「溶劑揮發(fā)法制備微球的研究」.doc

溶劑揮發(fā)法制備微球的研究摘要:微囊化過程中通過蒸發(fā)技術去除疏水性聚合物溶劑，及用生物降解的聚合物和羥基酸共聚物來制備微球和微囊近年來已被廣泛報道。聚乳酸（PLA）和 聚乳酸-羥基乙酸（PLGA)微球的性能已被廣泛的研究。包括水溶性化合物蛋白質和肽的包封給研究人員提出了嚴峻的挑戰(zhàn)。這些實體的成功包封需要微球高載藥，通過包封法來防止蛋白質降解，和從微球中進行可預測的釋放藥物化合物。為了實現(xiàn)這個目標，多乳液技術和其他創(chuàng)新性修改形成了常規(guī)溶劑蒸發(fā)法。關鍵詞：微球；溶劑蒸發(fā)；水溶性化合物；肽；蛋白質；多乳液介紹：根據(jù)聚合物的生物相容性，用溶劑蒸發(fā)法生產(chǎn)聚乳酸（PLA），和聚乳酸-羥基乙酸（PLGA）微球已被廣泛研究。在溶劑蒸發(fā)過程中，聚合物被溶解在一個合適的有機溶劑中，然后藥物被分散或溶解于該聚合物溶液中。所得到的溶液或分散液乳化在水性的連續(xù)相中以形成離散的液滴。微球的形成中，有機溶劑必須先擴散到水相中，然后在水/空氣界面蒸發(fā)。隨著溶劑的蒸發(fā)，適當?shù)倪^濾和干燥后，可以得到微球硬化和自由流動的微球。 溶劑蒸發(fā)法已被廣泛用于制備許多不同的藥物的PLA和PLGA微球。影響微球的特性的幾個變量已經(jīng)確定，包括藥物的溶解性能，內部形態(tài)，溶劑類型、擴散速率、溫度、聚合物組合物和粘度，和載藥。所用溶劑揮發(fā)法的有效性取決于在顆粒內的活性劑的成功截留，這個過程是制備不溶性或難溶性藥物最成功的方法。很多具有不同理化性質并能配制成聚合物微球的的藥物，有抗癌藥物，麻醉藥物，局部麻醉藥，類固醇，生育控制劑。可生物降解的聚合物基質蛋白穿過曲折的充滿水的路徑擴散，及穿過聚合物基質或通過矩陣侵蝕釋放出去。溶劑蒸發(fā)技術的進展已允許水溶性強的藥物、活性化合物如胺類藥物，蛋白質，肽,和疫苗成功的運用，本文將總結溶劑蒸發(fā)技術的進展，和由該方法產(chǎn)生的可降解微球相關特性。圖2.有機相體積對平均粒徑的影響。實驗是在兩個不同的HPMC濃度進行（H）0.8%和（X）1.6%（w/v），攪拌速度為800 rpm和水相體積250ml.2. 溶劑蒸發(fā)法制備微球的研究2.1常規(guī)O/W包封 在過去的25年，制備藥物化合物PLA或PLGA微囊的溶劑蒸發(fā)法已被廣泛研究。此方法的前提是在水相中的聚合物溶液先進行乳化。一種方法示意圖如圖1所示。不混溶液體的攪拌生成O/W乳液。該藥物的物質是分散在或溶解在聚合物/溶劑系統(tǒng)中或被包裹在乳液的分散相里。繼續(xù)攪拌，直到溶劑分區(qū)進入水相，并通過蒸發(fā)除去。這一過程導致含有的活性基團的微球硬化。 幾種方法已被用來實現(xiàn)連續(xù)相油相的分散。最常見的方法是使用一個螺旋槳式葉片連接到一個變速馬達。隨著發(fā)動機轉速的增加，由螺旋槳誘導的高剪切力導致分散液滴尺寸減小。 均質化也被用來產(chǎn)生一種乳液。這種均質劑分散體系裝備由一個定子和轉子式葉片連接到一個高速變頻電機配備。自從高剪切用于生產(chǎn)乳液，所得到的產(chǎn)品具有比由常規(guī)攪拌產(chǎn)生的乳液更小的顆粒尺寸。其他方法有微射流均質機均質、超聲和電位分散法產(chǎn)生微乳。 