9g/L) : 稱取9g氯化鈉, 用水溶解后定容至10 0 0m L, 于1 2 1下高壓滅菌1 5m i n,冷卻后備用。1 0.2.7 溴甲酚綠溶液(0.4g/L) : 準(zhǔn)確稱取0.1g溴甲酚綠于研缽中, 加1.4m L0.1m o l/L氫氧化鈉溶液研磨, 加少許水繼續(xù)研磨, 直至完全溶解, 用水稀釋到2 5 0m L。1 0.3 培養(yǎng)基 ( 培養(yǎng)基組分與配制方法參見附錄C)1 0.3.1 吡哆醇Y培養(yǎng)基。1 0.3.2 吡哆醇Y瓊脂培養(yǎng)基。1 0.3.3 麥芽浸粉瓊脂培養(yǎng)基。1 0.3.4 YM肉湯培養(yǎng)基。1 0.3.5 YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基。1 0.4 標(biāo)準(zhǔn)品鹽酸吡哆醇(C8H1 2C l NO3,C A S號:5 8 - 5 6 - 0) : 純度9 9%, 或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。1 0.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制1 0.5.1 吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 0 0g/m L) : 準(zhǔn)確稱取1 2 2m g鹽酸吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)品, 用0.0 1m o l/L的鹽酸溶液溶解并定容至10 0 0m L。于4下避光保存, 有效期1個月。1 0.5.2 吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)中間液 (1g/m L) : 準(zhǔn)確 吸取1 m L吡哆醇標(biāo) 準(zhǔn)儲備液, 用 水稀釋并定 容至1 0 0m L。1 0.5.3 吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)工作液(5 0n g/m L) : 準(zhǔn)確吸取5m L吡哆醇標(biāo)準(zhǔn)中間液, 用水定容至1 0 0m L。1 1 儀器和設(shè)備1 1.1 光柵分光光度計。1 1.2 天平: 感量1m g和0.1m g。1 1.3 電熱恒溫培養(yǎng)箱, 或性能相當(dāng)者。1 1.4 高壓釜, 或性能相當(dāng)者。1 1.5 渦旋混合器。1 1.6 離心機。1 1.7 超凈工作臺, 或性能相當(dāng)者。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 66 1 2 分析步驟注:預(yù)包埋了菌種的商業(yè)化維生素B6檢測試劑盒, 其檢測原理相同, 檢測效果相當(dāng), 實際使用時按試劑盒中的操作指南進(jìn)行操作。1 2.1 菌種的制備及保存( 避光處理)1 2.1.1 菌種復(fù)壯: 卡爾斯伯酵母(S a c c h a r o m y c e sc a r l s b e r g e n s i s) ,AT C C#9 0 8 0菌種或等效菌種凍干品, 加入約0.5m LYM肉湯培養(yǎng)基或生理鹽水復(fù)溶, 取幾滴復(fù)溶的菌液分別接種2支裝有1 0m LYM肉湯培養(yǎng)基的試管中, 于3 0水浴振蕩培養(yǎng)2 0h2 4h。1 2.1.2 月儲備菌種制備: 將菌種復(fù)壯培養(yǎng)液劃線接種于YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基( 傳代培養(yǎng)基) 斜面上, 于3 0培養(yǎng)2 0h2 4h, 于28冰箱內(nèi)保存, 此菌種為第一代月儲備菌種; 以后每月將上一代的月儲備菌種劃線接種于YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基( 傳代培養(yǎng)基) 斜面, 于3 0培養(yǎng)2 0h2 4h, 于28冰箱內(nèi)保存, 有效期一個月, 此菌種為當(dāng)月儲備菌種。1 2.1.3 周儲備菌種制備: 每周從當(dāng)月儲備菌種接種于YM肉湯瓊脂培養(yǎng)基( 傳代培養(yǎng)基) 斜面, 于3 0培養(yǎng)2 0h2 4h, 于28冰箱內(nèi)保存, 有效期7d。保存數(shù)星期以上的菌種, 不能立即用作制備接種液之用, 一定要在使用前每天移種一次, 連續(xù)2d 3d, 方可使用, 否則生長不好。1 2.1.4 接種菌懸液制備: 在維生素B6測定實驗前一天, 將周儲備菌種轉(zhuǎn)接于1 0m LYM肉湯培養(yǎng)基( 種子培養(yǎng)液) 中, 可同時制備2管, 于3 0振蕩培養(yǎng)2 0h2 4h, 得到測定用的種子培養(yǎng)液, 從月儲備菌種到種子培養(yǎng)液總代數(shù)不超過5代。將該種子培養(yǎng)液于30 0 0r/m i n下離心1 0m i n, 傾去上清液; 用1 0m L生理鹽水洗滌, 離心, 傾去上清液, 用生理鹽水重復(fù)洗滌2次; 再加1 0m L消毒過的生理鹽水, 將離心管置于渦旋混勻器上充分混合, 使菌種成為混懸液, 將此菌懸液倒入已消毒的注射器內(nèi), 立即使用。1 2.2 試樣處理1 2.2.1 稱取試樣0.5g 1 0g( 精確至0.0 1g, 其中維生素B6含量不超過1 0n g) 放入1 0 0m L錐形瓶中, 加7 2m L0.2 2m o l/L硫酸溶液。放入高壓釜1 2 1下水解5h, 取出冷卻, 用1 0.0m o l/L氫氧化鈉溶液和0.5m o l/L硫酸溶液調(diào)p H至4.5, 用溴甲酚綠做指示劑( 指示劑由黃-黃綠色) , 將錐形瓶內(nèi)的溶液轉(zhuǎn)移到1 0 0m L容量瓶中, 用蒸餾水定容至1 0 0m L, 濾紙過濾, 保存濾液于冰箱內(nèi)備用( 有效期不超過3 6h) 。注:整個試樣處理過程需要注意避光操作。1 2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:3組試管各加0.0 0m L、0.0 2m L、0.0 4m L、0.0 8m L、0.1 2m L和0.1 6m L吡哆醇工作液, 再加吡哆醇Y培養(yǎng)基補至5.0 0m L, 混勻, 加棉塞。