晚期非小細(xì)胞肺癌靶向治療中循環(huán)DNA檢測EGFR基因突變應(yīng)用價值.doc

晚期非小細(xì)胞肺癌靶向治療中循環(huán)DNA檢測EGFR基因突變應(yīng)用價值 陳祥娜 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，福建福州350003 摘要目的結(jié)合該院在非小細(xì)胞癌（NSCLC）靶向治療中，循環(huán)DNA檢測EGFR基因突變的相關(guān)情況，對其臨床價值進(jìn)行評估。方法從該院中選取接受EGDRTIKs治療的54例患者，分別對其進(jìn)行血清采集和組織采集，并制作成標(biāo)本，對DNA進(jìn)行提取檢測。結(jié)果女性出現(xiàn)基因變異的情況高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；血清樣本測定EGDR基因突變，特異性為97.30%；靈敏度為41.18%；所有患者的客觀緩解率為27.78%，疾病控制率為48.15%；EGFRTKIs對晚期患者的客觀緩解率為50.00%，對野生型的患者則只有16.67%。結(jié)論在EGDR基因突變的測定中，血清循環(huán)DNA具有一定的價值，且可有效優(yōu)化晚期肺癌靶向治療患者的臨床效果。 關(guān)鍵詞nsclc；循環(huán)dna；egdr基因突變 R73A1674-074（4）11（b）053-02 靶向治療的出現(xiàn)極大的改善了晚期非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后。肺癌組織的EGFR基因突變可以有效預(yù)測靶向藥物EGFR-TKI的臨床療效。目前臨床上多采用手術(shù)或穿刺標(biāo)本來檢測EGFR基因突變。但這種有創(chuàng)操作在一定程度上限制了EGFR基因突變的檢測。研究發(fā)現(xiàn)肺癌患者循環(huán)血中游離DNA含量顯著高于正常人，并與原發(fā)腫瘤組織具有高度的遺傳一致性1-2。鑒于此，該院xx年1月xx年6月期間在NSCLC靶向治療中，運用血清循環(huán)DNA檢測EGFR基因突變，對其臨床價值進(jìn)行評估?，F(xiàn)報道如下。 1資料與方法 1.1一般資料 從該院xx年1月xx年6月所接診的NSCLC患者中，選取54例采用小分子表皮生長因子受體細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶抑制劑（EGDRTIKs）治療的患者；其中女性23例，男性31例，患者平均年齡為（65.411.24）歲；其中19例為非腺癌，35例為腺癌；患者中26例為b期，28例為期；在進(jìn)行采樣時，24例為曾經(jīng)或者正在接受EGDRTIKs治療，30例為首次接受EGDRTIKs臨床治療。在獲得患者同意之后，對其進(jìn)行血清樣本的采集，并同時進(jìn)行石蠟組織標(biāo)本的制作，所有患者均滿足以下幾點：患者年齡在20歲或以上；經(jīng)細(xì)胞學(xué)或者病理學(xué)證實，患者為b期或期，其中包括了初次治療后復(fù)發(fā)或者未接受過化療治療的患者；經(jīng)ECOG功能狀態(tài)評分，測評結(jié)果為02分，具有能夠測量的病灶；具有較高的依從性，并且能夠及時到院或者電話接受隨訪；無重要臟器功能障礙。 1.2方法 1.2.1樣本采集血清樣本采集：提前一日叮囑患者清晨空腹接受靜脈血采集，每例患者采集5mL，于黃色促凝管內(nèi)室溫放置4h后，離心分離血清，-80下保存待用；石蠟組織樣本采集：選取肺穿標(biāo)本或者手術(shù)標(biāo)本腫瘤部分，切取10張6m的蠟片，置于Eppendorf管內(nèi)編號保存?zhèn)溆谩?1.2.2DNA的提取血清樣本DNA的提?。涸撗芯窟x取Qiagen公司試劑盒QIAampDNABloodMiniKit，并按照說明書進(jìn)行血清循環(huán)DNA的提取；石蠟組織樣本DNA的提?。罕狙芯窟x取QIAampDNAFFPETissueKit，并按照說明書進(jìn)行血清循環(huán)DNA的提取。 1.2.3EGFR突變檢測該研究使用ARMS（amplifiedrefractorymutationsystem）法進(jìn)行EGFR突變檢測。 1.3EGFRTIKs的治療方法 為患者提供EGFRTIKs口服治療，每日服用尼洛替尼150mg，在進(jìn)食前1h或者進(jìn)食后2h服用；或者在空腹?fàn)顟B(tài)下，與食物共同服用的情況下，服用250mg吉非替尼。直到患者出現(xiàn)不可耐受的藥物毒副作用或者腫瘤疾病進(jìn)展；在治療前1周對患者的身體狀態(tài)進(jìn)行全面評估。 2結(jié)果 2.1血清及組織標(biāo)本中 EGFR基因突變型患者的臨床分布特征女性出現(xiàn)基因變異的情況高于男性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。見表1。 