金邊瑞香不定芽的增殖培養(yǎng).doc

金邊瑞香不定芽的增殖培養(yǎng)陳志萍 閔 煒（上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，上海松江：201600）摘要：通過兩次單因子試驗，研究了BA（0.55mgL-1）和NAA（0.11mgL-1）在金邊瑞香不定芽增殖培養(yǎng)中的作用。BA在誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽的過程中起著主導(dǎo)作用。BA濃度在0.5mgL-1時，培養(yǎng)6周產(chǎn)生的不定芽總數(shù)不多，但有效芽（1cm）相對較多,平均3.9個，隨著BA使用濃度增加，產(chǎn)生的不定芽總數(shù)增多，但有效芽數(shù)量減少，BA濃度在3 mgL-1以上時，平均只有1個有效芽。NAA濃度在0.20.5mgL-1范圍內(nèi)，平均有效芽數(shù)在3.83.6個，濃度增加到1mgL-1時，有效芽數(shù)減少到平均1.8個。試驗確定合適的不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+ BA0.5mgL-1+ NAA0.2mgL-1。關(guān)鍵詞：組織培養(yǎng)；金邊瑞香；不定芽增殖；單因子試驗金邊瑞香（Daphan odora var. marginata）是瑞香科瑞香屬的一個變種，葉緣金黃色，花淡紫紅色，氣味芬芳，與長春和尚君子蘭、日本五針?biāo)梢黄鸨煌瞥鐬榻鷪@藝三寶，為我國傳統(tǒng)名花，也是世界名花而倍受人們喜愛，其市場銷量也日益增長。在金邊瑞香的產(chǎn)地仍然以扦插繁殖為主，這種繁殖方式容易使帶病毒的植株繁殖后導(dǎo)致后代產(chǎn)生退化而影響其觀賞價值。通過莖尖組織培養(yǎng)可以減少后代植株的病毒，而且繁殖系數(shù)大，適合于工廠化育苗。本試驗在獲得金邊瑞香莖尖試管芽苗的基礎(chǔ)上，研究細(xì)胞分裂素和生長素在其組織培養(yǎng)快速增殖中的作用。1材料和方法1.1 試驗材料切取在初代培養(yǎng)基中生長的金邊瑞香愈傷組織上再生的23cm長的健壯芽苗，轉(zhuǎn)接入不含植物生長物質(zhì)的MS培養(yǎng)基（MS0）中，經(jīng)二周左右的短期培養(yǎng)，選葉片展開、生長狀況較一致的芽苗作增殖培養(yǎng)的材料。1.2培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基，添加3%蔗糖，并附加不同濃度的生長素（NAA）和細(xì)胞分裂素（BA），pH值5.8。根據(jù)前期試驗的結(jié)果，設(shè)置兩次單因子試驗來分步篩選最佳的BA和NAA的濃度配比。首先固定NAA的濃度為0.2mg L-1，BA濃度變化在0.55mg.L-1范圍，BA和NAA的配比組合見表1。表1 NAA0.2和BA不同濃度組合Table 1 Combination of NAA0.2 and BA with different concentrations編號處理組合（mgL-1 ）1MS + BA0.5 + NAA0.22MS + BA1 + NAA0.23MS + BA2 + NAA024MS + BA3 + NAA0.25MS + BA4 + NAA0.26MS + BA5 + NAA0.2根據(jù)第一次試驗的結(jié)果，再固定BA的濃度為0.5mg L-1， NAA濃度變化在0.11mg .L-1范圍，得BA和NAA的配比組合見表2。表2 BA0.5 和NAA不同濃度組合Table 2 Combination of BA0.5 and NAA with different concentrations編號處理組合（mgL-1）1MS + BA0.5 + NAA0.12MS + BA0.5 + NAA0.23MS + BA0.5 + NAA0.54MS + BA0.5 + NAA11.3 試驗方法將在MS0培養(yǎng)基中生長狀況較一致的芽苗剪成2cm長，轉(zhuǎn)入分裝50ml不同處理培養(yǎng)基的直徑為6cm的培養(yǎng)瓶中，每瓶接一枚芽苗，每個處理接20瓶。培養(yǎng)溫度241,光照強(qiáng)度20mol.m-2.s-1,光照時間12h.d-1。接入增殖培養(yǎng)基后一周開始觀察各處理芽苗的生長狀況，至第6周調(diào)查記錄增殖的芽苗數(shù)，以大于1cm長的芽為有效芽，按隨機(jī)設(shè)計進(jìn)行方差分析1，比較各處理的差異。2結(jié)果與分析2.1 BA對芽苗增殖生長的影響2.1.1 BA對芽苗生長的影響B(tài)A的使用濃度在0.5mgL-1時，培養(yǎng)6周芽苗的頂芽伸長1cm左右，莖基部生直徑12cm左右的蓬松愈傷組織，上面萌生不定芽，長23cm，葉片展開正常。BA使用濃度在1mgL-1時，頂芽伸長量比在0.5mgL-1時要少，莖基部生直徑3cm左右的蓬松愈傷團(tuán)塊，上面的不定芽粗短，大部分的長度不到1cm，并且葉片小而尖。BA濃度在2mgL-1時，莖基部的愈傷團(tuán)更大，上面的不定芽小而密集，長度大于1cm以上的有效芽僅12枚。