2.2.工藝參數(shù)對水溶性差的微球的理化性質的影響 O/W乳化溶劑蒸發(fā)法已被成功地用于包封水溶性差的藥物包括氯丙嗪，強的松龍，氫化可的松。表面活性劑的比例、溶劑的蒸發(fā)速率、溶劑類型、和聚合物分子量對理化特性、封裝效率、及從可生物降解微球的難溶性藥物釋放的影響已報道。Sansdrap and Moes調查了一個難溶性鈣通道阻斷劑，硝苯地平微球的幾個工藝參數(shù)的影響，包括攪拌速度、表面活性劑濃度、有機相的體積和載藥量。這些參數(shù)對微球粒徑分布，藥物含量，和釋藥的影響被報道。水相中的分散劑羥丙甲纖維素的變化范圍為0.4%2.4%，并且發(fā)現(xiàn)它的平均粒徑從28.5mm減少到12.9mm。 同樣，發(fā)現(xiàn)當攪拌速率增加，該微粒變小，粒徑分布減少。研究人員得出結論，高水平的HPMC、攪拌速率、精力充沛的條件有利于有機相的最大分裂。 用平均直徑的減少測量作為一個有機相體積的增加功能，如圖2所示。 隨著溶劑體積增大，微球的平均粒徑減小。基于乳液內部相的粘度增減變化，這些結果被解釋，正如聚合物的重量保持恒定。顆粒大小對載藥14%的微球的影響的釋放曲線如圖3所示。平均粒徑為12和18mm的微球，在初始5小時內表現(xiàn)出載藥的10%的初始釋放. 較大的微球150小時后釋放，隨后400小時后藥物線性釋放80%。12mm和18mm的初始釋放，有機溶劑進入水相的擴散速率強烈影響有機溶劑相的聚合物的析出速率。有機溶劑的低水溶性導致緩慢的聚合物沉淀，這有利于完整分區(qū)的藥物進入水相。為了增加微球的載藥量，通過加入水溶性有機溶劑進入系統(tǒng)的有機相。圖3.顆粒大小分別為：（N）11.7毫米，（）17.5毫米和（H）83毫米的載藥14%的微球的的釋放曲線。圖4.微球形成示意圖。 李和同事建立了一個數(shù)學模型，表示在微球的形成過程中的傳質過程包括兩個變量，即內在變量，即溶劑聚合物的相互作用參數(shù)，和外在變量，即分散相/連續(xù)相比，分散相組成和溫度。 該模型認為，分散相和連續(xù)相分開，如圖4所示。該系統(tǒng)的理化性質傳送參數(shù)，包括溶劑-非溶劑體系與溶劑-聚合物體系的擴散系數(shù)，或包括聚合物溶劑，溶劑-非溶劑和非溶劑-聚合物相的相互作用參數(shù)。 該模型是使用鮭魚降鈣素PLGA微球系統(tǒng)測試（SCT），這個系統(tǒng)用二氯甲烷作為溶劑，甲醇為助溶劑，油酸鈉溶液為非溶劑。 結果表明預測和實驗數(shù)據(jù)是一致性。最近，孔蒂等人，評估了用溶劑蒸發(fā)法制備包載吲哚美辛的PLGA微球的三個工藝參數(shù)。 研究了連續(xù)相、乳化攪拌速度和分散相對連續(xù)相比的聚乙烯醇濃度的影響。 結果發(fā)現(xiàn)，低當（0.5%）量的PVA用于系統(tǒng)時，包封率大小依賴于乳化攪拌速度，藥量從17.5%變到90%。 溶劑揮發(fā)法制備微球的溶劑消除率影響微球的理化性質。 Izumikawa等人發(fā)現(xiàn)通過減壓溶劑蒸發(fā)或大氣條件下的溶劑蒸發(fā)法制備的孕酮微球在物理特性和藥物釋放曲線上表現(xiàn)顯著差異。減壓溶劑蒸發(fā)法所制備的微球（RSE）的產(chǎn)量和包封率比大氣下溶劑蒸發(fā)法制備的微球（ASE）要好。