植物組織培養(yǎng)技術(shù)

1、.三組培苗生長環(huán)境有何特點(diǎn)？如何針對(duì)這些特點(diǎn)提高移栽成活率？1.組培煉苗是組培過程較為重要的一個(gè)環(huán)節(jié)，是一個(gè)較為復(fù)雜的技術(shù)體系，提高煉苗成活率是決定組培成敗和降低組培成本的關(guān)鍵。試管苗一般在高濕（100%）、弱光（3000-4000Lux）、恒溫（25）下培養(yǎng)，2.1組培苗的特點(diǎn)葉片無保護(hù)組織（角質(zhì)層、蠟質(zhì)、表皮毛等），加之細(xì)胞間隙大，氣孔開張大，因此水分散失較快，易于萎蔫。根無根毛或極少，并且有些從愈傷組織上發(fā)育的根與芽的疏導(dǎo)組織不相同，因此吸水能力較弱。2.2提高移栽成活率的方法而當(dāng)煉苗移栽時(shí)，環(huán)境有了極大的改變：濕度降低、光照增強(qiáng)、溫度升高、溫差變大。具以上特點(diǎn)的組培苗，在此環(huán)境下，葉片

2、失水較嚴(yán)重，根系吸水能力不足，即吸水量小于蒸騰水量，從而造成植物萎蔫，煉苗失敗。另一種情況是，空氣溫度上升要比基質(zhì)溫度上升快，而根系的吸水能力在一定范圍內(nèi)與溫度是成正比的，當(dāng)氣溫升高時(shí)，加之濕度較低，葉片蒸騰急速增加，此時(shí)基質(zhì)溫度上不去，根系吸水能力不夠，造成蒸騰大于吸水的失衡狀態(tài)，從而萎蔫死亡。要想獲得高的煉苗成活率就得針對(duì)以上問題，一方面提高出瓶苗的質(zhì)量，提高其抗逆性，生根前的壯苗、理想的生根配方和生根培養(yǎng)環(huán)境的調(diào)控是關(guān)鍵；另一方面就得有針對(duì)組培苗特點(diǎn)創(chuàng)造一個(gè)適宜的煉苗環(huán)境，比如保證空氣濕度，平衡空氣和基質(zhì)的溫度平衡關(guān)系等。四、生長素類分裂素類調(diào)節(jié)劑在主培中有哪些生理作用？在快速繁殖的起始

3、，芽增殖及生根培養(yǎng)階段應(yīng)該如何使用？培養(yǎng)中生長素一方面用于誘導(dǎo)愈傷組織的形成和生根，另一方面是與一定量的細(xì)胞分裂素配合使用共同誘導(dǎo)不定芽的分化，側(cè)芽的萌發(fā)與生長以及某些植物胚狀體的誘導(dǎo)。在植物組織培養(yǎng)中的細(xì)胞分裂素的主要功能是促進(jìn)細(xì)胞的分裂和分化，打破頂端優(yōu)勢，誘導(dǎo)芽的分化和增殖，促進(jìn)組織和器官的不定芽發(fā)育。當(dāng)培養(yǎng)基中的細(xì)胞分裂素與生長素的比例高時(shí)，誘導(dǎo)芽的分化，反之，誘導(dǎo)根的分化?？焖俜敝车钠鹗茧A段 培養(yǎng)基中加入適量的生長素和細(xì)胞分裂素類芽增殖階段 向培養(yǎng)基中加入較多的細(xì)胞分裂素類的物質(zhì)促進(jìn)芽的分化生根培養(yǎng)階段 向培養(yǎng)基中加入較多的生長素類物質(zhì)促進(jìn)根的分化五利用組織培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)苗木及次生代謝

4、物的手段有哪些？培養(yǎng)對(duì)象分別是什么？培養(yǎng)新品種的手段有哪些？培養(yǎng)對(duì)象分別是什么？培養(yǎng)苗木及次生代謝物的手段培養(yǎng)對(duì)象植物器官培養(yǎng) .離體根，離體的莖尖，離體葉或離體的莖。分生組織培養(yǎng)凡是有分化能力的細(xì)胞都可以植物胚胎培養(yǎng)離體胚植物細(xì)胞培養(yǎng)（懸浮培養(yǎng)，細(xì)胞懸浮培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)等）具有活性的細(xì)胞和細(xì)胞小聚體植物微繁技術(shù)外植體培養(yǎng)新品種的手段培養(yǎng)對(duì)象植物細(xì)胞培養(yǎng)（懸浮培養(yǎng)，細(xì)胞懸浮培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)等）具有活性的細(xì)胞和細(xì)胞小聚體植物原生質(zhì)體培養(yǎng)去了細(xì)胞壁的有活性的細(xì)胞原生質(zhì)體融合原生體植物花藥和花粉培養(yǎng)植物有活性的花粉和花藥六影響植物組織培養(yǎng)成功的因素有哪些？1) 實(shí)驗(yàn)室要合適，要很好的控制好光照，濕度和溫

5、度。2) 培養(yǎng)材料及所需要的實(shí)驗(yàn)用具要洗凈，嚴(yán)格的消毒滅菌。3) 培養(yǎng)基配置技術(shù)要合理，要注意調(diào)溶液的PH等（如：如果要培養(yǎng)長根的話，可以適當(dāng)?shù)募哟笊L素的濃度）4) 注意無菌操作技術(shù)5) 實(shí)驗(yàn)操作是要注意無菌操作（操作幅度不要過大，手要消毒徹底等）6) 外植體的選擇（同一植物不同部位的細(xì)胞活性不同，一般植物鮮嫩的部位比較好，比如說莖尖。像木質(zhì)部就不合適。）7) 各種激素類物質(zhì)的配合比例要合適。七闡述植物組織培養(yǎng)的主要障礙，發(fā)生原因及防治措施？植物組織培養(yǎng)的主要障礙發(fā)生的原因防治措施 褐化1) 材料的基因型差異2) 材料的生理狀態(tài)3) 培養(yǎng)基成分4) 其他因子的影響（培養(yǎng)時(shí)間的長短等）1. 選

