GB 1886.174-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 食品工業(yè)用酶制劑

016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑 016 前 言本標(biāo)準(zhǔn)代替010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品工業(yè)用酶制劑,006食品添加劑 糖化酶制劑,006食品添加劑 009食品添加劑 本標(biāo)準(zhǔn)與010相比,主要變化如下:增加了酶活力的術(shù)語和定義;增加了產(chǎn)品分類、理化要求;在附錄中給出了部分酶制劑的酶活力測(cè)定方法。0161 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑 食品工業(yè)用酶制劑1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于 品工業(yè)用酶制劑由動(dòng)物或植物的可食或非可食部分直接提取,或由傳統(tǒng)或通過基因修飾的微生物(包括但不限于細(xì)菌、放線菌、真菌菌種)發(fā)酵、提取制得,用于食品加工,具有特殊催化功能的生物制品。注:商品化的酶制劑產(chǎn)品允許加入易于產(chǎn)品貯存、使用的配料成分?；盍γ冈谝欢l件下催化某一特定反應(yīng)的能力,即為酶活力,是表達(dá)酶制劑產(chǎn)品的一個(gè)特征性專屬指標(biāo)。菌活性抑制或殺滅微生物的能力。3 產(chǎn)品分類按產(chǎn)品形態(tài)分為固體劑型和液體劑型兩類。4 于生產(chǎn)酶制劑的原料必須符合良好生產(chǎn)規(guī)范或相關(guān)要求,在正常使用條件下不應(yīng)對(duì)最終食品產(chǎn)生有害健康的殘留污染。源于動(dòng)物的酶制劑,其動(dòng)物組織必須符合肉類檢疫要求。源于植物的酶制劑,其植物組織不得霉變。微生物生產(chǎn)菌種應(yīng)進(jìn)行分類學(xué)和(或)遺傳學(xué)的鑒定,并應(yīng)符合有關(guān)規(guī)定。菌種的保藏方法和條件應(yīng)保證發(fā)酵批次之間的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。化指標(biāo)產(chǎn)品酶活力在標(biāo)示值的85%115%。0162 注:本標(biāo)準(zhǔn)附錄業(yè)可按相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)中給出的或企業(yè)規(guī)定的方法測(cè)定。染物限量污染物限量應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1 污染物限量項(xiàng) 目指 標(biāo)檢驗(yàn)方法鉛(mg/(mg/生物指標(biāo)微生物指標(biāo)應(yīng)符合表2的規(guī)定。表2 微生物指標(biāo)項(xiàng) 目指 標(biāo)檢驗(yàn)方法菌落總數(shù)/(08沙門氏菌(25基因重組技術(shù)得到的微生物生產(chǎn)的酶制劑不應(yīng)檢出生產(chǎn)菌。菌活性微生物來源的酶制劑不得檢出抗菌活性,抗菌活性按食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 微生物源酶制劑抗菌活性的測(cè)定執(zhí)行。0163 附 錄 般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水,在沒有注明其他要求時(shí),均指分析純?cè)噭┖?682規(guī)定的三級(jí)水。試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑及制品,在沒有注明其他要求時(shí),均按601、602和603的規(guī)定制備。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí),均指水溶液。葡萄糖苷鍵,將淀粉鏈切斷成為短鏈糊精和少量麥芽糖和葡萄糖,使淀粉黏度迅速下降的酶。溫1于60、為1個(gè)酶活力單位,以U/g(U/示。