這些微球通過電鏡掃描檢查其表面形態(tài)發(fā)現(xiàn)ASE微球表面多孔而且很粗糙。相反，由RSE方法所產(chǎn)生的微球有一個明顯的光滑表面。ASE法制備的微球的X射線衍射掃描過程如圖5所示。ASE方法制備的30%載藥微球，除了結晶聚（L-乳酸）的峰，還有結晶孕酮的峰。RSE方法制備的微球，另一方面因結晶PLA沒有出峰，這表明PLA只有在非晶狀態(tài)存在。此外，RSE法制備的微球與結晶的孕激素相對應也沒有出峰，這表明藥物分散在非結晶聚合物網(wǎng)絡里。假定聚合物結晶在降低壓力下溶劑去除太快。 圖5.X射線粉末衍射掃描加載的聚（L-乳酸）孕酮微球：（a）PLA粉末；（b）結晶孕酮；（C）用大氣溶劑蒸發(fā)法制備的含5%孕激素的微球；采用大氣溶劑揮發(fā)法制備的含（ 30%）孕酮的微球；采用減壓溶劑揮發(fā)法制備的含30%孕酮藥微球；減壓溶劑揮發(fā)法制備含40%孕酮的微球。聚合物基質的結晶度對微球的藥物釋放有顯著的影響，如圖6所示。兩種微球的藥物釋放率隨載藥量的增加而增加。對于ASE制備的微球，在初始階段有一個快速釋放，其釋放速率比RSE制備的微球的釋放速率更快。圖6.低壓溶劑揮發(fā)法制備的緩釋微球及大氣溶劑揮發(fā)法制備的微球的孕酮的釋放。孕酮量：（5%）；（10%）；（20%）。 賈利勒和尼克松針對 PLA聚合物的分子量與苯巴比妥的釋放動力學的相關關系。用三種不同分子量和四個不同核心聚合物比率的PLA制備含苯巴比妥（PB）的微囊。苯巴比妥從這些微球的釋放主要依靠擴散控制，但膨脹和侵蝕也有助于釋放過程。2.3 殘留溶劑 藥物制劑的殘留溶劑，包括微球，由于這樣的殘留物的毒理學風險，受到越來越多的關注。在乳化溶劑揮發(fā)法中常用的微囊化溶劑，如二氯甲烷或氯仿，作為一種殘留在微球里的有機揮發(fā)性雜質。目前，USP XXIII概述了殘留溶劑的限度。對二氯甲烷的極限是500 ppm，和氯仿的極限是50 ppm。為確定在微球制備中溶劑殘留量，Bitz and Doelker用頂空氣相色譜法測定乳化溶劑蒸發(fā)或噴霧干燥制備的微球的殘留溶劑總量。用旋轉蒸發(fā)器（348c，20 kPa）從微球里去除二氯甲烷，和微球真空下保存三天。 研究人員發(fā)現(xiàn)，對所有樣品的測試，殘留的二氯甲烷濃度都在500 ppm以下，但制備微球的氯仿超過溶劑殘留量的推薦濃度。氣相色譜分析法已被其他研究人員用來確定微球中的殘留溶劑。3.水溶性化合物，蛋白質和多肽的微膠囊。3.1 無水系統(tǒng) 水溶性藥物通過常規(guī)的O/W溶劑蒸發(fā)法的包封，通常會導致藥物從有機相快速分布，并進入水相， 導致微球很少或沒有藥物加載。為了規(guī)避這個問題，創(chuàng)新性修改傳統(tǒng)的O/W型溶劑蒸發(fā)法已被報道。無水系統(tǒng)，它是由一個有機聚合物相乳化在不混溶的油中組成，已被用于生產(chǎn)的O/ O型的微球。無水系統(tǒng)明顯降低藥物進入連續(xù)相的分布趨勢。表明藥物不溶于油相的。Sturesson和他的同事用油包油系統(tǒng)生產(chǎn)馬來酸噻嗎洛爾PLGA微球。以乙腈為溶劑的藥物和聚合物和麻油被用于連續(xù)相，吐溫80可用作乳液穩(wěn)定劑。 PLGA /藥物溶液被逐滴加入到麻油里，并大力攪拌。 