6、擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w和培養(yǎng)條件2. 抗氧化劑和抑制劑的作用3. 其他防止褐變的措施（連續(xù)轉(zhuǎn)移或預(yù)處理等）玻璃化1. 玻璃化苗的形態(tài)學(xué)，解剖學(xué)特征2. 玻璃花苗的生理生化特點(diǎn)3. 外植體 4. 培養(yǎng)環(huán)境條件5. 培養(yǎng)成分1. 選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w2. 改善培養(yǎng)基組成3. 改善培養(yǎng)條件遺傳的穩(wěn)定性自身的遺傳特性選擇合適的外植體控制好培養(yǎng)條件污染污染的來源（材料的本身，由外界環(huán)境侵入）1) 供體材料的選擇（選擇健康，無病毒的植株）2) 培養(yǎng)物的檢驗(yàn)3) 合理的擴(kuò)繁程序4) 嚴(yán)格的無菌操作規(guī)程八某地區(qū)的一種馬鈴薯經(jīng)多年種植后，植株變得矮小，產(chǎn)量和品質(zhì)下降，請(qǐng)用所學(xué)組織知識(shí)分析原因，并設(shè)計(jì)一個(gè)解決方案。原因： 幾

7、乎所有的栽培植物都發(fā)現(xiàn)感染甚至幾種病毒，大部分的病毒屬于RNA病毒，病毒對(duì)植物的生長發(fā)育產(chǎn)生不良的影響，常常會(huì)導(dǎo)致植物矮小，產(chǎn)量和品質(zhì)的下降。解決方案：（分生組織培養(yǎng)脫毒法）1. 分生組織的分離從大田中取健壯的植株的頂芽或萌發(fā)芽，帶回實(shí)驗(yàn)室除去可見葉，材料清洗干凈。用75%酒精漂洗，在用20倍的次氯酸鈉消毒8-10分鐘，無菌水沖洗3次，然后在無菌操作室進(jìn)行無菌操作。切下生長點(diǎn)轉(zhuǎn)入合適的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。2. 培養(yǎng) 莖尖分生組織分離后轉(zhuǎn)入到瓊脂培養(yǎng)基上于25-27條件下進(jìn)行光培養(yǎng)。3. 建立無性繁殖體系利用生長點(diǎn)培養(yǎng)無毒苗的成活率和脫毒率都非常低，培養(yǎng)出來的新苗要進(jìn)行鑒定，鑒定無毒后再用新苗的莖尖

8、再進(jìn)行培養(yǎng)新苗。4. 脫毒苗試管株的移栽和品種特性鑒定將試管苗移栽到土壤中，這個(gè)轉(zhuǎn)變要有一個(gè)逐漸鍛煉適應(yīng)。九 現(xiàn)有MS培養(yǎng)基母液6瓶，母液1為50倍，母液2為50倍，母液3為50倍，母液4為100倍，母液5為20倍，母液6為200倍，激素母液有1mg/ml IAA,0.5mg/ml NAA,2mg/ml 6-BA,4mg/ml KT,以及蔗糖和瓊脂若干，請(qǐng)利用這些材料配置2L MS+2mg/L IAA+1mg/L NAA+3mg/L6-BA+3%蔗糖+0.7%瓊脂培養(yǎng)基，寫出配制方法步驟及滅菌過程。配制方法：配制2L的各種物質(zhì)的用量如下：吸取母液的用量為：母液1：2000ml/50=40ml母

9、液2：2000ml/50=40ml母液3：2000ml/50=40ml母液4：2000ml/100=20ml母液5：2000ml/20=100ml母液6：2000ml/200=10ml激素用量：IAA：吸取1mg/ml IAA母液4mlNAA:吸取0.5mg/ml NAA母液4ml6-BA:吸取2mg/ml 6-BA母液3ml蔗糖：60g 瓊脂：14g滅菌過程：將混合的培養(yǎng)液加瓊脂加熱，到適宜的溫度后調(diào)PH值為5.8后倒入培養(yǎng)瓶中，冷卻看是否凝固，如果凝固的話放入高壓蒸汽滅菌鍋中滅菌。（0.1Mpa 121 20分鐘）滅菌之前要看滅菌鍋中是否有水，如果水不夠是話要加水，滅菌好了之后，關(guān)掉電源放氣，當(dāng)指針指到0 Mpa時(shí)就可以打開滅菌鍋的蓋子，最后拿出培養(yǎng)瓶放好，千萬不要打開瓶蓋。十簡述植物無糖組培的意義及技術(shù)要點(diǎn)？無糖組培的意義： 傳統(tǒng)的主旨植物組織培養(yǎng)都使用含糖的培養(yǎng)基，雜菌很容易侵入培養(yǎng)容器并在培養(yǎng)基中繁殖造成污染，是造成組織培養(yǎng)的一大障礙。為了防止雜菌的侵入，在組織培養(yǎng)中通常將培養(yǎng)容器完全密閉，這種方式使植物生長相對(duì)緩慢，且易出現(xiàn)形態(tài)及生理的異常，同時(shí)也大大提高人工費(fèi)用和生產(chǎn)成本。而無糖組培解決了這些問題。無糖組培在培養(yǎng)基中不加入糖，只是通過提高培養(yǎng)空間的光照度，二氧化碳的