1 2.2.3 試樣管的制備: 在試管中分別加入0.0 5m L、0.1 0m L、0.2 0m L樣液, 再加入吡哆醇Y培養(yǎng)基補至5.0 0m L, 用棉塞塞住試管, 將制備好的標(biāo)準(zhǔn)曲線和試樣測定管放入高壓釜1 2 1 下高壓滅菌1 0m i n, 冷至室溫備用。1 2.2.4 接種和培養(yǎng): 每管種一滴接種液, 于3 00.5恒溫箱中培養(yǎng)1 8h2 2h。1 2.3 測定將培養(yǎng)后的標(biāo)準(zhǔn)管和試樣管從恒溫箱中取出后, 用分光光度計于5 5 0n m波長下, 以標(biāo)準(zhǔn)管的零管調(diào)零, 測定各管的吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)管維生素B6所含的濃度為橫坐標(biāo), 吸光度值為縱坐標(biāo), 繪制維生素B6標(biāo)準(zhǔn)工作曲線, 用試樣管得到的吸光度值, 在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到試樣管維生素B6的含量。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 67 1 3 分析結(jié)果的表述試樣提取液中維生素B6的濃度按式(3) 計算:=1+2+33(3) 式中: 試樣提取液中維生素B6的濃度, 單位為納克每毫升(n g/m L) ;i 各試樣測定管中維生素B6的濃度, 單位為納克每毫升(n g/m L) 。試樣中維生素B6的含量按式(4) 計算:X=V1 0 0m1 06(4) 式中:X 試樣中維生素B6( 以吡哆醇計) 的含量, 單位為毫克每百克(m g/1 0 0g) ; 試樣提取液中維生素B6的濃度, 單位為納克每毫升(n g/m L) ;V 試樣提取液的定容體積與稀釋體積總和, 單位為毫升(m L) ;m 試樣質(zhì)量, 單位為克(g) ;1 0 01 06 折算成每1 0 0g試樣中維生素B6的毫克數(shù)。計算結(jié)果保留到小數(shù)點后兩位。1 4 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的1 5%。1 5 其他當(dāng)取樣量為1.0 0g時, 定量限為0.0 0 2m g/1 0 0g。G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 68 附 錄 A維生素B6各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度校正方法A.1 標(biāo)準(zhǔn)校正溶液的配制分別準(zhǔn)確吸取1.0 0 m L吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液, 用0.1 m o l/L鹽酸溶液定容到1 0 0m L, 作為標(biāo)準(zhǔn)校正液。A.2 對照溶液的配制以0.1m o l/L鹽酸溶液作為對照溶液。A.3 吸收值的測定用1c m比色杯于相應(yīng)最大吸收波長下, 以對照溶液為空白對照, 測定各標(biāo)準(zhǔn)校正溶液的吸收值。A.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度計算各標(biāo)準(zhǔn)儲備液的質(zhì)量濃度按式(A.1) 計算:i=AiMiiVFi(A.1) 式中:i 維生素B6各組分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 標(biāo)準(zhǔn)儲備液的質(zhì)量濃度, 單位為微克每毫升(g/m L) ;Ai 維生素B6各組分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 標(biāo)準(zhǔn)測試液在各自最大吸收波長m a x下的吸收值( 見表A.1) ;Mi 維生素B6各組分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 標(biāo)準(zhǔn)品的分子量( 見表A.1) ;i 維生素B6各 組 分 ( 吡 哆 醇、 吡 哆 醛、 吡 哆 胺) 在0. 1 m o l/L鹽 酸 溶 液 中 的 吸 收 系 數(shù)( 見表A.1) ;V 稀釋因子;Fi 無維生素B6各組分( 吡哆醇、 吡哆醛、 吡哆胺) 的對照溶液的換算因子( 見表A.1) 。表A.1 維生素B6各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度校正的相關(guān)參數(shù)化合物溶劑m a xMig/m o limm o l-1c m-1Fi鹽酸吡哆醇(p y r i d o x i n e - h y d r o c h l o r i d e)0.1m o l/LHC l(p H1)2 9 12 0 5.68.60.8 2 3鹽酸吡哆醛(p y r i d o x a l - h y d r o c h l o r i d e)0.1m o l/LHC l(p H1)2 8 82 0 3.69.00.8 2 1雙鹽酸吡哆胺(p y r i d o x a m i n e - d i h y d r o c h l o r i d e)0.1m o l/LHC l(p H1)2 9 22 4 1.18.20.6 9 8G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 69 附 錄 B維生素B6液相色譜圖 維生素B6的液相色譜圖見圖B.1。圖B.1 維生素B6標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖G B5 0 0 9.1 5 42 0 1 61 0 附 錄 C培養(yǎng)基組分與配制方法C.1 吡哆醇Y培養(yǎng)基每升溶液成分: 葡萄糖4 0.0g,L -天冬酰胺4.0g, 硫酸銨4.0g, 磷酸二氫鉀3.0g, 硫酸鎂1.0g, 氯化鈣0.4 9g,D L -蛋氨酸4 0.0m g,D L -色氨酸4 0.0m g,D L -異亮氨酸4