家庭環(huán)境無菌培養(yǎng)簡易白芨組培培育方法

家庭組織培養(yǎng) 植物的組織培養(yǎng)沒有最基本的條件和物品是搞不成的 當(dāng)時(shí)合理的 利用一些最簡單的用具也并非無法辦到 一 最必需的物品 1 家用高壓鍋 1 個(gè)最好大一點(diǎn)的 裝的東西多一點(diǎn) 用于培養(yǎng)基 無菌水等的消毒 2 接種箱 無菌箱 1 個(gè) 需要自己自制 用一些木板和一塊玻 璃和二尺布料 用于接種和轉(zhuǎn)移 3 藥用天平 1 架 最好是 500g 稱量的 小一點(diǎn)也可以 主要用來稱 瓊脂 糖等物品 4 不銹鋼鍋或鋁鍋 煮湯 面條的那種 買 用于煮制培養(yǎng)基用的 5 攪拌和分裝培養(yǎng)基用的調(diào)羹一個(gè) 用于煮制和分裝培養(yǎng)基 6 培養(yǎng)用的瓶子若干 7 制棉塞用的棉花 紗布和線若干 用于做瓶口的塞子 要注意的 是 棉花要使用普通做棉衣的棉花 不要用醫(yī)院用的脫脂棉 這樣 容易穿塞污染 8 牛皮紙 橡皮圈若干 用于包瓶頭和扎包頭紙用 9 酒精燈 1 盞 解剖刀 1 把 刀片若干 鑷子 2 把 10ml 100ml 量筒各一個(gè) 2ml 移液管 1 只 藥棉若干 二 怎樣解決蒸餾水和基本藥品 培養(yǎng)基的用水在一般人的心目總是覺的十分重要的 其實(shí)是多余的 擔(dān)心 冷開水 清潔的河水都是給以用的 并不影響培養(yǎng)的效果 市場(chǎng)上出售的純凈水更是一般培養(yǎng)基理想的用水 最常用 最必要 用量最大的只需購買以下幾種就行了 1 MS 培養(yǎng)基的大量元素 家庭或所謂袖珍組培室的培養(yǎng)一般采用 MS 基就可以了 共 5 種 也可以買市售的 MS 培養(yǎng)基 1 硝酸銨 2 硝酸鉀 3 氯化鈣 4 硝酸鎂 5 磷酸二氫鉀 2 酒精 3 精密試紙 PH 5 4 7 0 4 漂白粉或漂白精 5 瓊脂 6 白糖 7 福爾馬林 8 高錳酸鉀 可以到醫(yī)院或藥材商店去買 9 微量元素 鐵鹽 維生素類以及激素類藥品應(yīng)用量極少 比如一 些激素 維生素類的藥品及有針劑也有片劑 他們都有比較準(zhǔn)確的 含量 你可以去按你的需要去配制比例 愛好者在家庭環(huán)境下進(jìn)行組織培養(yǎng)的探討與建議植物組織培養(yǎng)技術(shù) 尤其是快速繁殖 并非只有專業(yè)人員和專業(yè)實(shí)驗(yàn)室才能夠完成的 作為對(duì)多肉植物和組織培養(yǎng)有著濃厚興趣的愛好者 在充分利用家 庭條件的基礎(chǔ)上 同樣可以制備出自己的試管苗來的 在我們進(jìn)行 多肉植物的栽培中認(rèn)識(shí)到 一些比較名貴的園藝品種 比如 萬象 玉扇 壽 高紋鷹爪等十二卷屬品種 還是繽紛橄欖 何魯牽牛等 塊莖類植物 甚至于星球?qū)?