柱色譜分離實(shí)驗(yàn).ppt

柱色譜ColumnChromatography 了解 1 柱色譜法分離有機(jī)物的原理 2 固定相和流動(dòng)相的選擇原則 掌握 1 色譜柱的填充方法 2 柱色譜分離的基本操作 一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?色譜法簡(jiǎn)介 色譜法亦稱(chēng)色層法 層析法等 是分離 純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一 還可定量分析 色譜法分類(lèi) 操作形式 柱色譜法 columnchromatography 二 實(shí)驗(yàn)原理 柱色譜分離示意圖 二 實(shí)驗(yàn)原理 二 實(shí)驗(yàn)原理 吸附劑的性質(zhì) 均勻 表面積大 不反應(yīng) 吸附能力不同 化合物的結(jié)構(gòu) 化合物的吸附性和它們的極性成正比 洗脫劑的極性 溶解度適中 不反應(yīng) 易獲取回收 影響分離效果主要因素 和 和 在氧化鋁柱子上若分離下列各組混合物 哪一個(gè)組分先被洗脫下來(lái) 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 干法 10g硅膠 乙醇 先用乙醇后用水操作 組分顏色 組分顏色 1mL樣品加樣操作0 5mL 2乙醇洗滌 柱色譜操作 實(shí)驗(yàn)步驟 吸附劑裝填緊密 排除氣泡 最終應(yīng)使吸附劑的上端平整 無(wú)凹凸面 無(wú)斷層 干法裝柱濕法裝柱 裝柱 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 裝柱時(shí)應(yīng)該注意均勻 不能有氣泡 裂縫 否則樣品可能順縫隙流動(dòng)而不吸附 影響樣品的分離 應(yīng)用質(zhì)軟的物體如吸耳球等輕輕敲擊柱身 促使吸附劑裝填緊密 排除氣泡 最終應(yīng)使吸附劑的上端平整 無(wú)凹凸面 樣品為液體 可直接加樣 樣品為固體 可選擇合適溶劑溶解為液體再加樣 加樣時(shí) 要沿管壁慢慢加入至柱頂部 勿使樣品攪動(dòng)吸附劑表面 加樣 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 洗脫 在柱頂不斷加入洗脫劑 使洗脫劑永遠(yuǎn)保持有適當(dāng)?shù)牧?不要讓洗脫劑表面流干 使流動(dòng)相流速適當(dāng) 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 洗脫時(shí)應(yīng)注意 1 向柱內(nèi)加入95 乙醇溶液洗脫 可以通過(guò)注射器沿管壁或安裝滴液漏斗 在恒壓或加壓條件下進(jìn)行洗脫 控制流出速度1滴 秒 逐漸出現(xiàn)色層帶分離 2 第一色層帶到達(dá)色譜柱底部時(shí) 立即用錐形瓶收集第一色層的溶液 直到其完全被洗出 注意 洗脫時(shí)切勿使溶劑流干 3 然后 改用水溶液作為洗脫劑 當(dāng)?shù)诙珜訋У竭_(dá)色譜柱底部時(shí) 立即收集第二色層的的溶液 直到其完全被洗出 4 用量筒分別量取所分離出來(lái)的兩種溶液的體積后 倒入指定的回收瓶中 5 分離結(jié)束后 應(yīng)先讓溶劑盡量流干 然后倒置 用吸耳球從活塞向管內(nèi)擠壓空氣 將吸附劑從柱頂擠壓出 使用過(guò)的吸附劑倒入垃圾桶里 試樣有色 在層析柱上可直接觀察 洗脫后分別收集各個(gè)組分 收集 試樣無(wú)色 收集洗脫液時(shí) 多采用等份收集 每份洗脫劑的體積隨所用吸附劑的量及試樣的分離情況而定 收集的每份洗脫劑的體積越小 分離效果越好 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 玻砂防堵塞裝柱需緊密加壓不可大溶劑勿流干 四 注意事項(xiàng) 色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用 分離混合物精制提純化合物利用比移值 Rf 鑒定化合物跟蹤反應(yīng)進(jìn)程 小結(jié) 色譜法的特點(diǎn) 分離效率高復(fù)雜混合物 同系物 異構(gòu)體等 靈敏度高可以檢測(cè)出 g g 1 10 6 級(jí)甚至ng g 1 10 9 級(jí)的物質(zhì)量 分析速度快幾分鐘或幾十分鐘內(nèi)可以完成一個(gè)試樣分析 小結(jié) 柱色譜法分離甲基橙和甲基藍(lán) 實(shí)驗(yàn)原理 甲基橙和亞甲基藍(lán)均為指示劑 它們的結(jié)構(gòu)式如下所示 甲基橙 亞甲基藍(lán) 由于甲基橙和亞甲基藍(lán)的結(jié)構(gòu)不同 極性不同 吸附劑對(duì)它們的吸附能力不同 洗脫劑對(duì)它們的解析速度也不同 極性小 吸附能力弱 解析速度快的亞甲基藍(lán)先被洗脫下來(lái) 而極性大 吸附能力強(qiáng) 解析速度慢的甲基橙后被洗脫下來(lái) 從而使兩種物質(zhì)得以分離 本實(shí)驗(yàn)以硅膠為吸附劑 95 乙醇作為洗脫劑 先洗出亞甲基藍(lán) 再用蒸餾水作洗脫劑把甲基橙洗脫下來(lái) 三 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 干法 10g硅膠 乙醇 先用乙醇后用水操作 組分顏色 組分顏色 1mL樣品加樣操作0 5mL 2乙醇洗滌 柱色譜操作 實(shí)驗(yàn)步驟 儀器和試劑 1 儀器錐形瓶 玻璃漏斗 色譜柱2 試劑柱層析硅膠 脫脂棉 乙醇 95 甲基橙 亞甲基藍(lán) H2O 95 乙醇 1 1 A液 0 2mol L 1HCl 95 乙醇 1 1 B液 裝置圖 裝柱 洗脫 實(shí)驗(yàn)步驟 裝柱 1 裝色譜柱 1 取一支色譜柱 在柱子的收縮部塞一小團(tuán)脫脂棉花將色譜柱垂直固定在鐵架臺(tái)上 2 關(guān)閉活塞 向柱中倒入蒸餾水 也是洗脫劑 至柱體積的1 2 3 填吸附劑 稱(chēng)取10g硅膠于小燒杯中 加入15mL蒸餾水 用玻璃棒調(diào)好通過(guò)漏斗慢慢裝入玻璃柱 使其逐漸沉入底部 用洗耳球敲打柱身使硅膠裝填緊密 打開(kāi)活塞 用小錐型瓶承接 控制滴速為1滴 秒 裝完后在上面加一層脫脂棉 操作時(shí)要注意吸附劑始終不能露出液面 實(shí)驗(yàn)步驟 續(xù) 加樣 當(dāng)液面剛好流至脫脂棉平面相切時(shí) 立刻關(guān)閉活塞 加入5mL左右的A液 當(dāng)硅膠面又將要露出時(shí) 關(guān)緊活塞 用量筒準(zhǔn)確加入0 50mL以A液做溶劑的混合液 含甲基橙和亞甲基藍(lán)各為0 400g L 1 洗脫 待此混合液將要滲入柱內(nèi)時(shí) 立即用A液洗脫 此時(shí)可以觀察到有鮮明的黃 藍(lán)兩條色帶形成 黃色的甲基橙色帶隨洗脫劑的加入不斷下移 而其頂部藍(lán)色帶不移動(dòng) 當(dāng)黃色帶到達(dá)柱底部時(shí) 更換接受器 全部收集此黃色帶 洗脫時(shí)間約10