為了進一步減小顆粒尺寸，系統(tǒng)處理。繼續(xù)攪拌，直到乙腈蒸發(fā)后收集微球。 微球用正己烷沖洗去除殘余油。藥物從微球釋放是三相圖，如圖7所示。最初，一個突發(fā)被觀察，由于藥物的釋放位于微球表面的附近。隨后是一個緩慢釋放時期，這是由于微球的降解和微球中藥物的擴散。 第三個階段被描述為二級釋放，并歸因于聚合物基質的增溶和侵蝕的增加。藥物的初始釋放量隨著聚合物濃度的增加而降低。這種類型的類似釋放特性已被其他研究人員報告。圖7.噻嗎洛爾從PLGA粒子的釋放顯示三相行為及在制備PLGA濃度的影響：（H）5%PLGA（S）10% PLGA，（3）20%PLGA。王和同事研究了配方對牛血清白蛋白從PLGA微球控釋的的影響。用O/O、O/W，或W/O/W乳液技術制備牛血清白蛋白微球與不含卡波姆951（卡波姆951）的(聚DL-乳酸羥基乙酸共聚物）微球和研究白蛋白在體外的釋放。分別用O / O，O / W，或（W / O）/ W乳化方法制備的微球的粒徑分別為500mm，25-100mm，或10-20mm。真空干燥法制成的（W/ O）/W微球可觀察到白蛋白釋放的最大突躍。這種突躍的效果可用凍干制備微球方法消除。 用O/W乳液方法制備的有卡波姆951的微球比那些沒有卡波姆951的微球有較高的初始釋放速率。在O/O,O/W，或（W/ O）/W的方法制備的微球中白蛋白可以持續(xù)釋放54，36，或34天。 研究者得出結論，微球蛋白的釋放可以通過制備方法來控制。 含有甘氨酸及其多肽（二甘氨酸，三甘氨酸，四甘氨酸，和五甘氨酸）的 PLGA微球通過O / O技術制備。內相是微米化甘氨酸多肽懸浮在聚乳酸和丙酮溶液里。外相是含有0.3%（v/v）失水山梨醇油酸乳化劑的礦物油組成。升溫至358一段時間，讓溶劑蒸發(fā)。過量正己烷倒入微球懸浮液并攪拌一小時，微球硬化收集。 考察了分散相PLA濃度、乳化劑濃度、乳化時間等因素，結果見表1。對甘氨酸和二甘氨酸微球的釋放特性分析顯示，它的釋放通過基質控制擴散過程為主，通過擴散路徑的孔隙率控制釋放速率。三甘氨酸和四甘氨酸微球控釋釋放與已知溶解度差的化合物是一致的。表1.含甘氨酸DL-PLA微球制劑的研究：DL-PLA濃度的影響，乳化時間和溶劑蒸發(fā)時間對粒徑分布和包封的研究 變量水平粒徑分布（%）包封率（%）0-38 m38-125 m125-250 m總量38-125m分散相的DL-PLa聚合物 濃度(% w /w)2.85.410.318.727.334.8243327.54311.84.711.3726778.315.760.373.8乳化劑濃度(Arlacel-83) (% v /v)0.00.10.30.50.72.0-29.52431.5289.5-32.54330.528.512-1111.37.56.524-7378.369.563.545.5-74.273.876.376.871.1乳化時間(ET）和溶劑蒸發(fā)時間 (SET)(min)ET151511SET15115219.527.823243641.841.5439.510.810.811.36580.375.378.364.364.374.273.8 3.2.