巖牡丹屬等等 這些植物的常規(guī)繁殖 系數(shù)很低 他們都可以采用組織培養(yǎng)來解決其繁殖問題 并且可以 得到相當(dāng)數(shù)量的幼苗 對(duì)于奇想天外等種子萌發(fā)困難的植物 同樣 可以借助組織培養(yǎng)來進(jìn)行無菌播種 在進(jìn)行組織培養(yǎng)過程中 不但 可以對(duì)培養(yǎng)的植物有更深一層的認(rèn)識(shí) 對(duì)常規(guī)的栽培有著相當(dāng)大的 意義 許多搞組織培養(yǎng)的專家 最初都不是專業(yè)學(xué)組培的 就是憑 著興趣和探索精神取得輝煌成績的 關(guān)鍵是 愛好者有著濃厚的興 趣 非凡的觀察力和細(xì)致入微的操作 這些都可以彌補(bǔ)非專業(yè)的缺 陷 并且可以充分利用日常生活中的各種可利用資源 這些就足以 讓愛好者在家庭環(huán)境下完成組織培養(yǎng)了 同時(shí)這也不僅僅滿足了自 己的興趣 還可以有一定的經(jīng)濟(jì)收益 甚至可以有所創(chuàng)新和發(fā)明 一 如何解決場(chǎng)地和基本設(shè)備 進(jìn)行組織培養(yǎng) 沒有一定的設(shè)備是無法開展的 正規(guī)實(shí)驗(yàn)室的組織 培養(yǎng)設(shè)備是昂貴的 不適合家庭消費(fèi) 但如果能有途徑買到廉價(jià)的 實(shí)驗(yàn)室設(shè)備 那就在好不過了 如果沒有辦法搞到實(shí)驗(yàn)室設(shè)備 就 不妨動(dòng)手自己制作一些簡單的設(shè)備 1 無菌操作的主要設(shè)備 接種箱和壓力鍋 接種箱 植物組織培養(yǎng)的主題操作需要在一個(gè)相對(duì)密閉的無菌環(huán)境 中進(jìn)行 那么說我們首先要?jiǎng)?chuàng)造一個(gè)密閉的環(huán)境 可以利用一些木 料 塑料板 有機(jī)玻璃 鋁合金骨架等等廉價(jià)的材料 動(dòng)手粘合一 個(gè)小巧的接種箱 具體的參數(shù)可以找一本 食用菌栽培 的書籍 模仿種蘑菇的接種箱做一個(gè)即可 需要注意的是 組織培養(yǎng)的接種 箱的密閉性要求比較高 盡量避免腐朽的木材和易生銹的材料 箱 子的頂端按放兩盞燈 20w 的紫外線燈和 20w 的日光燈 箱體的周 邊盡量采用玻璃材料 因?yàn)檫@樣便于觀察 有時(shí)候接種箱還可以借 用為培養(yǎng)箱 周邊采用玻璃材料更方便于觀察和培養(yǎng) 高壓鍋 主要用來對(duì)培養(yǎng)基和其他材料的滅菌 在實(shí)驗(yàn)室通常使用 醫(yī)用高壓滅菌器 然而在家庭要充分利用廚房使用的高壓鍋 高壓 鍋的壓力要低于滅菌器 但是適當(dāng)延長滅菌時(shí)間 還是可以取得較 好的效果的 比如 對(duì)培養(yǎng)基滅菌 40 分鐘就基本上可以達(dá)到滅菌效 果 滅菌器是 20 分鐘 無菌水采用間歇滅菌法 先用高壓鍋壓 40 分鐘 放置 24 小時(shí) 再壓 20 分鐘即可達(dá)到效果 2 場(chǎng)地 這個(gè)就因人而易了 總體的要求就是進(jìn)行組織培養(yǎng)操作的地方要盡 量無塵 減少空氣流動(dòng) 最好有一定的陽光 比如書房 寫字間都 可以用來進(jìn)行無菌操作 進(jìn)行培養(yǎng)基的配制可以借用一下廚房 但所使用的器具必須和廚具 分開 一般說 組織培養(yǎng)中的幾乎全部化學(xué)物質(zhì)對(duì)人體是無害的 除了少數(shù)激素類物質(zhì)和滅菌劑 