當(dāng)BA使用濃度增加到3mgL-1至5mgL-1時，接入的芽苗莖桿從中上部就開始腫大開裂，呈疏松的海綿狀，愈傷團(tuán)增大，但不定芽的數(shù)量減少，長度也都在0.5cm以下，有效芽都在1枚左右（見圖版1）。2.1.2 BA對不定芽增殖的影響培養(yǎng)6周后計算各處理中芽苗增殖的有效芽數(shù)（長度大于1cm的不定芽），去除統(tǒng)計中出現(xiàn)的極端值，為方便計算，都取14個觀察值(如表3)，對表3的數(shù)據(jù)作方差分析，得表4。表 3 BA 6種處理的有效芽數(shù)統(tǒng)計Table 3 Statistical form of the number of effective buds induced by 6 types of treatments of BA處理編號有效芽數(shù)目（個）平均數(shù)1233333444445673.9 2111222333334452.6 3111111111222221.4 4111111111111111.0 5111111111111111.0 6111111111111111.0 表4 表3資料的方差分析Table 4 Variance analysis of the data of table 3變異來源DFSSMSFF0.01處理間誤 差578102.9645.3520.590.58135.413.20總變異83148.32從表4的分析得到處理間的F值為35.41大于F0.01的值3.20，即BA不同濃度誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽的數(shù)目有極顯著的差異，故對BA的6種不同濃度產(chǎn)生不定芽的平均數(shù)作多重比較。由表4中誤差的均方值（MS）計算得ES值為0.2，再查表1，得到不同處理組合有效芽數(shù)兩極差之間所包含的個數(shù)（P）所對應(yīng)的SSR0.01值，并求得各個P下的最小顯著極差LSR得表5。表5 BA 6種處理的有效芽數(shù)目的最小顯著極差Table 5 Minimum significance range of the number of effective buds induced by 6 types of treatment of BAP23456SSR0.013.74 3.89 4.01 4.09 4.14 LSR0.010.75 0.78 0.80 0.82 0.83 根據(jù)表3中BA 6種處理的有效芽平均數(shù)，按照從大到小的順序排列，并對照表5的各對應(yīng)值，比較差異顯著性見表6。表6 BA 6種處理的有效芽數(shù)目的差異顯著性Table 6 Significance of the number of effective bud induced by 6 types of treatment of BA處理有效芽平均數(shù)（個）差異顯著性（ 1%）BA0.53.9ABA12.6BBA21.3CBA31CBA41CBA51C由表6可見，BA濃度在0.5mgL-1時平均有效芽數(shù)為3.9個，極顯著地多于其他濃度的有效芽數(shù)，BA的濃度在1mg.L-1時，平均有效芽數(shù)2.6個，極顯著地多于濃度在2mgL-15mgL-1時的平均有效芽數(shù)。隨著BA濃度的增加，則叢生芽變得小而密集，但有效芽的數(shù)量顯著減少。由此可以確定BA的濃度以0.5mgL-1為宜，下一步試驗NAA濃度在0.11mgL-1范圍內(nèi)對不定芽增殖的效應(yīng)。22 NAA對不定芽增殖的影響接入NAA不同濃度培養(yǎng)基中的芽苗經(jīng)培養(yǎng)6周后，統(tǒng)計各處理的有效芽數(shù)（長度大于1cm的不定芽），去除統(tǒng)計中出現(xiàn)的極端值，為方便計算，都取15個觀察值，如表7。表7 NAA 4 種處理的有效芽數(shù)目統(tǒng)計Table7 Statistical form of the number of effective buds induced by 4 types of treatments of NAA處理編號有效芽數(shù)目（個）平均數(shù)11111112333444452.521222233335556783.831111122234568993.641111111111234441.8對表7的數(shù)據(jù)作方差分析得表8。表8 表7資料的方差分析Table 8 Variance analysis of the data of table 7變異來源DFSSMSFF0.05F0.01處理間誤 差35640.98239.8613.664.283.19*2.784.16總變異59280.85從表8的分析得到處理間的F值為3.19大于F0.05的值2.78，而小于F0.01的值4.16，即NAA不同濃度之間誘導(dǎo)產(chǎn)生不定芽的數(shù)目有顯著的差異，故對NAA的4種不同濃度產(chǎn)生不定芽的平均數(shù)作多重比較。由表8中誤差的均方值（MS）計算得ES值為0.53，再查表1，得到不同處理組合有效芽數(shù)兩極差之間所包含的個數(shù)（P）所對應(yīng)的SSR0.05值，并求得各個P下的最小顯著極差LSR得表9。