實(shí)驗(yàn)八 水中菌落綜述的測(cè)定及常見(jiàn)微生物的觀(guān)察.ppt

實(shí)驗(yàn)八 水中菌落總數(shù)的測(cè)定及常見(jiàn)微生物觀(guān)察,目的要求 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)步驟 菌落計(jì)數(shù) 作 業(yè),一、目的要求 掌握水樣中細(xì)菌菌落總數(shù)的測(cè)定方法； 了解檢測(cè)水樣朱總細(xì)菌總數(shù)方法的原理及其應(yīng)用中的優(yōu)缺點(diǎn) 了解水質(zhì)與細(xì)菌菌落數(shù)之間的相關(guān)性以及水質(zhì)評(píng)價(jià)的微生物學(xué)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，明白其應(yīng)用的重要性； 進(jìn)一步鞏固微生物倒平板、稀釋涂布平板分離法和無(wú)菌操作等技術(shù)和方法,二、實(shí)驗(yàn)原理,菌落總數(shù)是指食品檢樣經(jīng)過(guò)處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1g或1ml檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。細(xì)菌種類(lèi)很多，有各自的生理特性，必須用適合它們生長(zhǎng)的培養(yǎng)基才能將它們培養(yǎng)出來(lái)。然而，在實(shí)際工作中不易做到，所以通常用一種適合大多數(shù)細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基培養(yǎng)腐生性細(xì)菌，以它的菌落總數(shù)表明有機(jī)物污染程度。水中細(xì)菌總數(shù)與水體受有機(jī)污染的程度成下相關(guān)，因此細(xì)菌總數(shù)常作為評(píng)價(jià)水體污染程度的一個(gè)重要指標(biāo)。細(xì)菌總數(shù)越大，說(shuō)明水體被污染得越嚴(yán)重。,三、實(shí)驗(yàn)試劑與器材 污水樣品（2種樣品） 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基； 無(wú)菌試管、無(wú)菌三角瓶、無(wú)菌玻璃涂棒、無(wú)菌吸管、接種環(huán)、無(wú)菌培養(yǎng)皿等； 酒精燈、超凈工作臺(tái)、培養(yǎng)箱等。,四、實(shí)驗(yàn)步驟,1 采集水樣：已經(jīng)準(zhǔn)備好2種污水水樣。 2 細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定： （1）水樣稀釋?zhuān)喊礋o(wú)菌操作法，將水樣作10倍系列稀釋。 （2）選取10-1、10-2、10-3三個(gè)連續(xù)稀釋度。稀釋度的選擇 是本試驗(yàn)精確度的關(guān)鍵，選擇適宜者，平皿上菌落總數(shù) 介于30和300之間。 （3）吸取由高倍至低倍的稀釋液，每個(gè)稀釋液分別注入兩 個(gè)培養(yǎng)皿，每皿1mL。,（4）注入徹底融化，然后冷卻到45的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，立即旋搖培養(yǎng)皿，充分混勻。方法是握住平皿，先往一個(gè)方向畫(huà)圓，再朝相反方向回轉(zhuǎn)；或一面畫(huà)圓，一面適當(dāng)傾斜。小心勿使這個(gè)混合液體濺到培養(yǎng)皿的邊緣。讓平皿基于水平位置放置至固化。 （5）接種水樣的培養(yǎng)皿，倒置于37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。,五、菌落計(jì)數(shù),1 平板菌落數(shù)的選擇 （1）進(jìn)行平皿菌落計(jì)數(shù)時(shí)，記下同一濃度的3個(gè)平板（或2個(gè)）的菌落總數(shù)，計(jì)算平均值，再乘以稀釋倍數(shù)即為1ml水樣中的細(xì)菌總數(shù)。 （2）計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選擇菌落數(shù)在30300/皿之間的稀釋倍數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，若同個(gè)稀釋度中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平皿計(jì)數(shù)該稀釋度的平均菌落數(shù)。若片狀菌落少于平皿的一半時(shí)，而另半中菌落分布又均勻，則可將其菌落數(shù)的2倍作為全皿的數(shù)目。在記下各平皿菌落數(shù)后，應(yīng)算出同一稀釋度的平均菌數(shù)，供下步計(jì)算時(shí)用。,2 稀釋度的選擇 （l）首先選擇平均菌落數(shù)在30300者進(jìn)行計(jì)算，當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合此范圍時(shí)，即可用它作為平均值乘其稀釋倍數(shù)。 （2）若有兩個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)都在30300之間，則應(yīng)按兩者的比值來(lái)決定。若其比值小于2，應(yīng)報(bào)告兩者的平均數(shù)；若大于2則報(bào)告其中較小的菌落數(shù)。 （3）如果所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。,（4）若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之 （5）如果全部稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間，則以最接近300或30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。 （6）菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告，菌落在100以?xún)?nèi)時(shí)按實(shí)有數(shù)報(bào)告；大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字；在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù),也可用10的指數(shù)來(lái)表示，在所需報(bào)告的菌落數(shù)多至無(wú)法計(jì)算時(shí)，應(yīng)注明水樣的稀釋倍數(shù)