對(duì)于有毒害的物質(zhì) 需要認(rèn)真保管 以免發(fā)生危險(xiǎn) 3 輔助設(shè)備 主要指冰箱 它是用來儲(chǔ)存化學(xué)物質(zhì)和培養(yǎng)基的 天平 可以采用 感量在 100 克的托盤天平 甚至用中藥的藥衡都可以代替 培養(yǎng)架 這個(gè)就更簡單了 采用鋁合金 玻璃的培養(yǎng)箱既可以滿足要求 如果 日光不足 可配合日光燈補(bǔ)光等 4 化學(xué)試劑 化學(xué)試劑是不可缺少的 因?yàn)榻M織培養(yǎng)的核心就是培養(yǎng)基的成分 而并不是簡單的無菌操作 一些用量較大的化學(xué)物質(zhì)是有必要買的 比如大量元素 硝酸銨 硝酸鉀 磷酸二氫鉀 硫酸鎂 氯化鈣等 高錳酸鉀 甲醛 酒精 白砂糖 瓊脂等等 微量元素和有機(jī)復(fù) 合物不需要購買 因?yàn)樗鼈兊挠昧亢苄?我們可以用蔬菜浸汁或者 馬鈴薯浸汁來代替 激素是必不可少的 他們的稱量需要借助分析 天平 但這是家庭條件所不允許的 如果有條件可以借助關(guān)系單位 代替配成母液 每次取一些使用即可 最好的辦法是到農(nóng)資商店 賣農(nóng)藥化肥的地方 它們一般出售農(nóng)業(yè)用的激素 有的是用安 瓿裝的 按照一定的比例加入到培養(yǎng)基當(dāng)中即可 近幾年來 有些 化學(xué)品公司開始生產(chǎn)植物組織培養(yǎng)基原粉 只需要稱取一定量加水 即可 很方便 比如泛生化學(xué)品公司生產(chǎn)的 ms 原粉 只需要稱量 40 克 加 1 升水 用微波爐加熱 5 分鐘即可分裝 相當(dāng)簡便 消毒劑通常采用氯化汞 劇毒 如果不容易搞到 可以用漂白粉 代替 調(diào)節(jié)酸堿度時(shí) 可以采用家庭常用的純堿和白醋 5 培養(yǎng)容器和玻璃儀器 組織培養(yǎng)的容器要求并不高 只要玻璃顏色為透明色即可 鈉玻璃 不可以 我們可以到垃圾站去看看 撿回一些廢舊的果醬瓶就可以了 比較 好用的是阿香婆辣醬瓶 我們實(shí)驗(yàn)室也是采用的這種瓶子 瓶子的 封口膜采用聚丙烯塑料即可 如果不好找到 可以采用微波爐專用 的錫箔紙甚至方便面的袋子 折疊成雙層 用橡皮圈固定即可 其它玻璃儀器 比如燒杯 玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替 一些度量儀器 如量筒和移液管最好到玻璃儀器商店購買 恐怕花 不了 20 元錢就可以配置一套相當(dāng)棒的組培玻璃儀器 6 其它 還有一些用品是必需的 比如精密 ph 試紙 5 4 7 0 需要買一 本 大約花 1 5 元即可搞定 酒精燈也不需要買 用墨水瓶配上一 個(gè)玻璃環(huán) 再加上一個(gè)棉花芯 最后用農(nóng)夫山泉礦泉水的瓶蓋做燈 冒 這樣的酒精燈很小巧 適合接種箱使用 刀子剪子鑷子是必需 的 到花市的工具攤位上 花 10 元錢全部搞定 注意選比較小巧的 工具 關(guān)于用水 按理說應(yīng)該使用蒸餾水 但是我們家庭飲用的純凈水比 蒸餾水還要純 那么說借用一些飲用水就可以了 我們?cè)?jīng)采用康 師傅純凈水進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng) 效果都是很不錯(cuò)的 更何況于植 物細(xì)胞培養(yǎng)了 以上是組織培養(yǎng)的基本設(shè)備和試劑 主要突出了他們相關(guān)的替代品 因?yàn)樽鳛榻M織培養(yǎng)中的快速繁殖 它的要求是相當(dāng)?shù)偷?