高溫1于70、為1個(gè)酶活力單位,以U/g(U/示。理葡萄糖苷鍵隨機(jī)切斷成長短不一的短鏈糊精、少量麥芽糖和葡萄糖,而使淀粉對(duì)碘呈藍(lán)紫色的特性反應(yīng)逐漸消失,呈現(xiàn)棕紅色,其顏色消失的速度與酶活性有關(guān),據(jù)此可通過反應(yīng)后的吸光度計(jì)算酶活力?；?。碘液:少量水使碘完全溶解,定容至500存于棕色瓶中。碘液:存于棕色瓶中。溶性淀粉溶液(20g/L):溶性淀粉(以絕干計(jì))于燒杯中,用少量水調(diào)成漿狀物,邊攪拌邊緩緩加入70后用水分次沖洗裝淀粉的燒杯,洗液倒入其中,攪拌加熱至完全透明,冷卻定容至100液現(xiàn)配現(xiàn)用。注:可溶性淀粉應(yīng)采用酶制劑分析專用淀粉。酸緩沖液(262O),用水溶解并定容至10000164 酸溶液c(。光光度計(jì)。溫水浴:精度動(dòng)移液器。管:2500表。測(cè)酶液的制備稱取試樣1g2g(少量磷酸緩沖液充分溶解,將上清液小心傾入容量瓶中,若有剩余殘?jiān)?再加少量磷酸緩沖液充分研磨,最終樣品全部移入容量瓶中,用磷酸緩沖液定容至刻度,搖勻。用四層紗布過濾,濾液待用。注:測(cè)耐高溫5U/定a) 勻后,置于60耐高溫恒溫水浴中預(yù)熱8b) 即計(jì)時(shí),搖勻,準(zhǔn)確反應(yīng)5c) 勻,66010)。根據(jù)吸光度查表附錄B,求得測(cè)試酶液的濃度。溫位為U/g,按式(算:X1=cn(中:c測(cè)試酶樣濃度,單位為U/g;n樣品的稀釋倍數(shù)。所得結(jié)果表示至整數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的5%。高溫U/式(算:X2=cn(中:c測(cè)試酶樣的濃度,單位為U/g;n樣品的稀釋倍數(shù);0165 根據(jù)酶活力定義計(jì)算的換算系數(shù)。所得結(jié)果表示至整數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的相對(duì)誤差不得超過5%。糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶)活力的測(cè)定(黑曲霉及其變異株來源)糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶)以淀粉為底物,在一定條件下從淀粉的非還原性末端開始水解、葡萄糖苷鍵產(chǎn)生葡萄糖的淀粉葡萄糖苷酶。糖淀粉酶(淀粉葡糖苷酶)活力1為一個(gè)酶活力單位,以U/U/g)表示。乙酸稱取乙酸鈉(水溶解并定容至1000述緩沖溶液的使用酸度計(jì)加以校正。硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。碘標(biāo)準(zhǔn)溶液。氫氧化鈉溶液。硫酸溶液:吸取分析純濃硫酸(卻后,用水定容至100勻。00g/取氫氧化鈉20g,用水溶解,并定容至1000g/取可溶性淀粉2g后用少量水調(diào)勻,緩緩傾入已沸騰的水中,煮沸、攪拌直至透明,冷卻,用水定容至100溶液需當(dāng)天配制。注:可溶性淀粉應(yīng)采用酶制劑分析專用淀粉。析天平:度計(jì):析天平:溫水浴:40續(xù)多檔分配器(移液槍)。力攪拌器。體酶:使用連續(xù)多檔分配器準(zhǔn)確吸取適量酶樣,移入容量瓶中,用緩沖溶液稀釋至刻度,充分搖勻,待測(cè)。體酶:用50確至1少量乙酸用玻璃棒仔細(xì)搗研,將上層清液小心傾入適當(dāng)?shù)娜萘科恐?在沉渣中再加入少量緩沖溶液,如此反復(fù)搗研3次0166 4次,取上清液,最后全部移入容量瓶中,用緩沖溶液定容,磁力攪拌30上清液測(cè)定。注:活力約為120U/50U/克計(jì)算。定取A、別加入可溶性淀粉溶液25勻。于40恒溫水浴中預(yù)熱50即記時(shí),搖勻。在此溫度下準(zhǔn)確反應(yīng)30即向A、勻,同時(shí)將兩管取出,迅速用水冷卻,為空白對(duì)照)。吸取上述A、別于兩個(gè)碘量瓶中,加氫氧化鈉溶液15加邊搖勻,并于暗處放置15出。用水淋洗瓶蓋,加入硫酸溶液2硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定藍(lán)紫色溶液,直至剛好無色為其終點(diǎn),分別記錄空白和樣品消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積(A、B)。