金黃色葡萄球菌1ppt課件.ppt

1 研究背景 1 2 試驗內(nèi)容 3 4 研究目的和意義 全文結(jié)論 匯報內(nèi)容 2 畜禽糞便微生物污染及其處理 畜禽糞便中含有大量的病原菌和寄生蟲卵 如大腸桿菌 沙門氏菌 金黃色葡萄球菌 蛔蟲卵和球蟲卵等 如不及時處理 會成為危險的傳染來源 造成疫病傳播 此外 大量的畜禽糞便若處理不當則會孳生蚊蠅 使環(huán)境中的病原菌和寄生蟲蔓延 使病原菌種類增多 菌量增大 甚至造成人 畜傳染病傳播 糞便處理方法 飼料化處理 能源化處理 肥料化處理 研究背景 3 寄生于人和動物皮膚粘膜 鼻腔 胃腸道等處 無鞭毛不形成芽孢和莢膜的革蘭氏陽性葡萄球菌 金葡菌對人畜均產(chǎn)生多種危害 諸如各種化膿性疾病 敗血癥或膿毒敗血癥 乳房炎等 經(jīng)呼吸道 消化道 交配 昆蟲叮咬 擠奶工的手或擠奶機械等途徑引起哺乳動物的感染 金葡菌概念 金葡菌傳播 金葡菌危害 金黃色葡萄球菌及其危害 4 石灰氮及其作用 石灰氮俗稱烏肥或黑肥 主要成分為氰氨化鈣 另有氧化鈣和碳素等成分 黑灰色油性顆?；蚍蹱钗?微溶于水 顯堿性 易吸潮水解 是一種無殘留 無污染 能消毒滅菌 提高氮肥利用率 改良土壤和抑制農(nóng)作物病蟲害為害的多功能肥料 5 研究目的和意義 研究奶牛糞便致病性金葡菌的分離鑒定和草藥敏感性 并在堆肥中添加石灰氮對殺滅金葡萄菌的效果及堆肥發(fā)酵的影響 為消除畜產(chǎn)公害 防治畜產(chǎn)污染 防止致病性金葡菌的發(fā)生 蔓延 防疫以及糞便的有效處理和利用提供科學(xué)的依據(jù) 6 石灰氮對堆肥發(fā)酵的影響 試驗內(nèi)容 石灰氮對金葡菌的殺滅效果 金葡菌分離鑒定及體外抑菌 試驗一奶牛糞便致病性金黃色葡萄球菌的分離鑒定及體外抑菌 方法 7 致病菌的鑒定 鏡檢 生化試驗 動物試驗 致病菌的純培養(yǎng) PCR鑒定 體外抑菌 茜草 乳香 牛蒡子 青蒿 姜黃 大黃 丹參 枸杞等8種草藥采用牛津杯法 材料 內(nèi)蒙古呼倫貝爾市牧業(yè)4旗不同奶牛戶散養(yǎng)牛群中 隨機選擇的206頭奶牛的直腸糞便 8 圖1金葡菌在甘露醇氯化鈉培養(yǎng)基上生長情況 分離細菌培養(yǎng)特性及形態(tài)學(xué)特性 圖2金葡菌革蘭氏染色 結(jié)果 從206份牛糞樣中共分離出34株金黃色葡萄球菌 9 表234株分離菌株生化試驗結(jié)果 注 表示分離菌生化反應(yīng)呈陽性 表示分離菌生化反應(yīng)呈陰性 生化試驗結(jié)果 動物致病性試驗結(jié)果 10 34株分離菌中有7株均在24 48h內(nèi)致死小白鼠 而陰性對照組的小白鼠全部健活 14d后剖檢未見有病變 致死小白鼠在死前均可見昏睡 厭食 被毛蓬松 精神萎靡 四肢僵硬直至死亡 經(jīng)剖檢可見腸粘膜充血 有臭味的黏性黃綠色滲出物 腎脾腫大 脾臟和腹腔積液接種于高鹽甘露醇陪養(yǎng)基上時均生長出金黃色中等大小的圓形菌落 革蘭氏染色鏡檢為革蘭氏陽性 并呈現(xiàn)中等大小的葡萄串狀球菌 PCR試驗結(jié)果 圖3金黃色葡萄球菌的PCR鑒定 M為DNAmarker 1 4為分離菌株P(guān)CR產(chǎn)物 5為無菌水對照 6為標準菌株 擴增引物為Coa基因 是致病性金葡菌特有的基因 目的片段為800bp 體外抑菌結(jié)果 表38種中草藥對7株致病性金黃色葡萄球菌的平均抑菌結(jié)果單位 mm 注 號表示不敏感 抑菌圈直徑在7mm 10mm 號表示敏感 抑菌圈直徑10mm 15mm之間 表示高敏感 抑菌圈直徑大于15mm 小結(jié) 13 經(jīng)分離菌的形態(tài) 染色 培養(yǎng)特性 從206份奶牛鮮糞樣中共檢出34株疑似金黃色葡萄球菌 生化試驗 動物致病性試驗和PCR鑒定結(jié)果表明 從34株疑似金黃色葡萄球菌中 供分離出7株致病性金黃色葡萄球菌 致病菌檢出率為20 59 丹參 大黃 枸杞等3種草藥對金黃色葡萄球菌高敏感 