我們的家 庭培養(yǎng)和工廠化是不同的 工廠化生產(chǎn)組培苗要追求高增殖率 所 以它的要求就比較精細(xì)和標(biāo)準(zhǔn) 我們的家庭培養(yǎng)則不需要那么準(zhǔn)確 只要達(dá)到培養(yǎng)成功的目的即可 當(dāng)然 如果想提高增殖倍率和試管 苗的品質(zhì) 必須盡量貼近實(shí)驗(yàn)室的用具和器材 代用品總是有一定 的缺陷的 一 必須的設(shè)施物品及代用品 1 代用品 家庭用的電冰箱 可用于貯存培養(yǎng)基母液 4 及需低溫貯存的藥 品 如生物調(diào)節(jié)劑 高壓鍋 它可用于培養(yǎng)基 無菌水 玻璃器皿及其他組培用具的消 毒滅菌 如所用水硬度大可用涼白開水 進(jìn)行消毒滅菌 避免被消 毒滅菌物品表面結(jié)垢 不銹鋼鍋或鋁鍋 它可用于培養(yǎng)基 溶化瓊脂 起水浴鍋?zhàn)饔?及 組培用具消毒滅菌 刷凈的廢棄食油桶 它可以用來貯存蒸餾水 小白瓷碟 可以用于接種及盛放消毒液 若放消毒液 就不要再食 用 以免中毒 日光燈 它可用于組培過程中光源補(bǔ)充 洗凈廢棄的罐頭瓶 它可以用于組培培養(yǎng)之用 代替錐形瓶 試管 組培場(chǎng)地可在自己的房間內(nèi)進(jìn)行 在配制培養(yǎng)基和接種時(shí) 不要趕 在家庭成員較多時(shí)進(jìn)行 如室內(nèi)已安裝了空調(diào) 那么在初代培養(yǎng)和 繼代培養(yǎng) 乃至小苗過渡時(shí)均有好處 2 自制用具 1 接種箱的制作 組培過程中的超凈工作臺(tái)是很貴重的設(shè)備 如 果我們用自制的接種箱來代替 就可以大大節(jié)省開支 有利于普及 自制的接種箱的用料 可以是膠合板 纖維板 玻璃 3 毫米厚 木條 裝修房屋用的龍骨 甚至可以用使紙板的包裝箱 包裝箱 的質(zhì)量要稍好一些的 如電視機(jī)的包裝箱 也可以用有機(jī)玻璃 其接種箱的大小 可以根據(jù)各自的家庭條件制作 制作太小不便于 操作 但相對(duì)來說消毒容易 且占地較少 制作較大的便于操作 但消毒工作顯得不易 且占地面積較多 一般來說作成 70 厘米長 45 厘米寬 50 厘米高較為合適 2 培養(yǎng)箱的制作 培養(yǎng)箱可代替培養(yǎng)室 也可以用于過渡苗使用 它可以用玻璃制作 或利用長方形魚缸 因此 可用玻璃粘結(jié)制作 其大小可按自己家庭居室面積和組培的量來決定 3 需購置用具 普通天平 500 克 用于稱量配制培養(yǎng)基藥品 或用稱量金銀 中藥的戥子稱 用于稱量配制培養(yǎng)基藥品 微量元素及生物調(diào)節(jié)劑 或購買微量元素及生物調(diào)節(jié)劑時(shí) 買已分裝的 酒精燈 1 盞 用于 接種時(shí) 灼燒消毒滅菌 漏斗 亦可用購買桶裝食用油 所配給的 漏斗 