2.2血清EGFR基因突變檢測的真實性和可靠性評價 通過血清樣本測定EGFR基因突變，其特異性達(dá)到了97.30%；靈敏度則達(dá)到了41.18%。見表2。 2.3EGFR基因突變與EGFRTKIs療效關(guān)系 所有患者的客觀緩解率為27.78%，疾病控制率為48.15%；其中EGFRTKIs對晚期患者的客觀緩解率為50.00%，而對野生型的患者則只有16.67%。見表3。 3討論 人類表皮生長因子受體（EGFR）是一種受體酪氨酸激酶，正常情況表達(dá)于上皮細(xì)胞表面，而在一些惡性腫瘤中常過度表達(dá)。EGFR基因突變包括基因擴增和點突變，主要集中在18、19、20、21號外顯子上，第19外顯子的缺失和第21外顯子的L858R點突變，占到89%95.5%，與腫瘤對TKIs的敏感度有重要關(guān)系。60%85%的NSCLC細(xì)胞存在EGFR過度表達(dá)/突變，這部分患者接受腫瘤分子靶向治療（EGFR抑制劑）的臨床療效優(yōu)于常規(guī)化療。臨床研究表明，肺癌細(xì)胞中有EGFR酪氨酸激酶基因編碼區(qū)外顯子19缺失或外顯子21突變的患者，靶向藥物易瑞沙的有效率高達(dá)80以上3。該研究中主要針對19和21外顯子的突變型檢測，其中19外顯子突變?yōu)?5.56%(10/18)，21外顯子突變?yōu)?4.44%(8/18)；所檢測出的基因突變型(19DelK746-A750、19DelK745-E749、19DelK745-A750；21L858R、21L861Q)與當(dāng)前研究顯示的已檢測出的基因突變類型及突變率相符。 一些臨床實驗結(jié)果進(jìn)一步證實，通過篩查EGFR基因突變對肺癌初治患者進(jìn)行吉非替尼治療，中位無進(jìn)展生存時間達(dá)到12個月，中位生存時間達(dá)到20個月4。因而針對EGFR突變進(jìn)行選擇性靶向治療，患者可以顯著獲益5。 xx年5月，美國病理學(xué)家協(xié)會(CAP)、國際肺癌研究協(xié)會(IASLC)和美國分子病理學(xué)會(AMP)三大權(quán)威機構(gòu)發(fā)布了一項基于循證醫(yī)學(xué)證據(jù)的肺癌分子檢測指南，建議所有晚期肺腺癌患者不論性別、種族、是否吸煙或伴有其他臨床危險因素，均應(yīng)接受EGFR突變和ALK融合基因檢測，以判斷是否適于接受酪氨酸激酶抑制劑治療6。但是對于晚期肺癌患者，其腫瘤組織標(biāo)本往往難以獲得，或不能取得足夠適合檢測的標(biāo)本。這就需要一種能方便取得EGFR突變信息的檢測方法7-8。 在該次研究中，對血清循環(huán)DNA與腫瘤組織DNA的突變檢測結(jié)果進(jìn)行對比，結(jié)果表明，血清游離DNA檢測到的突變類型與組織檢測到的類型無差異，依據(jù)血清EGFR檢測結(jié)果進(jìn)行選擇性靶向治療，可以使患者顯著受益。由于血液采集方便，患者易于接受，血清EGFR檢測技術(shù)可以作為腫瘤組織EGFR檢測的補充與替代，值得臨床推廣應(yīng)用。但是，由于檢測還具有一定的局限性，故表現(xiàn)出相應(yīng)的假陰性率，故在實際應(yīng)用中，還需要與其他檢測手段同時使用。 參考文獻(xiàn) 1RMBremnes,RSirera,CCamps.Circulatingtumour-derivedDNAandRNAmarkersinblood:atoolforearlydetection,diagnostics,andfollow-upJ.LungCancer,xx,49(1):1-12. 2CiuleanuT,StelmakhL,CicenasS,etal.Efficacyandsafetyoferlotinibversuschemotherapyinsecond-linetreatmentofpatientswithadvanced,non-small-celllungcancerwithpoorprognosis(TITAN):arandomisedmulticentre,open-label,phase3studyJ.LancetOncol,xx,13(3):300-308. 3車德海,田強,曹京燕,等.DNA直接測序技術(shù)檢測EGFR基因突變指導(dǎo)厄洛替尼一線治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床觀察J.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),xx,19(10):xx-xx. 4黃進(jìn)肅，董強剛，許凱黎，等.血清循環(huán)DNA的EGFR基因突變于肺癌選擇性靶向治療研究J.腫瘤，xx,27（12）：968-972. 5BrevetM,JohnsonML,AzzoliCG,etal.DetectionofEGFRmutationsinplasmaDNAfromlungcancerpatientsbymassspectrometrygenotypingispredictiveoftumorEGFRstatusandresponsetoEGFRinhibitorsJ.LungCancer,xx,73(1):96-102. 6劉宏杰,葉斌,程靜，等.肺癌