空氣中細(xì)菌種類(lèi)的測(cè)定.doc

培養(yǎng)基的制備與空氣中微生物的檢測(cè)1、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求 1、了解并掌握微生物所需的營(yíng)養(yǎng)成分以及培養(yǎng)基的類(lèi)型。 2、學(xué)習(xí)并掌握牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制原理，配制方法以及熟悉實(shí)驗(yàn)步驟。 3、掌握高壓蒸汽滅菌器的原理以及了解其操作步驟。 4、空氣中微生物的檢測(cè)。2、 實(shí)驗(yàn)原理 培養(yǎng)基是供微生物生長(zhǎng)、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。由于微生物具有不同的營(yíng)養(yǎng)類(lèi)型，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實(shí)驗(yàn)和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，使用的原料也各有差異，但從營(yíng)養(yǎng)角度分析，培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。 任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時(shí)徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。 高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達(dá)121。在此蒸汽溫度下，可以徹底高效殺死各種細(xì)菌及其高度耐熱的原理。 空氣是人類(lèi)賴以生存的必須環(huán)境，也是微生物借以擴(kuò)散的媒介?？諝庵写嬖谥?xì)菌、真菌、病毒、放線菌等多種微生物粒子，這些微生物粒子是空氣污染物的重要組成部分?？諝馕⑸镏饕獊?lái)自于地面及實(shí)施、人和動(dòng)物的躡手呼吸道、皮膚和毛發(fā)等，它附著在空氣氣溶膠細(xì)小顆粒物表面，可較長(zhǎng)時(shí)間停留在空氣中。某些微生物還可以隨著空氣中細(xì)小顆粒穿過(guò)人體肺癌存留在肺的深處，給身體健康帶來(lái)嚴(yán)重危害，也可以隨著空氣中細(xì)小顆粒物被輸送到較遠(yuǎn)地區(qū)，給人體帶來(lái)許多傳染性的疾病和上呼吸道疾病。因此，空氣微生物含量多少可以反映所在區(qū)域的空氣質(zhì)量，是空氣環(huán)境污染的一個(gè)重要參數(shù)評(píng)價(jià)空氣的清潔程度，需要測(cè)定空氣中的微生物數(shù)量和空氣污染微生物。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備。 2、高壓滅菌。 3、空氣中微生物的檢測(cè)。4、 實(shí)驗(yàn)步驟 1、查配方 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：牛肉膏 1g；蛋白胨 2g；NaCl 1g；瓊脂粉 4g；蒸餾水 200mL；pH 7.07.2。 2、稱量 3、配制 先將牛肉膏、蛋白胨溶入燒杯中攪拌至完全溶解，再加入其他成分一次溶解，倒入500mL的錐形瓶中，加水至200mL，加入瓊脂粉，拿報(bào)紙封口。 4、高壓滅菌 5、分裝，凝固 6、暴露取樣：在指定的地點(diǎn)：一樓、三樓、五樓、七樓各放2皿，將平板皿蓋打開(kāi)，在空氣中暴露10min，時(shí)間一到，立即合上皿蓋。 7、培養(yǎng)觀察：把培養(yǎng)皿置于生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)，于48h后記錄所生長(zhǎng)的菌落數(shù)。 8、計(jì)算1平方米空氣中的微生物的數(shù)目。 奧梅染斯基曾建議：如面積為1002的平板培養(yǎng)基，暴露在空氣中10分鐘，置于37培養(yǎng)24小時(shí)后所生長(zhǎng)的菌落數(shù)，相當(dāng)于10L空氣中的細(xì)菌數(shù)。 X每m3空氣中的細(xì)菌數(shù) N平板暴露5分鐘，置37培養(yǎng)24小時(shí)后生長(zhǎng)的菌落數(shù) r平皿底半徑5五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及處理測(cè)得各個(gè)樓層的菌落數(shù)如下表所示：1樓1樓3樓5樓7樓外611552內(nèi)3166133按照上述公式，計(jì)算微生物的數(shù)目如下：1樓：X（外1）=764（個(gè)） X（外2）=1401（個(gè)） X（外平均）=1083（個(gè)） X（內(nèi)1）=382（個(gè)） X（內(nèi)2）=2038（個(gè)） X（內(nèi)平均）=1210（個(gè)）3樓：X（外）=637（個(gè)） X（內(nèi)）=764（個(gè)）5樓：X（外）=637（個(gè)） X（內(nèi)）=1656（個(gè)）7樓：X（外）=255（個(gè)） X（內(nèi)）=382（個(gè)）由計(jì)算得出的數(shù)據(jù)可知，空氣中微生物的分布具有不定向性以及不均勻。六、實(shí)驗(yàn)體會(huì)1、微生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)滿足微生物的生長(zhǎng)、繁殖和完成各種生理活動(dòng)的需要。它們的作用可概括為形成結(jié)構(gòu)（參與細(xì)胞組成）、提供能量和調(diào)節(jié)作用（構(gòu)成酶的活性和物質(zhì)運(yùn)輸系統(tǒng)）。微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有六大類(lèi)要素，即水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子和能源。 