GB26401-2011食品安全國家標準食品添加劑花生四烯酸油脂（發(fā)酵法）.pdf

中華人民共和國國家標準中華人民共和國國家標準GBGBGBGB 26401-2011中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部中 華 人 民 共 和 國 衛(wèi) 生 部發(fā)布2011-03-15 發(fā)布2011-05-15 實施食品安全國家標準食品添加劑花生四烯酸油脂（發(fā)酵法）食品伙伴網(wǎng)1食品安全國家標準食品添加劑 花生四烯酸油脂（發(fā)酵法）1范圍本標準適用于利用高山被孢霉（Mortierlla alpina）菌種，經(jīng)生物發(fā)酵制得的花生四烯酸（ARA)油脂。2結(jié)構(gòu)式和相對分子質(zhì)量2.1結(jié)構(gòu)式2.2 相對分子質(zhì)量304.5（按 2007 年國際相對原子質(zhì)量）3技術(shù)要求3.1感官要求：應符合表 1 的規(guī)定。表 1 感官要求項目要求檢驗方法色澤淺黃色取試樣 10 mL， 置于試管中， 于自然光線下采用目測的方法觀察其色澤及外觀形態(tài)，采用鼻嗅的方法檢查氣味。氣味具有本產(chǎn)品特有的氣味組織狀態(tài)油狀液體3.2理化指標：應符合表 2 的規(guī)定。表 2理化指標4其他要求項目指標檢驗方法含量(以 C20H32O2甘油三酯計)，w/%38.0附錄 A 中 A.3不皂化物，w/%4.0GB/T 5535.1 乙醚提取法水分，w/%0.1GB 5009.3 減壓干燥法不溶性雜質(zhì)，w/%0.2GB/T 15688溶劑殘留/（mg/Kg)1.0GB/T 5009.37酸價（以 KOH 計）/（mg/g）1.0GB/T 5009.37過氧化值/（meq/kg)5.0GB/T 5009.37 滴定法反式脂肪酸，w/%1.0GB 5413.36黃曲霉毒素B1/（g/kg)5.0GB/T 5009.22總砷(以 As 計)/（mg/kg)0.1GB/T 5009.11 氫化物原子熒光光度法鉛(Pb)/（mg/kg)0.1GB 5009.12 石墨爐原子吸收光譜法食品伙伴網(wǎng)2產(chǎn)品應裝于適宜的避光容器中充氮或真空保存，產(chǎn)品的最佳保存溫度為-5 以下。食品伙伴網(wǎng)3附錄A檢驗方法A.1安全要求本檢驗方法中使用的部分試劑具有毒性和腐蝕性，操作時須小心謹慎。如濺到皮膚上應立即用水沖洗，嚴重者應立即治療。使用易燃品時，嚴禁使用明火加熱。A.2一般規(guī)定除另有說明外，所用試劑均為分析純，檢驗用水符合GB/T 66822008中規(guī)定的三級水。檢驗中所用標準滴定溶液、雜質(zhì)測定用標準溶液、制劑及制品，在沒有注明其他要求時，均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的規(guī)定制備。A.3花生四烯酸（ARA) 甘油三酯的測定A.3.1試劑和材料A.3.1.1花生四烯酸（ARA)甘油三酯標準品：純度99%。A.3.1.2十三碳烷酸甘油三酯標準品：純度99%。A.3.1.3氫氧化鉀。A.3.1.4無水甲醇。A.3.1.5正庚烷，色譜純。A.3.1.6石油醚, 沸程，3060。A.3.1.7氫氧化鉀甲醇溶液（4 mol/L） ：稱取22.4g氫氧化鉀（A.3.1.3)于燒杯中，加入適量無水甲醇（A.3.1.4)使溶解，并轉(zhuǎn)移至100mL的容量瓶中，當氫氧化鉀甲醇溶液冷卻至室溫后，用無水甲醇稀釋至刻度，搖勻。A.3.1.8花生四烯酸（ARA)甘油三酯儲備液（10 mg/mL） ：稱取250 mg（精確至0.000 1 g）花生四烯酸（ARA)甘油三酯（A.3.1.1）于25 mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。A.3.1.9十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標儲備液（10 mg/mL） ：稱取250 mg（精確至0.000 1 g）十三碳烷酸甘油三酯（A.3.1.2）于25 mL容量瓶中，加入適量正庚烷(A.3.1.5)使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。A.3.1.10標準工作溶液的配制按表A.1分別移取適量花生四烯酸（ARA)甘油三酯儲備液（A.3.1.8）于6個10 mL容量瓶中，分別移入2.0 mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標儲備液（A.3.1.9），加入正庚烷(A.3.1.5)稀釋至刻度，搖勻。表 A.1 標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯含量編號加入花生四烯酸 （ARA)甘油三酯儲備液的體積(mL)標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的濃度（mg/mL）10020.10.130.50.541.01.052.02.063.03.0食品伙伴網(wǎng)4A.3.1.11氮氣，純度99.999%。A.3.1.12氦氣，純度99.9999%。