果計(jì)算葡糖淀粉酶制劑的酶活力位為U/g,按式(算:2.2n2512(中:A滴定空白時(shí),消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,單位為毫升(B滴定樣品時(shí),消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積,單位為毫升(硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的準(zhǔn)確濃度,單位為摩爾每升();g/=反應(yīng)液的總體積,單位為毫升(5吸取反應(yīng)液的體積;1/2折算成1n稀釋倍數(shù);2反應(yīng)30算成1樣品測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,保留3位有效數(shù)字。試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的10%。白酶能切斷蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的肽鍵,使蛋白質(zhì)分子變成小分子多肽和氨基酸的酶。白酶活力蛋白酶活力以蛋白酶活力單位表示,定義為1一定溫度和為1個(gè)酶活力單位,以U/g(U/示。理蛋白酶在一定的溫度與解酪蛋白底物,產(chǎn)生含有酚基的氨基酸(如:酪氨酸、色氨酸等),0167 堿性條件下,將福林試劑還原,生成鉬藍(lán)與鎢藍(lán),用分光光度計(jì)于波長680活力與吸光度成比例,由此可以計(jì)算產(chǎn)品的酶活力。林試劑:于2000酸鈉(7005%磷酸50鹽酸100火沸騰回流10h,取下回流冷卻器,在通風(fēng)櫥中加入硫酸鋰(0g、水509%),再微沸15除去多余的溴(冷后仍有綠色需再加溴水,再煮沸除去過量的溴),冷卻,加水定容至1000勻,過濾。制得的試劑應(yīng)呈金黃色,貯存于棕色瓶內(nèi)。林使用溶液:一份福林試劑與二份水混合,搖勻。也可使用市售福林溶液配制。酸鈉溶液():稱取無水碳酸鈉(水溶解并定容至1000氯乙酸():水溶解并定容至1000氧化鈉溶液(20g/L):水900溶液到室溫后續(xù)水定容至1000拌均勻。酸溶液:c(1。酸溶液:c(。沖溶液。以下各種緩沖溶液配制時(shí)需用 磷酸緩沖液(用于中性蛋白酶制劑)。分別稱取磷酸氫二鈉(2水溶解并定容至1000 乳酸鈉緩沖液(用于酸性蛋白酶制劑)。取乳酸(80%90%)0%)水至900拌至均勻。容至1000 硼酸緩沖溶液(用于堿性蛋白酶制劑)。水900拌至均勻。用1氫氧化鈉溶液調(diào)整容至1000蛋白溶液():稱取標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白(少量氫氧化鈉溶液(若酸性蛋白酶制劑則用濃乳酸2滴3滴)濕潤后,加入相應(yīng)的緩沖溶液約80沸水浴中加熱煮沸30不時(shí)攪拌至酪蛋白全部溶解。冷卻到室溫后轉(zhuǎn)入100適宜的容前檢查并調(diào)整溶液在冰箱內(nèi)貯存,有效期為3天。使用前重新確認(rèn)并調(diào)整:不同來源或批號(hào)的酪蛋白對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響。如使用不同的酪蛋白作為底物,使用前應(yīng)與以上標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白進(jìn)行結(jié)果比對(duì)。00g/精確稱取預(yù)先于1051鹽酸溶液60為1mg/取1mg/鹽酸溶液定容至100得到100g/:除上述蛋白酶的溶解/稀釋緩沖體系外,生產(chǎn)者和使用者還可以探討使用其他適用的緩沖體系。析天平:外0168 溫水浴鍋:精度 準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制按如下操作:a) 做平行試驗(yàn)),蕩均勻,置于40浴中顯色20出,用分光光度計(jì)于波長6800不含酪氨酸的0管為空白,分別測(cè)定其吸光度。以吸光度氨酸的濃度制標(biāo)準(zhǔn)曲線。