用于分裝培養(yǎng)基用 長鑷子 2 把 用于接種 解剖刀 2 把 刀片若干 用于接種 10 50 100 毫升量筒各 1 個(gè) 用于配制培 養(yǎng)基用 長把牛角勺 2 把 用于配制培養(yǎng)基取藥品 1 2 5 毫升 移液管各 1 個(gè) 用于配制培養(yǎng)基用 耐高溫塑料膜或牛皮紙 用于包扎培養(yǎng)瓶口及表糊自制接種箱內(nèi)部 棱角處 橡膠圈 用于綁扎培養(yǎng)瓶口 脫脂棉 用于操作人員及組 培用具酒精棉球消毒 pH 5 7 試紙 1 本 用時(shí)可剪成小條檢測(cè)培 養(yǎng)基 pH 值 酒精 1 瓶 用于酒精燈及消毒 漂白粉 1 瓶 用于消毒 福爾馬林 1 瓶 用于接種箱消毒 在每次操作前 2 10 小時(shí) 將 10 20 毫升福爾馬林倒入小白瓷碟內(nèi) 在操作前取出 MS 培養(yǎng)基 所需藥品 用于配制培養(yǎng)基 鹽酸及氫氧化鈉 用于調(diào) pH 值 如若 購置 1 盞紫外燈 進(jìn)行室內(nèi)及接種箱消毒更為理想 二 操作時(shí)注意事項(xiàng) 家庭操作與單位不同 因而要注意以下事項(xiàng) 要注意安全 妥善保 管藥品 特別對(duì)老人和小孩 操作時(shí)要消毒仔細(xì)嚴(yán)格 接種時(shí)操作 人員戴好口罩 工作帽 避開電風(fēng)扇及大風(fēng)沙天氣 家庭成員多時(shí) 避免操作 消毒前后避免家庭所養(yǎng)寵物進(jìn)人工作間 藥品稱量要準(zhǔn) 確無誤 如果家庭不具備溫度調(diào)控 如調(diào)溫空調(diào) 應(yīng)避免在盛夏 寒冬進(jìn)行 紅掌組培要一步步來作 可先作容易組培的花卉 待取 得經(jīng)驗(yàn)后再做難作的花卉 1 培養(yǎng)容器和玻璃儀器的準(zhǔn)備 進(jìn)行培養(yǎng)基的配制首先要準(zhǔn)備好培養(yǎng)瓶和配制使用的玻璃儀器 培 養(yǎng)瓶一般使用各種果醬瓶 要先用洗潔精浸泡瓶子 4 8 小時(shí) 再用 流水沖洗數(shù)次 其他的玻璃儀器同樣需要這樣清潔 直到玻璃壁上 不掛水珠而是成為水膜為止 清洗完畢的玻璃容器要倒扣 空去瓶 內(nèi)的水 清洗干凈的容器要注意防塵 盡量放置在玻璃柜中 更簡單的是用 干凈的毛巾將容器蓋住 移液管要用吸球來清洗 反復(fù)用蒸餾水吹吸直到潔凈為止 將移液 管放置在一個(gè)長筒中 便于使用 一般移液管只能使用一次 即要 清洗 所以有多必要準(zhǔn)備幾只移液管 建議 10ml 2 支 5ml 2 支 1ml 5 支 2 培養(yǎng)基的配制 經(jīng)典的組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基是 ms 配方 其基本上劃分為 大量元素 微量元素 鐵鹽 有機(jī)復(fù)合物 植物激素 糖和支持物 這些成分 的用量都在毫克級(jí) 用普通天平是難以稱量的 為了解決這個(gè)問題 我們可以按比例放大各成分的用量配制成母液 使用的時(shí)候按一定 比例加入即可 下面將一種 ms 培養(yǎng)基的母液配制方案公布如下 大量元素 硝酸銨 66 0 克 硝酸鉀 76 