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不同生長季節(jié)玳玳果中總黃酮的定量分析研究作者:劉永靜,陳丹,邱紅鑫,葉夢屏【摘要】目的研究不同生長季節(jié)玳玳果中總黃酮的含量差異,以便更有效地利用玳玳果總黃酮。方法以柚皮苷為對照品,運用紫外可見分光光度法對不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮含量進行定量分析,檢測波長為284nm。結果建立了玳玳果總黃酮的含量測定方法,結果表明不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮含量存在一定的差異。結論所建立的含量測定方法精密度、穩(wěn)定性及重復性良好,準確度高,可做為玳玳果總黃酮的定量分析方法,且玳玳青果中總黃酮的含量最高?!娟P鍵詞】玳玳果;總黃酮;生長季節(jié);定量分析Abstract:ObjectiveTostudythecontentoftotalflavonoidsfromCitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruitsgatheredindifferentseasonsforeffectiveutilization.MethodsThecontentwastotalflavonoidsanalyzedbyultravioletspectroscopy.Thenaringinwasusedasthechemicalreferencesubstanceandthedetectionwavelengthwassetat284nm.ResultsThedeterminationmethodoftotalflavonoidswasestablished.Thecontentofthetotalflavonoidsgatheredindifferentgrowingperiodswasevidentlydifferent.ConclusionThemethodissensitive,accurate,reproducibleandcanbeusedtocontrolthequalityofthetotalflavonoidsfromCitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits,andthequalityofgreenfruitsisthebest.Keywords:CitrusaurantiumL.vardaidaiTanakafruits;Totalflavonoids;Growingseasons;Quantitativeanalysis玳玳又稱代代CitrusaurantiumL.vardaidai,是蕓香科柑桔亞屬植物,為酸橙的變種,在我國福建、四川、浙江等地都有栽培。玳玳的未成熟果實稱玳玳花枳殼或蘇枳殼,幼果有被當作枳實入藥,具有理氣寬中、行滯消脹的功效,主要用于胸腹?jié)M悶脹痛、食積不化、痰飲、胃下垂、脫肛、子宮脫垂等病癥1,2。實驗證明,玳玳果中含黃酮、生物堿、揮發(fā)油等活性成分,其中黃酮類成分以柚皮苷等為主要成分,具有良好的抗氧化活性35,而不同采收期的玳玳果中總黃酮含量不同。為了確保玳玳藥材的質量穩(wěn)定性和對藥材的合理利用,本研究以玳玳果總黃酮中代表性成分柚皮苷為指標成分6,分析比較了不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮的含量。1儀器與試藥1.1儀器BP-211D型電子分析天平(德國Sartorius公司);FA2004電子天平(上海精密科學儀器有限公司);UV-4802雙光束紫外可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司)。1.2試藥玳玳果(福建恒馨天然香料有限公司提供;福建中醫(yī)學院中藥鑒定教研室范世明高級實驗師鑒定);柚皮苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:110722-200610);甲醇等試劑均為分析純。2方法與結果2.1對照品溶液的制備精密稱定柚皮苷對照品5.08mg,置50ml量瓶中,加甲醇適量使溶解,并加甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成每毫升含0.1016mg的溶液,即得。2.2供試品溶液的制備取新鮮晾干的玳玳幼果果皮、青果果皮、橙果果皮分別低溫烘干,粉碎,過20目篩,即得玳玳果皮粗粉。精密稱取玳玳果皮粗粉50g,置250ml錐形瓶中,用6倍量的75%的乙醇回流提取,共回流提取3次,每次2h,合并提取液,回收乙醇使成浸膏,減壓干燥呈橙色粉末,即得玳玳幼果、青果、橙果果皮醇提粉末。分別精密稱取玳玳幼果、青果、橙果醇提粉末各20.0mg,置50ml量瓶中,加甲醇適量使溶解,再加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得供試品溶液。2.3測定波長的選擇分別取對照品溶液和供試品溶液,以甲醇為溶劑空白,在230400nm波長范圍掃描,結果顯示,對照品溶液和供試品溶液的吸收光譜圖基本一致,最大吸收波長均在284nm,故測定波長選擇284nm。結果見圖1。1.玳玳果醇提液2.柚皮苷對照品圖1吸收光譜圖2.4標準曲線的制備與線性關系的考察分別精密吸取柚皮苷對照品溶液0.4,0.7,1.0,1.3,1.6,1.9,2.1ml于10ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,以甲醇為空白,在284nm波長處測定吸光度。以濃度(C,mg/ml)為橫坐標,吸光度(A)為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程為A=3.634101C-4.60910-3,r=0.9998,柚皮苷在0.0040640.021336mg/ml范圍內呈良好的線性關系。標準曲線見表1,圖2。2.5精密度實驗分別精密吸取同一供試品溶液6份,按“樣品含量測定”項下同法操作,計算。結果見表2。表1線性關系測定結果圖2標準曲線表2精密度實驗結果2.6穩(wěn)定性實驗精密吸取同一供試品溶液,放置0,30,60,90,120,150min后,按“樣品含量測定”項下同法操作,測定,計算。結果表明供試品在150min內穩(wěn)定。結果見表3表3穩(wěn)定性實驗結果2.7重復性實驗分別取同一批玳玳果(青果)醇提粉末6份制備供試品溶液,按“樣品含量測定”項下同法操作,測定,計算。結果見表4。2.8回收率實驗精密稱取玳玳青果醇提粉末10mg(含量為0.113mg/mg),置50ml量瓶中,按高、中、低3個濃度水平,分別精密加入柚皮苷對照品溶液(1.03mg/ml)適量,用甲醇稀釋至刻度,按“樣品含量測定”項下同法操作,測定,計算。結果見表5。表4重復性實驗結果表5回收率實驗結果2.9樣品含量測定精密吸取供試品溶液1.0ml置10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻。以甲醇為空白,在284nm波長處分別測定其吸光度,計算總黃酮含量(以每毫升生藥中所含總黃酮量計)。結果見表6。表63批樣品含量測定結果3討論實驗結果表明,不同生長季節(jié)的玳玳果中總黃酮的含量存在一定的差異:玳玳青果中的總黃酮含量>;玳玳橙果中的總黃酮含量>;玳玳幼果中的總黃酮含量。用分光光度法測定玳玳果醇提物中總黃酮的含量準確度高,重復性好,可以作為其中玳玳果總黃酮控制的方法,且為更有效地在最佳季節(jié)采摘玳玳果提取分離玳玳果總黃酮有效部位提供了實驗依據(jù)?!緟⒖嘉墨I】1冉先德.中華藥海M.哈爾濱:哈爾濱出版社,1993:964.2國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草(第4卷)M.上海:上海科學技術出版社,1999:884.3陳丹,劉永靜,黃劍鈞,等.閩產(chǎn)代代果中化學成分的分離分析J.福建中醫(yī)學院學報,2007,17(1):18.4
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