c) 利用回歸方程,計(jì)算出當(dāng)吸光度為1時(shí)的酪氨酸的量(g),即為吸光常數(shù)00范圍內(nèi)。如不符合,需重新配制試劑,進(jìn)行試驗(yàn)。注:測(cè)酶液的制備稱取酶樣品1g2g,后用相應(yīng)的緩沖液溶解并稀釋到一定濃度,推薦濃度范圍為酶活力10U/5U/于粉狀的樣品,可以用相應(yīng)的緩沖液充分溶解,然后取濾液(慢速定性濾紙)稀釋至適當(dāng)濃度。定按如下進(jìn)行測(cè)定:a) 先將酪蛋白溶液放入40溫水浴中,預(yù)熱5b) 按下列程序操作:試管A(空白) 試管B(酶試樣,需作三個(gè)平行試樣) 02 400169 勻)勻)4010 40勻)勻) 取出靜置10濾(慢速定性濾紙)取出靜置10濾(慢速定性濾紙) 0顯色20 40顯色201010草芽孢來源的中性蛋白酶制劑,除反應(yīng)與顯色溫度為30,其他操作同上,標(biāo)準(zhǔn)曲線做同樣處理。果計(jì)算從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品最終稀釋液的酶活力,蛋白酶制劑的酶活力位為U/g,按式(算:10(中:由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣品最終稀釋液的活力,單位為U/1溶解樣品所使用的容量瓶的體積,單位為毫升(4反應(yīng)試劑的總體積,單位為毫升(樣品的稀釋倍數(shù);樣品的質(zhì)量,單位為克(g);10反應(yīng)時(shí)間,單位為分鐘(所得結(jié)果表示至整數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的3%。膠酶活力的測(cè)定(黑曲霉來源)膠酶能水解果膠,生成含有還原性基團(tuán)產(chǎn)物的酶。膠酶活力在50、11為1個(gè)酶活力單位,以U/ 原理果膠酶能水解果膠,生成的半乳糖醛酸的還原性糖醛基可用次亞碘酸法定量測(cè)定,以此來表示果膠酶的活性。01610 本方法主要用于檢測(cè)果膠酶產(chǎn)品中多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶的活力,對(duì)于果膠酶中的果膠(甲基)酯酶不適用。0g/加水溶解,煮沸,冷卻,過濾。水定容至100箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩Ｊ褂脮r(shí)間不超過3天。注:果膠底物對(duì)試驗(yàn)的影響大。如使用不同來源或批號(hào)的果膠粉,應(yīng)與舊批次進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)。代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:c(。酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:c(122。標(biāo)準(zhǔn)溶液:c(12。硫酸溶液:慢加入適量水中,冷卻后用水定容至100勻,備用。溶性淀粉指示液(10g/L)。檸檬酸稱取檸檬酸(2O)檬酸三鈉(950用水定容至1000 色管:25加熱裝置的恒溫水浴:控溫精度量瓶:250定管:25 品溶液的制備用已知質(zhì)量的50取1g2少量檸檬酸用玻璃棒搗研,將上清液小心傾入容量瓶中,若有剩余殘?jiān)?再加少量上述緩沖液充分研磨,最終樣品全部移入容量瓶中,定容至刻度,搖勻。用四層紗布過濾,濾液待用。注:待測(cè)酶液需準(zhǔn)確稀釋至一定倍數(shù),要時(shí)可先做預(yù)備試驗(yàn)。定于甲、乙兩支比色管中,分別加入5于50溫水浴中預(yù)熱8甲管(空白)加入5乙管(樣品)中加入1即搖勻,計(jì)時(shí),準(zhǔn)確反應(yīng)30即取出,加熱煮沸5卻;取上述甲、乙管反應(yīng)液各5確加入4勻,于暗處放置20出,加入2硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至淺黃色,加淀粉指示液3滴,繼續(xù)滴定至藍(lán)色剛好消失為其終點(diǎn),記錄甲管、乙管反應(yīng)液消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。同時(shí)做平行樣品測(cè)定。