0 克 無水氯化鈣 13 3 克 七水硫酸鎂 14 8 克 磷酸二氫鉀 6 8 克 以上分別溶解后合并定容到 1 升 每配制 1 升標(biāo)準(zhǔn) ms 培養(yǎng)基取 25 毫升 鐵鹽 七水硫酸亞鐵 5 56 克 乙二胺四乙酸二鈉 edtana 7 46 克 以上兩種分別加熱溶解 混合 定容到 1 升 調(diào)整 ph 到 5 5 以下 每配制一升 ms 取 5 毫升 微量元素和有機(jī)復(fù)合物的用量過于微小 為了簡便我們可以用蔬菜 提取液或者馬鈴薯提取液代替 通常我們習(xí)慣用 100 克菠菜加 100ml 的水煮沸 10 分鐘 過濾留濾液 每配制 1 升 ms 培養(yǎng)基加入 20 50 毫升提取液 同樣也可以使用帶皮馬鈴薯 100 克加 200 毫升 水煮沸 15 分鐘 過濾留濾液 每升 ms 加入 50 100 毫升即可 加入上述各組分后 每升 ms 培養(yǎng)基還需要加入白砂糖 30 克 瓊脂 7 克 這里要說明的是 糖和瓊脂都是可變的量 要根據(jù)需要調(diào)整 另外 制作果凍用的卡拉膠也可以代替瓊脂 透明度更好 上述各成分加入后 定容到 800 毫升左右 用微波爐加熱 直到瓊 脂全部溶解為止 此時(shí)加入所需的植物激素 通常配制成 0 1 溶液 這樣每取 1 毫升 換算到培養(yǎng)基中就是 1ppm 然后加水定容到 1100 毫升 1 1 升 之所以多出 0 1 升是為了抵消分裝和消毒中 的損耗 最后用酸堿調(diào)整 ph 到 5 8 6 0 3 使用 ms 原粉配制培養(yǎng)基 目前國內(nèi)的一些化學(xué)品公司開發(fā)了簡便的 ms 培養(yǎng)基原粉 大大簡便 了培養(yǎng)基的配制 根據(jù)不同公司的說明選擇培養(yǎng)基的種類 下面就 以 ms 原粉為例 ms 培養(yǎng)基原粉 包括了大量元素 微量元素 鐵 鹽 有機(jī)復(fù)合物 糖和瓊脂 一般按使用方法稱量 微波爐加熱溶 解 加入激素 定容到 1100 毫升 1 1 升 調(diào)整 ph 值到 5 8 6 0 4 分裝 將配制好的培養(yǎng)基分裝在培養(yǎng)容器中 注意要趁熱分裝 因?yàn)榄傊?在 40 度以下就會(huì)凝固 每個(gè)培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)基大約是瓶容積的 1 6 1 5 注意不要將培養(yǎng)基掛在瓶的外壁 這樣容易造成污染 分 裝后用聚丙烯薄膜或著方便面的袋子封口 用膠圈固定 膠圈盡量 選擇自行車的內(nèi)胎 這種膠圈比較耐熱 5 滅菌 采用家庭壓力鍋消毒 建議到醫(yī)療器械用品商店買一些 滅菌效果 試紙 它們可以指示滅菌效果 當(dāng)滅菌達(dá)到效果時(shí)會(huì)變色 把試 紙和培養(yǎng)基同時(shí)放入鍋內(nèi) 加熱到有大量蒸汽冒出 再加上壓力伐 維持小火 30 40 分鐘 滅菌完畢后自然冷卻 將培養(yǎng)基取出 放在陰涼無塵處備用 6 接種箱的準(zhǔn)備 新制作的接種箱必須要清潔干凈 盡量做到無死角 每次使用前 2 小時(shí) 將操作所需要的全部物品放入接種箱 再用一個(gè)小燒杯加入 