水：水是微生物的重要組成部分，在代謝中占有重要地位。水在細(xì)胞中有兩種存在形式：結(jié)合水和游離水。結(jié)合水與溶質(zhì)或其他分子結(jié)合在一起，很難加以利用。游離水（或稱為非結(jié)合水）則可以被微生物利用。 碳源：碳在細(xì)胞的干物質(zhì)中約占50%，所以微生物對(duì)碳的需求最大。凡是作為微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)或代謝產(chǎn)物中碳架來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，稱為碳源。作為微生物營(yíng)養(yǎng)的碳源物質(zhì)種類(lèi)很多，從簡(jiǎn)單的無(wú)機(jī)物（CO2、碳酸鹽）到復(fù)雜的有機(jī)含碳化合物（糖、糖的衍生物、脂類(lèi)、醇類(lèi)、有機(jī)酸、芳香化合物及各種含碳化合物等）。但不同微生物利用碳源的能力不同，假單孢菌屬可利用90種以上的碳源，甲烷氧化菌僅利用兩種有機(jī)物：甲烷和甲醇，某些纖維素分解菌只能利用纖維素。大多數(shù)微生物是異養(yǎng)型，以有機(jī)化合物為碳源。能夠利用的碳源種類(lèi)很多，其中糖類(lèi)是最好的碳源。異養(yǎng)微生物將碳源在體內(nèi)經(jīng)一系列復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)，最終用于構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)，或?yàn)闄C(jī)體提供生理活動(dòng)所需的能量。所以，碳源往往也是能源物質(zhì)。自養(yǎng)菌以CO2、碳酸鹽為唯一或主要的碳源。CO2是被徹底氧化的物質(zhì)，其轉(zhuǎn)化成細(xì)胞成分是一個(gè)還原過(guò)程。因此，這類(lèi)微生物同時(shí)需要從光或其他無(wú)機(jī)物氧化獲得能量。這類(lèi)微生物的碳源和能源分別屬于不同物質(zhì)。 氮源：凡是構(gòu)成微生物細(xì)胞的物質(zhì)或代謝產(chǎn)物中氮元素來(lái)源的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，稱為氮源。細(xì)胞干物質(zhì)中氮的含量?jī)H次于碳和氧。氮是組成核酸和蛋白質(zhì)的重要元素，氮對(duì)微生物的生長(zhǎng)發(fā)育有著重要作用。從分子態(tài)的N2到復(fù)雜的含氮化合物都能夠被不同微生物所利用，而不同類(lèi)型的微生物能夠利用的氮源差異較大。固氮微生物能利用分子態(tài)N2合成自己需要的氨基酸和蛋白質(zhì)，也能利用無(wú)機(jī)氮和有機(jī)氮化物，但在這種情況下，它們便失去了固氮能力。此外，有些光合細(xì)菌、藍(lán)藻和真菌也有固氮作用。許多腐生細(xì)菌和動(dòng)植物的病原菌不能固氮，一般利用銨鹽或其他含氮鹽作氮源。硝酸鹽必須先還原為NH+4后，才能用于生物合成。以無(wú)機(jī)氮化物為唯一氮源的微生物都能利用銨鹽，但它們并不都能利用硝酸鹽。有機(jī)氮源有蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、玉米漿等，工業(yè)上能夠用黃豆餅粉、花生餅粉和魚(yú)粉等作為氮源。有機(jī)氮源中的氮往往是蛋白質(zhì)或其降解產(chǎn)物。氮源一般只提供合成細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞中其他結(jié)構(gòu)的原料，不作為能源。只有少數(shù)細(xì)菌，如硝化細(xì)菌利用銨鹽、硝酸鹽作氮源和能源。 無(wú)機(jī)鹽：無(wú)機(jī)鹽也是微生物生長(zhǎng)所不可缺少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其主要功能是：（1） 構(gòu)成細(xì)胞的組成成分；（2)作為酶的組成成分；（3)維持酶的活性；（4）調(diào)節(jié)細(xì)胞的滲透壓、氫離子濃度和氧化還原電位；(5)作為某些自氧菌的能源。 生長(zhǎng)因子：一些異養(yǎng)型微生物在一般碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基中培養(yǎng)不能生長(zhǎng)或生長(zhǎng)較差。當(dāng)在培養(yǎng)基中加入某些組織（或細(xì)胞）提取液時(shí)，這些微生物就生長(zhǎng)良好，說(shuō)明這些組織或細(xì)胞中含有這些微生物生長(zhǎng)所必須的營(yíng)養(yǎng)因子，這些因子稱為生長(zhǎng)因子。生長(zhǎng)因子可定義為：某些微生物本身不能從普通的碳源、氮源合成，需要額外少量加入才能滿足需要的有機(jī)物質(zhì)，包括氨基酸、維生素、嘌呤、嘧啶及其衍生物，有時(shí)也包括一些脂肪酸及其他膜成分。2、 消毒與滅菌 消毒是指清除和殺滅環(huán)境和物體中的致病微生物或使微生物滅活的過(guò)程，分物理消毒和化學(xué)消毒兩種。物理消毒主要指陽(yáng)光和紫外線照射等?；瘜W(xué)消毒指用化學(xué)藥品清除、殺滅和滅活致病微生物的過(guò)程。消毒劑分類(lèi)及常用消毒劑1）按消毒劑作用水平分類(lèi)高效消毒劑：指可殺滅所有微生物，包括各種細(xì)菌繁殖體、細(xì)菌芽孢、真菌、結(jié)核桿菌、囊膜和非囊膜病毒等，也稱滅菌劑，如過(guò)氧乙酸、甲醛、戊二醛等及有機(jī)汞類(lèi)；中效殺毒劑：除不能殺死細(xì)菌芽孢外，可殺死細(xì)菌繁殖體、真菌和病毒等其他微生物，如乙醇、酚劑類(lèi)；低效殺毒劑：可殺死部分細(xì)菌繁殖體、真菌和囊膜病毒，不能殺滅結(jié)核菌、細(xì)菌芽孢和非囊膜病毒，如季胺鹽類(lèi)等陽(yáng)離子表面活性劑新潔爾滅、洗必太等。2）按消毒劑用途分類(lèi)環(huán)境消毒劑；帶畜(禽)體表消毒劑(包括飲水、器械等）。