果計(jì)算果膠酶制劑的酶活力位為U/g,按式(算:n1051(01611 式中:空白消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,單位為毫升(樣品消耗硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,單位為毫升(硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,單位為摩爾每升();半乳糖醛酸的毫摩爾質(zhì)量,單位為毫克(n稀釋倍數(shù);10反應(yīng)液總體積,單位為毫升(5滴定時(shí)取反應(yīng)混合物的總體積,單位為毫升(1反應(yīng)時(shí)加入稀釋酶液的體積,單位為毫升(反應(yīng)時(shí)間,單位為小時(shí)(h)。所得結(jié)果表示至整數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的3%。 分鐘生成1偶姻),即為1個(gè)酶活力單位,以U/g(或U/示。圍本方法規(guī)定了方法適用于用分光光度計(jì)測(cè)定方法不適用于啤酒和其他含醇產(chǎn)品中樣中3偶姻)和/或雙乙酰的存在會(huì)使試驗(yàn)結(jié)果偏大。乙偶姻在貯存時(shí)易形成二聚體,從而影響試驗(yàn)結(jié)果。但若遵循配制步驟中所述的措施去預(yù)防,本方法仍可使用。理偶姻在堿性條件下與萘酚和肌酸的混合物反應(yīng)生成紅色產(chǎn)物。通過在522以從乙偶姻標(biāo)準(zhǔn)曲線上得出反應(yīng)生成的乙偶姻的量,進(jìn)而計(jì)算出)緩沖液:分別稱取2-01612 嗎啉代乙基磺酸(2-后加入15%拌均勻;用約1后移入5000水定容,攪拌均勻。該溶液在常溫(1520)下的保存期為一周。):吸取乙基拌20約1后,再用緩沖液定容。該溶液使用前配制。酚()/肌酸()顯色劑:約1的氫氧化鈉溶液溶解并定容。該溶液使用前配制。配制時(shí)需避光,并且冰浴。警告1毒。對(duì)眼和黏膜有刺激性。吞咽或經(jīng)皮膚吸收都能引起中毒。偶姻(3備液():取一定量的乙偶姻于試管中,在37恒溫箱中溶解。然后將試管置于冰水中使乙偶姻重結(jié)晶。重結(jié)晶后,乙偶姻不含有影響試驗(yàn)結(jié)果的乙偶姻二聚體,可用于儲(chǔ)備液的配制;入100水溶解并定容。注:乙偶姻對(duì)熱不穩(wěn)定,且容易吸潮,因此應(yīng)放置在干燥器中冷藏(26)保存。如發(fā)現(xiàn)物質(zhì)有明顯的吸潮現(xiàn)象,建議放棄不用。該溶液在冷藏條件下的保存期為一周。偶姻標(biāo)準(zhǔn)溶液乙偶姻標(biāo)準(zhǔn)溶液,溶液應(yīng)每天配制。偶姻標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)乙偶姻儲(chǔ)備液1析天平: 酸度計(jì): 恒溫水浴鍋:301) 35是適合的市售產(chǎn)品。也可用同等分析效果的產(chǎn)品。光光度計(jì):可在522 計(jì)時(shí)器。旋振蕩器。01613 偶姻標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別吸取配制好的乙偶姻標(biāo)準(zhǔn)溶液400L(10后,渦旋振蕩器充分混合均勻。置于室溫,并開始計(jì)時(shí)。用分光光度計(jì),在522 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的制備建議使用一個(gè)有代表性的、穩(wěn)定的樣品作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品。在每次分析中,將該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品與樣品一同進(jìn)行檢測(cè),以判斷試驗(yàn)的重復(fù)性。品溶液的制備從樣品中稱取一定量的試料,溶液稀釋。其稀釋的倍數(shù)要使樣品的最終吸光度 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以522偶姻的濃度()為制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率h(或用回歸方程計(jì)算)。