多乳液體系 3.2.1W/O/W多重乳化系統(tǒng) 載藥的制備和表征，包封率，和可生物降解的聚酯微球的形態(tài)學被Herrmann和Bodmeier報道，這些含有醋酸生長抑素和聚（D，L-丙交酯），聚（D，L-丙交酯/乙交酯），或聚（L-丙交酯）的微球基于多個W / O / W型乳狀液的配方用一種改進的溶劑蒸發(fā)法制備。W/O乳液的內部水相容積率的增加導致較低的包裝效率。有機溶劑乙酸乙酯取代二氯甲烷包封率降低，如表2所示，同時增加了微球的多孔性。包封率不影響聚合物的類型和分子量，除了非常低的分子量的聚合物制備的微球。制備條件實質上影響微球的形態(tài)和孔隙率。 主要乳液的穩(wěn)定性是成功包封多重乳液的一個先決條件。schugens等人研究了乳液穩(wěn)定性對采用W/O/W復乳蒸發(fā)技術和不同分子量的兩種半晶L-聚丙酯制備的微球的孔隙率和形態(tài)的影響。L-聚乳酸分子量大幅增加需要稀釋聚合物的溶液以防止過高的粘度，并導致不穩(wěn)定的乳液和更多的多孔固體微球。認為半結晶聚乳酸不適合緩釋微粒的制備。得出的結論是，從PLA基質排除內部水滴的L-聚乳酸的結晶度影響乳液穩(wěn)定性。這種排斥對一個雙乳液制備微粒的包封率，形態(tài)和孔隙率產(chǎn)生不利影響。研究緩沖液或鹽添加到內部水相和/或外部水相后對醋酸生長抑素聚乳酸微球的性質的影響，赫爾曼和bodmeier 采用W/O/W復乳溶劑蒸發(fā)法制備的微球和合成的微球具有包封率，微球釋藥和形態(tài)特性。添加緩沖液或鹽到內部水相產(chǎn)生多孔微球，如圖8所示（a）。 然而，外部水介質中的鹽的加入導致一個密集的和均勻的聚合物基質形成（圖8（b）。藥物釋放曲線包括先是一個快速藥物釋放階段，隨后緩慢釋放階段。 這種釋放模式與在藥物的釋放曲線的許多基質-類型的藥物傳遞系統(tǒng)是一致的，可以分為2個階段，一個快速釋放階段，代表藥物釋放的擴散通過流體填充的孔隙，和緩慢釋放階段的肽的釋放通過聚合物基質。多孔微球越多獲得包封率越低。添加的緩沖鹽到內部的水相由于滲透壓壓差，從外部水相的大量涌入。這導致在一個更多孔的微球結構，更快的藥物釋放，和較低的包封率。 圖8.掃描CaCl2在內部和/或外部水相制備的生長抑素聚乳酸微球的電子顯微照片：（a）0.38 mol/L CaCl2內部水相；（b）0.38 mol/L CaCl2內部與外部相。 索里亞諾和同事研究表面活性劑在雙乳化溶劑蒸發(fā)技術的主要特點的影響和來自于PLA和PLGA微球的BSA的體外釋放曲線。采用高壓均質機或超聲波制備含BSA的主要乳液。將乳液倒入1%聚乙烯醇溶液，在58和8000 rpm轉速下攪拌一分鐘產(chǎn)生W / O / W型乳液。 在室溫下，250rpm轉速的時候，溶劑蒸發(fā)2小時。高壓均質機制造的微球與超聲波制備的相比，有一個較低的牛血清白蛋白的捕集效率和較高的爆炸效果，這表明一個非常緩慢的釋放率。微球的制備有無表面活性劑，使用超聲波進行比較。BSA從PLGA微球的釋放是連續(xù)的，但是，含表面活性劑的HLB 6批次中表現(xiàn)結合BSA的55%的初始釋放，同時HLB 7批次顯示較少的爆發(fā)效應和較慢的釋放速率，如圖9。PLA微球在體外試驗的開始，結合藥物釋放一定比率，達到了高峰時，觀察到?jīng)]有進一步的釋放藥物。作者認為，BSA結合到聚合物基體。 圖9. DL-PLGA (70 / 30) 共聚合物 中BSA的釋放曲線：HLB對BSA釋放時的影響；（m）無表面活性劑，（J）HLB值56，（x）,HLB值57。 