表9 NAA 4種處理的有效芽數(shù)目的最小顯著極差Table9 Minimum significance range of the number of effective buds induced by 4 types of treatments of NAAP234SSR0.052.832.98 3.08LSR0.051.501.591.63根據(jù)表7中NAA 4種處理的有效芽平均數(shù)，按照從大到小的順序排列，并對照表9的各對應(yīng)值，比較差異顯著性見表10。表10 NAA的4種處理的有效芽數(shù)目的差異顯著性Table 10 Significance of the number of effective buds induced by 4 types of treatment of NAA處理有效芽平均數(shù)（個）差異顯著性（ 5%）NAA0.23.8aNAA0.53.6aNAA0.12.5a bNAA11.8b由表10可見NAA的濃度在0.2 mgL-1和0.5 mgL-1時，平均有效芽數(shù)分別為3.8個和3.6個，顯著的多于濃度為1 mgL-1時的有效芽數(shù)（1.8個），但和0.1mgL-1時的有效芽數(shù)（2.5個）沒有顯著差別。NAA在濃度為0.1 mgL-1時的有效芽數(shù)和1mgL-1時的有效芽數(shù)沒有顯著的差別。3 討論對金邊瑞香無菌培養(yǎng)產(chǎn)生的不定芽進(jìn)行增殖，可以由主莖上的腋芽萌生側(cè)枝，但主要是靠莖桿基部產(chǎn)生愈傷組織，然后從愈傷組織上再生不定芽，在這一過程中細(xì)胞分裂素起著重要的作用。趙綺等（2003）的試驗認(rèn)為此過程需要較高的細(xì)胞分裂素用量（ZT1 mgL-1 ）2，而繆雄平、李惠榮（1994）的試驗則認(rèn)為此過程需要較低的細(xì)胞分裂素用量（BA0.10.5 mgL-1），并且生長素類的總量要高于細(xì)胞分裂素的用量（IAA0.5 mgL-1+IBA0.5 mgL-1）3。本試驗的結(jié)果是在NAA濃度為0.2mgL-1時，BA使用濃度在0.5mgL-1的水平，產(chǎn)生的叢生芽的數(shù)量不很多，但有效芽數(shù)量相對較多，平均有3.9個，葉片展開正常，芽苗健壯。隨著BA濃度增加，主莖基部的愈傷組織體積增大，再生的不定芽數(shù)量增多，但芽苗變??；BA濃度在3mgL-1以上時，芽苗極度密集變小，甚至表現(xiàn)畸形，而有效芽則顯著減少，平均只有1個。生長素（NAA）對金邊瑞香產(chǎn)生不定芽的作用比較緩和，在0.20.5 mgL-1范圍內(nèi)產(chǎn)生的有效芽數(shù)目沒有顯著的差異，平均有效芽數(shù)在3.83.6個，當(dāng)NAA濃度增加到1mgL-1時，產(chǎn)生的有效芽數(shù)目才顯著地減少，平均為1.8個有效芽。考慮到大量繁殖時的生產(chǎn)成本，筆者認(rèn)為金邊瑞香試管苗的增殖培養(yǎng)，以添加BA0.5mgL-1和NAA0.2 mgL-1為適宜。參考文獻(xiàn)1 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)主編田間試驗和統(tǒng)計方法M農(nóng)業(yè)出版社，1987年第二版2 趙綺，周冬法，等金邊瑞香離體培養(yǎng)中芽和愈傷組織誘導(dǎo)初步研究J浙江林業(yè)科技，2003，23（6）：20-253 繆雄平，李惠榮金邊瑞香的快速芽增殖和發(fā)根J寧德師專學(xué)報，1994，6（1）：32-36Multiplication of The Adventitious Bud of Daphan odora var. marginata in vitroChen Zhiping，Min Wei（Shanghai Vocational and Technical College of Agriculture and Forestry，Songjiang，Shanghai，201600）Abstract: The effects of BA(0.55mgL-1）and NAA（0.11mgL-1）on the propagation of adventitious bud of Daphan odora var. marginat were studied by a method of twice single factor testBA played a leading act on the induction of adventitious budWhen the concentration of BA was on the level of 0.5mgL-1，the total number of adventitious bud induced was not much in 6 week period，but the number of effective bud （1cm）was relatively high, with the average of 3.9Following the concentration of