樣品的反應(yīng)將試樣溶液和底物先置于30水浴中預(yù)熱約10后,按下述方法處理每一個(gè)試樣溶液:a) 樣品吸光度值浴中的10渦旋振蕩器充分混勻,迅速放回到水浴中,并開始計(jì)時(shí)。b) 空白吸光度值緩沖液代替試料溶液,依上述步驟進(jìn)行操作。c) 渦旋振蕩器充分混勻。置于室溫,重新開始計(jì)時(shí)。d) 用分光光度計(jì),在522果計(jì)算位為U/g,按式(算:mh(中:樣品的吸光度;空白的吸光度;樣品溶液反應(yīng)前的總稀釋倍數(shù);m試料的質(zhì)量,單位為克(g);h標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。果表示樣品的測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示。當(dāng)結(jié)果小于1U/g(或U/給出1位有效數(shù)字;當(dāng)結(jié)果大于等于1U/g(或U/小于100U/g(或給出2位有效數(shù)字;當(dāng)結(jié)果大于等于100U/g(或U/給出3位有效數(shù)字。01614 試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的10%。圍本方法規(guī)定了方法適用于用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定方法不適用于啤酒和其他含醇產(chǎn)品中樣中3偶姻)和/或雙乙酰的存在會(huì)使試驗(yàn)結(jié)果偏大。乙偶姻在貯存時(shí)易形成二聚體,從而影響試驗(yàn)結(jié)果。但若遵循配制步驟中所述的措施去預(yù)防,本方法仍可使用。理偶姻在堿性條件下與萘酚和肌酸的混合物反應(yīng)生成紅色產(chǎn)物。通過在510照標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)一步計(jì)算出酶樣品的活力。)緩沖液: ): 萘酚()/肌酸()顯色劑:自動(dòng)生化分析儀:要求帶有進(jìn)樣系統(tǒng)、攪拌系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)30檢測(cè)系統(tǒng)。檢測(cè)系統(tǒng)要求可在510動(dòng)力學(xué)法檢測(cè)吸光度變化,時(shí)間間隔最少18s。如:蘭)或同等分析效果的儀器。析天平: 酸度計(jì):準(zhǔn)曲線的制備稱取一定量的緩沖液溶解并定容至100到標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)儲(chǔ)備液和標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)每日配制。01615 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的制備標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的制備按如下操作:a) 取一定量的乙偶姻于試管中,在37的恒溫箱中溶解。然后將試管置于冰水中使乙偶姻重結(jié)晶。b) 緩沖液溶解并定容至200到標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液。然后再用相同的緩沖液稀釋20倍備用。二次稀釋后的乙偶姻溶液的濃度相當(dāng)于50mU/準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液在48并且避光的條件下的保存期為一周。品溶液的制備從樣品中稱取一定量的試樣,用緩沖液溶解稀釋。 物保溫周期溫度:30;時(shí)間:480s;底物:40L;水:20L。反應(yīng)周期溫度:30;時(shí)間:650s;樣品稀釋液:40L;水:20L。色反應(yīng)周期溫度:30;時(shí)間:240s;01616 顯色試劑:80L;水:15L。定周期測(cè)定模式:動(dòng)力學(xué)法;波長:510曲線類型:非線性;時(shí)間:145s;讀數(shù):9次;間隔:18s。