Park和他同事也觀察到包封蛋白不完全的釋放。碳酸酐酶并入聚（乳酸-羥基乙酸共聚物）微球和蛋白釋放和穩(wěn)定性研究了兩個多月。 碳酸酐酶釋放最初很快，然后主動釋放緩慢且不完全。動力學緩慢釋放是由于微球蛋白聚集和非特異性吸附。表明在雙乳液制備中蛋白質的顯著變性和聚合。一些輔料，如二硫蘇糖醇和十二烷基硫酸鈉提高動力學釋放的部分原因是由于增加蛋白質的穩(wěn)定性。蛋白從快速降解的微球中釋放出來，由于介質中降解產(chǎn)物的積累，使蛋白嚴重地水解和失去了催化活性。得出的結論，碳酸酐酶從脂肪族聚酯微球中釋放是一種聚合物組合物的功能?？贫鞯热耸褂酶叻肿恿康拈L期的聚合物（乳酸-羥基乙酸）研究了水溶性蛋白。含有異硫氰酸熒光素標記的牛血清白蛋白和辣根過氧化物酶的PLGA微球由改性的溶劑蒸發(fā)法制備成雙乳液W / O / W型。微球的直徑范圍為55mm95mm和90%以上的包封率。 未封裝的辣根過氧化物酶在378，幾天活性喪失80%，而包封的酶在378，21天后仍保留55%以上的活性。穩(wěn)定性研究表明，酶被微球包封在內部可以保護酶活性的喪失。在體外釋放的研究表明，通過簡單地改變制備過程中的因素，如混合率和內部水相和有機相的體積，可以實現(xiàn)不同的釋放曲線和釋放速率。 BSA的累計釋放率作為有機相體積的函數(shù)如圖10所示。通過掃描電子顯微鏡和凝膠滲透色譜進行降解研究分析表明，蛋白質釋放機制主要是通過基質侵蝕。圖10. 在體外，PLGA微球的BSA隨時間的累積釋放（75:25 L / G）作為有機相體積函數(shù)：（H）2ml，（S）1ml，和（D）0.7 mL二氯甲烷。圖是平均2到5個實驗得出的結果。 探討PLGA微球的內部和外部結構的內部水量的影響，用0到22.7%的內部水量準備五批牛血清白蛋白PLGA微球，及評價溶劑去除過程中白蛋白微球的形態(tài)和釋放。初始的內水相體積分數(shù)為5.6%時，制備出致密、無孔聚合物殼層空心微球。然而，一個初始體積分數(shù)為22.7%，導致空心微球表面多孔。配出3 h后，90%以上的白蛋白保持包封狀態(tài)，具有致密無孔聚合物殼層。3.2.2.W/O /O or W/O / O /O型的多乳 巖田聰和麥吉尼提開發(fā)了W / O / O / O型多乳。用多重乳化溶劑蒸發(fā)技術制備的含水（W / O）的乳液的PLA或PLGA多相微球。 以乙腈為溶劑，和輕質礦物油組成連續(xù)相的包封工藝。根據(jù)特殊的制備條件，模型水溶性化合物的理論載藥率是80100%。用電子顯微鏡掃描多相微球的橫截面發(fā)現(xiàn)里面有W / O乳液。這表明，W/O/O/O/O型多相微球體屬于儲層型的給藥裝置。這種類型的多乳液體系的利用允許將W/O乳液包封在聚合物微球里。在乳液中的油可以防止內部的蛋白質和聚合物/溶劑系統(tǒng)之間的接觸。蛋白從聚合物/溶劑體系的隔離防止由聚合物或溶劑給蛋白質造成的可能變性。同樣，由于反應性蛋白或藥物化合物的聚合物降解的可能性也有限。奧唐奈和同事用多重乳液電位分散技術制備了乳酸-羥基乙酸共聚物多相微球。水溶性化合物在水相中溶解和在油中乳化，形成一個穩(wěn)定的乳液。主要乳液分散在PLGA和乙腈溶液（O）形成一個W / O / O乳液。