3 5 克高錳酸鉀放入接種箱內(nèi) 在箱內(nèi)向燒杯中倒入 2 3 毫升的甲 醛溶液 大約幾秒鐘后會(huì)看到甲醛蒸汽出現(xiàn) 這樣可以對(duì)接種箱內(nèi) 的所有物品進(jìn)行初次消毒 同時(shí)打開紫外線燈照射 紫外線燈是高 電壓穿激汞蒸汽產(chǎn)生的 紫外線進(jìn)行第二道滅菌 在紫外線照射大 約 15 分鐘后 會(huì)激發(fā)氧氣形成臭氧 臭氧作為第三道滅菌防線 這 樣經(jīng)過三次滅菌 接種箱基本上可以達(dá)到無菌標(biāo)準(zhǔn) 在操作前 15 分鐘內(nèi) 向剛才蒸發(fā)甲醛用的燒杯中倒入 5 毫升濃氨水 因?yàn)榧兹?duì)人體有毒害作用 氨水可以和甲醛形成一種叫做 六亞 甲基四胺 的固體物質(zhì) 從而中和了甲醛的刺激性蒸汽 這個(gè)時(shí)候 紫外燈不要關(guān)掉 要繼續(xù)照射 直到操作前 5 分鐘關(guān)閉 維持黑暗 5 分鐘 然后再打開日光燈進(jìn)行操作 維持 5 分鐘黑暗的原因是 紫外光對(duì)微生物的殺滅是作用于 dna 的胸腺嘧啶 形成四聚體 但 是微生物具有一種光復(fù)活蛋白 可以在有可見光的環(huán)境下還原胸腺 四聚體 而使微生物復(fù)活 這個(gè)作用叫做 光復(fù)活作用 所以在 關(guān)掉紫外燈后必須維持黑暗幾分鐘 避免光復(fù)活作用的出現(xiàn) 怎樣在家庭開展組培工作 制備 家庭組培因受到條件的限制 不可能配置大量的配養(yǎng)基 一般每 次配置 1 升為宜 煮制后用 PH 試紙測(cè)定后 分裝成 35 40 瓶 塞 好棉塞 包好包頭紙 棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制 不能使 用脫脂棉 然后用紗布包緊 用棉線扎好 棉塞的松緊以手提棉塞 瓶子不滑落為宜 然后放入高壓鍋里高壓滅菌 待高壓鍋噴嘴噴 出蒸汽時(shí) 扣上壓力閥 從壓力閥噴氣時(shí)起計(jì)時(shí) 連續(xù)維持 15 20 分鐘后關(guān)火 壓力消失后 打開鍋蓋 取出配養(yǎng)基 放入接種箱內(nèi) 待用 初次實(shí)驗(yàn)時(shí) 滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)放置三五天后 觀察無霉菌 生長時(shí)才能使用 如有霉菌長出 這說明滅菌時(shí)間不夠 需要適 當(dāng)增加滅菌時(shí)間 接種 將滅菌后的配養(yǎng)基 無菌水 消毒藥水及使用的器材放入接種箱內(nèi) 因接種箱內(nèi)的體積相對(duì)較小 所以所用的一切物品都要有序地?cái)[放 在相應(yīng)的位置上 不能隨意擺放 箱內(nèi)濕度較大 點(diǎn)酒精燈一定要 是用打火機(jī) 不要使用火柴 要特別注意準(zhǔn)備好裝污水 污物的容 器 盡可能地大一些 因?yàn)椴僮鲿r(shí)是不容許開箱取物的 把所有的 物品放置好以后 將一裝有 10 20ml 福爾馬林的磁杯放入箱內(nèi) 最 好不要使用玻璃杯 因反應(yīng)時(shí)溫度較高 容易炸裂 倒入 2 5g 高錳酸鉀 