A.3.2儀器和設備A.3.2.1氣相色譜-質(zhì)譜儀。A.3.2.2氣相色譜儀，配氫火焰離子化檢測器。A.3.2.3分析天平：感量為0.01 g、0.1 mg。A.3.2.4離心機。A.3.2.5振搖器。A.3.3定性分析A.3.3.1花生四烯酸（ARA)油脂稱取0.25 g（精確至0.01 g）試樣于50 mL容量瓶中，加入適量正庚烷（A.3.1.5）使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。準確吸取2 mL正庚烷溶解液于10 mL帶蓋離心管中，加入0.2 mL氫氧化鉀甲醇溶液（A.3.1.7），劇烈振蕩1 min以上，放置10 min（甲基化反應）。如有機層渾濁，可離心使之澄清。取上層有機相溶液備用。A.3.3.2測定A.氣相色譜條件a)色譜柱：DB-5ms（ 30.0 m0.25 mm0.25 m）石英毛細管柱，或相當者；b)柱溫程序：100 保持3 min，以10 /min升至260 ，保持8 min；c)載氣：氦氣（A.3.1.12）；d)流速：1.0 mL/min；e)進樣口溫度：250 ；f)進樣模式：分流進樣（分流比為1：10）；g)進樣量：1 L。A.質(zhì)譜條件a)離子源：EI源，70 eV；b)接口溫度：280 ；c)離子源溫度：230 ；d)四極桿溫度：150 ；e)數(shù)據(jù)采集模式：全掃描；f)質(zhì)量掃描范圍：20m/z330m/z；g)溶劑延遲3.5min。A.3.3.3結(jié)果判定試樣的質(zhì)譜圖應與花生四烯酸（ARA)甲酯標準品的質(zhì)譜圖（附錄B中圖B.1）一致。A.3.4定量分析A.3.4.1原理試樣中花生四烯酸（ARA)在氫氧化鉀甲醇作用下，生成花生四烯酸（ARA)甲酯，用配有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行測定，以內(nèi)標法定量，結(jié)果以花生四烯酸（ARA)甘油三酯計。A.3.4.2試液的制備A.花生四烯酸（ARA)油脂試樣溶液的制備食品伙伴網(wǎng)5稱取0.04 g試樣（精確至0.000 1 g）于10 mL容量瓶中，加入2.0 mL十三碳烷酸甘油三酯內(nèi)標儲備液（A.3.1.9），以下按A.3.3.1“加入適量正庚烷（A.3.1.5）取上層有機相溶液備用”操作。每份試液至少做兩個平行樣。A.空白溶液的制備除不加試樣外按A.所述方法進行處理。A.3.4.3標準工作溶液甲酯化處理分別準確吸取A.3.1.10中系列標準工作溶液2 mL于10 mL帶蓋離心管中，以下按A.3.3.1自“加入0.2 mL氫氧化鉀甲醇溶液（A.3.1.7）取上層有機相溶液備用”操作。A.3.4.4測定A.氣相色譜條件a)色譜柱：DB-23（30.0 m0.25 mm0.25 m）石英毛細管柱，或相當者；b)柱溫程序：90 保持5 min，9 /min升至240 ，保持5 min，3 /min升至250 ；c)載氣：氮氣（A.3.1.11）；d)流速：1.33 mL/min；e)進樣口溫度：250 ；f） 進樣模式：分流進樣（分流比為1：100）；g） 檢測器溫度：300 ；i） 進樣量：1 L。A.標準曲線的繪制按A.所列測定條件，將甲酯化后的標準工作溶液依次進樣，測量花生四烯酸（ARA)甲酯和十三碳烷酸甲酯的峰面積?；ㄉ南┧幔ˋRA)甲酯的峰面積與標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的濃度成正比。以標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的濃度（mg/mL）為橫坐標，以花生四烯酸（ARA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線?；ㄉ南┧幔ˋRA)甲酯和十三碳烷酸甲酯的色譜圖參見附錄C中圖C.1。按公式（A.1）計算回歸參數(shù)：()yaxb=+(A.1)式中：y花生四烯酸（ARA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；a回歸曲線的斜率；x標準工作溶液中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）；b回歸曲線的截距。A.試液的測定將空白溶液（A.）和試樣溶液（A.）依次進樣，扣除空白值，獲得花生四烯酸（ARA)甲酯/十三碳烷酸甲酯的峰面積比。A.3.4.5結(jié)果計算試樣中花生四烯酸（ARA)甘油三酯的含量X1按式（A.2）計算：%mVab-yX11001=(A.2)食品伙伴網(wǎng)6式中：X1試樣中花生四烯酸（ARA)甘油三酯含量，%；y試液甲酯化后花生四烯酸（ARA)甲酯與十三碳烷酸甲酯的峰面積比；a回歸曲線的斜率；b回歸曲線的截距；V試液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m試樣的質(zhì)量，單位為毫克（mg）。如含量以花生四烯酸（ARA)計，乘以換算系數(shù)0.9597。計算結(jié)果以平行測定值的算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)點后兩位。A.3.4.6重復性在重復性條