W / O / O乳液使用電位分散技術再分散在輕礦物油（O）的硬化液里，如圖11所示，產(chǎn)生一個很窄的粒度分布和選擇性分布的W / O / O / O型微球。 微球的大小是采用不同的導電輸液管內徑或導電管電壓的變化來控制。粒徑分析顯示，通過這種方法制備的20mm40mm的范圍內的微球有80%粒徑分布很窄，相比于廣泛分布的由傳統(tǒng)的攪拌方法制備50mm500mm的微球。 馬來酸氯苯那敏用電位滴定法制備有88.9%包封率，用攪拌方法制備有74.3%的包封率。3.3。蛋白微球的釋放薩等人研究不同共聚物制備的可生物降解的微囊制劑的牛血清白蛋白的釋放。共聚物和聚合物與蛋白質的比例被發(fā)現(xiàn)影響的白蛋白釋放曲線如圖12所示。使用的聚合物的量的增加引起微膠囊具有致密，較少的多孔，從而抑制了突發(fā)效應。微球的孔隙率也與初始的脈沖效應和微球的釋放模式有關。根據(jù)微膠囊制劑，可控性和可預測的白蛋白釋放曲線，可以被觀察到的零級或一級動力學描述。得出的結論是，牛血清白蛋白的零級或一級的釋放動力學用生物降解微膠囊可以實現(xiàn)。含卵清蛋白的控釋微粒用兩種不同降解速率的（丙交酯乙交脂）共聚物制備，小鼠口服給藥研究抗體反應。與可溶性卵清蛋白免疫的一組小鼠比較，兩種聚合物表現(xiàn)出增強的血清IgG和唾液IgA抗體反應。反應的水平被認為是聚合物的依賴。聚合物降解越快對高水平的唾液IgA抗體的誘導越有效，聚合物降解越慢對血清IgG抗體的誘導越有效。得出的結論是，口服免疫后，微粒有能力誘導增強分泌和包裹卵清蛋白全身的抗體反應。圖12.聚合物組合物對膠囊制劑釋放的影響是相似的，如型材。BSA（15mg）裝入0.3gPLGA 75:25（特性粘度0.48l/g）和0.1gDL-PLA（MW 5 2000）（M）；0.4gPLGA和0.1gPLA（D）；0.4gPLGA和0.2gPLA（N）；0.5gPLGA和0.1 gPLA（s).制備的微膠囊。制備微囊的釋放蛋白作為疫苗佐劑，通過多重乳液W/O/W法制備PLA和PLGA和三型蛋白混合的五種微膠囊制劑。微囊在體外吸水，水解，釋放和小鼠體內的釋放和免疫反應進行了評價。微囊表現(xiàn)蛋白的持續(xù)釋放。所有微囊制劑保水度是相近的，水的吸收隨聚乳酸和聚乳酸-羥基乙酸的量的增加而增多。微囊化的HIV疫苗在體外評價粒頸、粒度分布、微粒的表面結構，抗原負載水平，包封率，濕度，釋放和穩(wěn)定性。對豚鼠進行了口服免疫，聯(lián)合口服和皮下免疫后對毒性和療效進行了評價。微粒是安全的，無熱原，并誘導高水平的血清IgG抗體和中和抗HIV抗體。用疏水作用色譜和Zeta電位分析研究模型蛋白抗原包封或吸附后聚乳酸微球表面特性的變化，和鼻黏膜免疫豚鼠后檢測免疫反應。蛋白吸附遵循古典Langmuirian模型，可能是由極性相互作用的影響。蛋白質吸附升高表面粒子的疏水性，程度取決于蛋白。未涂層和涂覆蛋白的聚乳酸微球有更少的疏水性比乳膠控制。在微球制備中的表面活性劑也影響疏水性。較強疏水性制劑相比較低的疏水性的導致一個更強大和持久的免疫反應。得出的結論是抗原相關微球的疏水性增加可能提高免疫反應。4.大分子或反應性化合物誘導的聚合物降解4.1.蛋白質，反應性化合物，或加工條件引起的聚合物降解 牧野等報道，血漿蛋白對聚（L-乳酸）微囊降解的影響與在微囊/吸附蛋白層接口的潛在分布有關，并且由于蛋白質的存在引起PLA溶解度的增加。 