茜草和青蒿敏感 其它草藥對金黃色葡萄球菌不敏感 試驗二牛糞堆肥中添加石灰氮對金黃色葡萄球菌的殺滅效果 14 培養(yǎng)溫度的確定 試驗設(shè)計培養(yǎng)溫度分別為20 C 30 C 37 C和50 C 石灰氮的添加量為0 和2 即處理組添加2 的石灰氮 對照組不加石灰氮 測定方法取300g牛糞按上述比例的石灰氮混合均勻 分別在4個不同溫度點靜置培養(yǎng)10d 在培養(yǎng)0d 1d 3d 5d 7d和10d 分別采1g樣品用平板計數(shù)法測定其金葡菌的數(shù)量 15 石灰氮添加量的確定 試驗設(shè)計根據(jù)培養(yǎng)溫度的檢測結(jié)果 選擇最佳培養(yǎng)溫度 即30 石灰氮的添加量設(shè)為0 2 2 5 3 測定方法取300g牛糞按上述比例的石灰氮混合均勻 在30 培養(yǎng)5d 在培養(yǎng)0d 1d 3d和5d 分別采1g樣品用平板計數(shù)法測定其金黃色葡萄球菌的數(shù)量 16 結(jié)果 圖4牛糞堆肥中添加0 石灰氮時金黃色葡萄球菌對數(shù)值的變化 圖5牛糞堆肥中添加2 石灰氮時金黃色葡萄球菌對數(shù)值的變化 培養(yǎng)溫度的確定 在同一堆肥時間30 金葡菌數(shù)低于20 和37 的金葡菌 因此 30 是最佳培養(yǎng)溫度 石灰氮添加量的確定 17 圖6牛糞堆肥中添加石灰氮時金黃色葡萄球菌對數(shù)值的變化 在30 培養(yǎng)時 添加2 5 石灰氮即可殺滅金葡菌 小結(jié) 18 石灰氮主要靠分解為尿素過程中所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物氰氨和雙氰氨來殺滅病原微生物 其殺菌成分氰氨和雙氰氨的分解速度受溫度和水分的影響 37 和50 時石灰氮的殺菌成分分解速度快 殺菌效果不能持續(xù) 另外37 也適合金黃色葡萄球菌的繁殖 而50 的高溫堆肥條件在實際中很難控制 且在同一堆肥時間30 金葡菌數(shù)明顯低于20 和37 的金葡菌數(shù) 因此 30 是最佳培養(yǎng)溫度 有助于發(fā)揮石灰氮的抑菌作用 在30 溫度下要達到徹底殺滅金黃色葡萄球菌的目的 在牛糞堆肥中至少添加2 5 的石灰氮 19 試驗三牛糞堆肥中添加石灰氮對堆肥發(fā)酵的影響 材料堆肥原料 牛糞 石灰氮試驗場地 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)牛生產(chǎn)實驗室 試驗設(shè)計對照組0 處理組石灰氮的添量分別為2 3 4 即試驗組0 2 3 4 20 堆肥樣品采集分別于第0d 3d 7d 14d 21d 28d 35d 42d 49d 五點采樣 每次采樣300g 混合均勻 測定指標 溫度 將水銀溫度計插入堆體中心部位 每天上午和下午讀數(shù) 取兩次讀數(shù)的平均值 含水率 105 烘24h后稱重 PH值 稱取試樣10g 加50ml去離子水 經(jīng)30min震蕩 靜置30min 用PH計測定 總有機碳 采用KCI浸提 蒸餾法 21 有機質(zhì)測定 總有機碳 1 724 全氮 采用凱氏定氮法 C N 總有機碳量與全氮的比值 種子發(fā)芽指數(shù) 把一張大小合適的濾紙放入滅菌的培養(yǎng)皿中 均勻放入15粒白菜種子 吸取6ml的浸提液于培養(yǎng)皿中 以蒸餾水作對照 每個處理3次重復(fù) 在25 的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d 測定種子發(fā)芽率和根長 處理平均發(fā)芽率 處理平均根長發(fā)芽指數(shù)GI 100 對照平均發(fā)芽率 對照平均根長 大腸桿菌數(shù) 采用稀釋平板法 金葡萄球菌數(shù) 采用稀釋平板法 22 堆體溫度的變化 圖7堆肥溫度的變化 結(jié)果 對照組0 比處理組2 3 4 升溫快 對照組0 