PP 粉 使其蒸氣充滿箱內(nèi) 達(dá)到滅菌的效果 這時(shí)要將接種箱的通氣孔和操作孔封閉好 避免甲醛蒸氣很快散盡 待箱內(nèi)蒸氣散盡后 才能開始接種工作 這段時(shí)間大約需要 5 10 個(gè)小時(shí) 接種時(shí) 揭去密封在接種箱通氣孔和操作孔上的密封物 取出熏蒸 用的磁杯 將接種用的材料送入接種箱內(nèi) 開啟紫外線燈 十五分 鐘后關(guān)閉紫外線燈 開啟照明燈 即可開始工作 操作時(shí)一定要樹 立無菌觀念 要把一切物品都看成是帶菌的 要時(shí)時(shí)都注意防范 工作是由于箱內(nèi)溫度較高 濕度較大 手容易出汗 所以每接種一 瓶后都要用酒精擦拭手指 也可以戴指套 另外 操作時(shí)要注意防 火 由于空間較小 一不小心就容易燒傷手指或引起酒精起火 打 開瓶塞時(shí) 要將瓶口置于酒精燈上方 用右手的無名指和小指夾住 棉塞尾 輕輕將棉塞拔出 棉塞不能置于箱內(nèi)物品上 應(yīng)用手指夾 住 接種后 將瓶口在酒精燈上燒灼一下 棉塞也燒灼一下 然 后在酒精燈火焰上方輕輕塞好 扎好包頭紙 用鉛筆標(biāo)明品種 接 種日期 編號(hào)等 然后重復(fù)下一瓶 其實(shí) 用接種箱接種與超凈工作臺(tái)相比較 工作時(shí)人要感覺舒適得 多 污染率也是很低的 操作熟練后幾乎沒有什么污染發(fā)生 接種 后愈傷組織分化 小苗分化 生長狀態(tài)與在超凈臺(tái)上接種的沒有什 么兩樣 培養(yǎng) 在家庭的業(yè)余條件下培養(yǎng)培養(yǎng)的條件不可能得到?？?所以要充分 的利用自然條件 接種后的培養(yǎng)瓶可以放在有較強(qiáng)散射光的地方 如靠窗的書柜 寫字臺(tái)上 但要避免日光直射 一般室溫在 22 28 攝氏度時(shí)都能正常生長 不是特殊的品種不需要特殊的護(hù)理 如室 溫太低 可以用紙板 木條 塑料薄膜做一個(gè)簡單的培養(yǎng)箱 里面 裝一兩個(gè) 15 25 瓦的白織燈 既可以補(bǔ)助光照也可以提高培養(yǎng)的溫 度 夏天溫度過高時(shí) 有條件的可以擺放在空調(diào)室內(nèi) 沒有空調(diào) 室的 降溫雖然困難一些 但大多數(shù)試管苗是可以耐受的 不至于 死去 小苗長出后 擺放在書柜或工作臺(tái)上 感到自己培養(yǎng)出來的 生機(jī)勃勃的小生靈 無疑是一種享受 栽培 當(dāng)小苗長到一定的時(shí)候 就可以配置一些生根配養(yǎng)基將小苗轉(zhuǎn)移培 養(yǎng)生根 待長出一定根系時(shí) 就可以出瓶種植了 小苗出瓶種植的 時(shí)候一定要注意以下幾個(gè)方面 一是要適當(dāng)降低溫度 二是要增大 濕度 三是要嚴(yán)格控制雜菌危害 四是要保證種植介質(zhì)的疏松透氣 五是要保證適當(dāng)?shù)墓庹?我通常是用跖石 木屑 稻谷殼混合作基 質(zhì) 把小苗種植后用百菌清噴霧澆根 蓋上塑料薄膜 少量的小苗 干脆用玻璃杯蓋住 大約 15 天后就能揭去覆蓋物 便可進(jìn)行正常管 理了 家庭開展組培其實(shí)也并不是一件什么很困難的事情 只要多開動(dòng)腦 筋 多想一些辦法 做