準(zhǔn)曲線的計(jì)算用參數(shù)中軸單位為標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的酶活力mU/ 樣品活性的計(jì)算從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品最終稀釋液的活性力,單位為mU/位為U/g,按式(算:4F000(中:由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣品最終稀釋液的活性力,單位為mU/溶解樣品用的容量瓶的體積,單位為毫升(D稀釋倍數(shù);m試樣的質(zhì)量,單位為克(g);1000品的測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示。品的試驗(yàn)結(jié)果有效,可計(jì)算平均值。否則,應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)結(jié)果小于1U/g(或給出1位有效數(shù)字;當(dāng)結(jié)果大于等于1U/g(或小于100U/g(或給出2位有效數(shù)字;當(dāng)結(jié)果大于等于100U/g(或給出3位有效數(shù)字。g(或,表示為g(或試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的4%。葡糖苷酶可水解麥芽糖分子及直鏈麥芽糊精中時(shí)將游離出來的葡萄糖殘基轉(zhuǎn)移到一個(gè)葡萄糖分子或麥芽糖、麥芽三糖分子上,形成鍵,生成異麥芽糖、潘糖、異麥芽三糖等含鍵的寡糖的酶。葡糖苷酶活力在40、01617 萄糖,即為1個(gè)酶活力單位,以U/ 原理轉(zhuǎn)葡糖苷酶作用于底物成的葡萄糖與含有葡萄糖氧化酶、過氧化酶的4 乙酸溶液:將乙酸(釋至1000乙酸鈉溶液:將乙酸鈉(釋至1000乙酸將乙酸溶液(0釋至100劑A);將乙酸鈉溶液(0釋至100劑B);將將甲基)氨基甲烷2水稀釋至100041100釋至50%苯酚溶液:將苯酚(于50溶液冷卻至室溫,用水稀釋至100入葡萄糖氧化酶(555065U/125U,配隨用)。物溶液:將7水稀釋至10015可穩(wěn)定兩周)。品溶液的制備稱取1確至到適當(dāng)大小的容量瓶中,用經(jīng)冷卻的水稀釋至刻度,混勻。注:乙酸5040恒溫水浴箱中保溫10勻,于40恒溫水浴箱中準(zhǔn)確保溫60試管轉(zhuǎn)移至沸水浴中加熱5后用流水快速冷卻。冷卻后,加入4勻。將此試管放入40恒溫水浴箱中,保溫20定500白對(duì)照:50勻。將試管轉(zhuǎn)移至沸水浴中加熱5后用流水快速冷卻。冷卻后,加入底物溶液1勻。入4勻。將此試管放入40恒溫水浴箱中,保溫20定500確稱取105下干燥66000g,溶于100別取1水定容至100100g,300g,01618 50050勻。將這些試管放入40恒溫水浴箱中,保溫20定500準(zhǔn)液的空白對(duì)照:用水來替代葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液,按上述方法測(cè)定空白對(duì)照液吸光度 結(jié)果計(jì)算轉(zhuǎn)葡糖苷酶活力位為U/g,按式(算:G(中,算:G=100000(中:G葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的葡萄糖量,單位為微克(g);反應(yīng)體系的總?cè)萘?單位為毫升(反應(yīng)體系的取樣量,單位為毫升(n酶樣品的稀釋倍數(shù);反應(yīng)體系中酶樣品的添加量,單位為毫升(各反應(yīng)液對(duì)應(yīng)的吸光度值;空白對(duì)照液液的吸光度值。平行試驗(yàn)相對(duì)誤差不得超過5%。理酶作用于淀粉溶液生成還原糖。然后加入費(fèi)林試劑,在加熱的情況下,定量生成氧化亞銅沉淀。在加入碘化鉀和硫酸后,生成游離碘,此時(shí),立即用硫代硫酸鈉溶液滴定。0%碘化鉀溶液:碘化鉀150存在褐色試劑瓶中,避免陽光直射。5%硫酸溶液:硫酸125 硫代硫酸鈉溶液:硫代硫酸鈉溶液500得溶液的總體積為1000制好后,應(yīng)進(jìn)行標(biāo)定,求出濃度校正系數(shù) 1乙酸將1乙酸鈉溶液加入到1乙酸溶液中, 可溶性淀粉溶液(將可溶性淀粉(試劑級(jí))在105干燥4后,干)的可溶性淀粉,緩慢加入到沸水50沸5自來水冷卻后,加入1乙酸水定容到10