堆肥后第3d堆體溫度上升到最高溫39 8 而處理組2 3 4 分別在堆肥的第14d 15d和18d達到最高溫度40 50 44 80 和38 10 試驗組歷經(jīng)高溫之后就進入了長時間的降溫腐熟階段 水分含量的變化 圖8含水率的變化 水分含量基本呈下降趨勢 且處理組2 3 4 的下降幅度大于對照組0 在堆肥開始時水分均維持在71 76 之間 水分含量比較高 到堆肥結(jié)束時各試驗組的水分基本穩(wěn)定在60 左右 23 24 PH值的變化 圖9PH值的變化 各試驗組pH值均隨著堆肥時間的延長而逐漸降低 堆肥結(jié)束時各處理組pH值均基本穩(wěn)定在7 00 8 00左右 符合堆肥腐熟pH值應(yīng)在7 00 8 00之間的標準 總有機碳的變化 圖10堆肥總有機碳的變化 25 各試驗組總有機碳含量均在開始堆肥后的第3天下降幅度最快 說明有機碳是被微生物優(yōu)先利用的碳源 最后其含量均維持在較低水平 各試驗組的總碳含量均呈現(xiàn)下降趨勢 但由于堆肥過程也會有較多氮損失 且牛糞中含有大量難以分解的如纖維素等有機物質(zhì) 故總體而言總碳含量變化不大 有機質(zhì)的變化 圖11堆肥有機質(zhì)的變化 26 在整個堆肥過程中 試驗組堆體中有機質(zhì)含量都隨著時間延長而逐漸下降 在堆肥初期有機質(zhì)降解速度快 在降溫期有機質(zhì)變化不大 至堆肥結(jié)束時 四個試驗組堆體有機質(zhì)含量分別下降到39 24 34 26 33 41 和35 46 全氮的變化 圖12堆肥T N的變化 堆肥初期各處理組全氮略有減少 這是由于有機氮在此過程中強烈分解生成大量的NH3揮發(fā)所致 隨著堆肥的進行 最后的腐熟化階段 有機物分解速度降低 并趨于穩(wěn)定 相對含氮量又逐漸上升 最終全氮含量較起始含量高 27 28 C N的變化 圖13C N的變化 堆肥過程中 各試驗組的碳氮比呈下降趨勢 這是由于隨著堆肥發(fā)酵的進行 總碳和全氮含量持續(xù)下降 但由于添加不同濃度石灰氮而使氮起始和最終的相對含量較高 使堆料的C N逐漸減少 發(fā)芽指數(shù)的變化 圖14GI的變化 圖15白菜種子發(fā)芽 試驗組0 2 3 和4 的初期發(fā)芽率分別為20 87 2 56 0 49 和0 根據(jù)資料 種子發(fā)芽指數(shù)大于80 時 堆肥被認為已達到腐熟 29 30 大腸桿菌數(shù)的變化 圖16堆肥大腸桿菌對數(shù)值的變化 31 小結(jié) 堆肥是殺滅糞便病原微生物非常有效的手段 但處理不當仍可能有環(huán)境與公共安全的風險 本試驗石灰氮的添加起到快速殺滅大腸桿菌的效果 0 對照組堆體溫度迅速升高 而2 3 和4 各處理組高溫出現(xiàn)推遲現(xiàn)象 但大腸桿菌迅速達到檢出界限以下 隨著石灰氮添加量的增加2 3 和4 各處理組總有機碳下降幅度不大 全氮的增加量逐漸減少 種子發(fā)芽指數(shù)提高 各組堆肥結(jié)束時均已達到腐熟 致病性金黃色葡萄球菌的檢出率為20 59 丹參 大黃 枸杞等3種草藥對金黃色葡萄球菌抑菌效果較強 其中丹參對金黃色葡萄球菌的抑菌效果最強 30 是殺滅金黃色葡萄球菌的較理想溫度 在此溫度條件下要達到徹底殺滅金黃色葡萄球菌的目的 牛糞堆肥中至少添加2 5 的石灰氮 石灰氮的添加起到快速殺滅大腸桿菌的效果 對照組0 堆體溫度迅速升高 而2 3 和4 各處理組高溫出現(xiàn)推遲現(xiàn)象 但大腸桿菌迅速達到檢出界限以下 2 3 和4 各處理組總有機碳下降幅度不大 全氮的增加量逐漸 32 全文結(jié)論 減少 種子發(fā)芽指數(shù)提高 各組堆肥結(jié)束時均已達到腐熟 33 34 感謝我的恩師敖日格樂教授 在三年的學(xué)業(yè)生涯中的精心指導(dǎo)與關(guān)懷 借此機會 向恩師道聲誠摯的謝意 感謝在坐的每一位老師和同學(xué) 致謝 后面內(nèi)容直接刪除就行資料可以編輯修改使用資料可以編輯修改