通過加入白蛋白加速，G -球蛋白和纖維蛋白原，在水性介質PLA微囊的降解率是加速。正如這些研究人員以前報道的，中間分子量的PLA分子被認為退化成乳酸。乳酸釋放到本體溶液中的量作為各種蛋白質溶液的降解周期函數(shù)，如圖13所示。 對于所有的蛋白質，隨著濃度的增加，PLA降解產(chǎn)生乳酸的釋放量也增加。 血漿蛋白在緩沖液中的存在加速了PLA分子中酯鍵的斷裂。工作者得出結論，蛋白質的存在增加了PLA的溶解性引起PLA分子擴展的形式相應的加速了PLA微囊降解。 圖13.不同血漿蛋白濃度（D）30mg/ml；（G）5mg/ml；（S）0.1mg/ml；（N）0mg/ml，PLA微囊生成的乳酸量。 莫爾丁和同事發(fā)現(xiàn)，在第三化合物硫利達嗪存在下，PLA（聚乳酸）降解率加速。含50%硫利達嗪自由基的微囊的PLA成分在微囊制備及在溶出研究過程的分子量明顯降低。 在安慰劑微球中聚合物28（1997）25 - 42 37沒有水解或硫利達嗪氨基被質子化成嘧啶鹽的形式。降解率的提高是由于胺影響聚（乳酸）的水解。據(jù)報道攪拌和超聲的方法用來生產(chǎn)微球，以及由此產(chǎn)生的微球往往表現(xiàn)出廣泛的粒徑分布和低載藥。 超聲處理，通過探頭或流通池，可以產(chǎn)生小區(qū)域強烈的熱可能過早降解聚合物。制備生物降解微球的電位差分法之前被作者報道過。在該方法中，一個帶電的輸液管定位在目標陽極上。正如聚合物溶液從輸液管中流出，溶液分散由于陰極和陽極之間的電位。研究加工工藝對（PLA）和（PLGA）生物降解微球的分子量的影響。多相微球用常規(guī)攪拌，電位擴散，或超聲制備。 凝膠滲透色譜法用于處理前后測定聚合物的分子量。PLA多相微球超聲引起分子量降低，如圖14。 認為降解的量依賴聚合物的類型和滲透時間。初始分子量128000的PLA，超聲處理90s后，分子量減少10%。初始分子量68000的PLA，超聲處理90s后，分子量降低21%。其他研究人員的報告同意與超聲波誘導降解這些結果。另一方面，PLGA，實驗條件下由于超聲處理沒有分子量減少。圖14.PLA多相微球在64W的超聲波產(chǎn)生的分子量的變化。4.2.包封蛋白的降解 含牛血清白蛋白（BSA）控釋儲庫型微囊的制備和體外表征。BSA被包入96.1%高效率的微囊里。包封不會改變分子或蛋白構象，通過生化分析表明。微囊的組合物及其制備方法，被認為與BSA的釋放和降解是密切相關。根據(jù)配方，釋放曲線單相或雙相。它可以控制BSA的初始釋放及其傳送總時間的延遲。得出的結論是，儲庫型微囊通過微囊的降解率的精確控制可作為BSA的控制釋放系統(tǒng)，逐漸增加微球的藥物滲透率和孔隙度。 多相微球的制備包含劇烈攪拌乳劑的制備，這可能使某些敏感蛋白變性。Hayashi等人。 研究用反相膠束溶劑蒸發(fā)替代攪拌制備W/O乳液的實用性。研究蛋白質的反膠束增溶、超氧化物歧化酶（SOD）、腫瘤壞死因子（TNF），和在有機溶劑中的半乳糖苷酶（-半乳糖苷酶）及其在聚（L-乳酸）微球的包封。不同溶劑中增溶和/或提取蛋白質的活性下降到不同程度。從膠束的氯仿溶液回收超氧化物歧化酶（SOD）和半乳糖苷酶酶的活性大于所有的表面活性劑的研究90%。 與此相反，在氯仿溶液TNF活性顯著降低幅度。針對超氧化物歧化酶和半乳糖苷酶，包裹在微球中的活性取決于增溶過程中使用的