組培考試復(fù)習(xí)重點

1、一、名詞解釋1、植物組織培養(yǎng)：植物的離體器官、組織或細(xì)胞在人工制備的培養(yǎng)基上進行無菌培養(yǎng)，并在人工控制的環(huán)境條件下，使其發(fā)育成完整植株的科學(xué)技術(shù)2、胚胎培養(yǎng)：指對植物的胚、胚胎、胚珠和子房的培養(yǎng)。3、愈傷組織：原本指植物在受傷后于其傷口表面形成的一團薄壁細(xì)胞。在組培中，則指人工培養(yǎng)基上由外植體形成的一團無序生長的薄壁細(xì)胞。4、植物細(xì)胞的全能性：指植物的每一個細(xì)胞都攜帶有一完整的基因組，并具有發(fā)育成完整植株的潛在能力。5、人工種子:指通過組織培養(yǎng)技術(shù)，將植物的體細(xì)胞誘導(dǎo)在形態(tài)上和生理上均與合子胚相似的體細(xì)胞胚，然后將它包埋于有一定營養(yǎng)成分和保護功能的介質(zhì)中，組成便于播種的類似種子的單位。6、細(xì)胞

2、分化：一個尚未特化的細(xì)胞發(fā)育出特征性結(jié)構(gòu)和功能的過程。7、原生質(zhì)體培養(yǎng)：脫去全部細(xì)胞壁的細(xì)胞叫原生質(zhì)體，對離體植物的原生質(zhì)體進行培養(yǎng)，形成完整植株的培養(yǎng)技術(shù)。8、植物分生組織培養(yǎng)：是指對植物的分生組織進行離體培養(yǎng)的技術(shù)，包括植物根尖、莖尖等頂端分生組織和形成層組織的培養(yǎng)。其中莖尖培養(yǎng)廣泛應(yīng)用于植物再生和脫病毒研究。9、初代培養(yǎng)：是指在組培過程中，最初建立的外植體無菌培養(yǎng)階段。即無菌接種完成后，送入培養(yǎng)室的外植體在適宜的光、溫、氣等條件下被誘導(dǎo)成無菌短枝(或稱莖梢)、不定芽(叢生芽)、胚狀體或原球莖等中間繁殖體的過程。（將外植體進行第一次培養(yǎng)。）10、植物細(xì)胞培養(yǎng)：是指對植物器官或愈傷組織上分離

3、出的單細(xì)胞（或小細(xì)胞團）進行離體培養(yǎng)，形成單細(xì)胞無性系或再生植株的技術(shù)。11、外植體：植物組織培養(yǎng)過程中從活體植株上切去下來的用于離體培養(yǎng)的一切材料。（如器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體、種子等）12、脫分化：一個已停止分裂的成熟細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)，并形成未分化的愈傷組織的現(xiàn)象。13、再分化：愈傷組織形成不定芽或不定根或胚狀體。二、簡答題1、簡述莖尖作為外植體進行初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)環(huán)境特點？答：1、 簡述無菌操作的具體步驟？答：(1)在接種4h前用甲醛熏蒸接種室；(2) 在接種前15-20min，打開超凈工作臺的風(fēng)機以及臺上的紫外燈；(3)接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用實驗服，并換穿拖鞋

4、等；(4)上工作臺后，用酒精棉球擦拭雙手，特別是指甲處。然后70%酒精噴霧降塵，并擦拭工作臺面；(5)接種工具蘸95%酒精，灼燒；(6)接種時將瓶口斜著，使瓶口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動，灼燒數(shù)秒鐘。接完種后，將瓶口在火焰上再灼燒數(shù)秒鐘。(7)接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等；(8)接種完畢后要清理干凈并用酒精擦工作臺。1) 實驗前20min將超凈工作臺的紫外燈打開，進行滅菌。試驗時關(guān)閉紫外燈，避免人員被紫外線照射。2) 用酒精噴壺或酒精棉將超凈工作臺消毒，然后實驗操作者的手和小臂也用70酒精消毒。實驗器具用酒精噴壺消毒之后，放入裝有95酒精的廣口瓶中。3) 點燃超凈工作臺上的

5、酒精燈，將廣口瓶中的鑷子和剪刀等器械取出，在酒精燈上灼燒，放置在滅菌支架上冷卻后使用；鑷子和剪刀等器械也可以用滅菌器滅菌，由于滅菌器溫度為300，故器械在滅菌器中滅菌1-2min，然后放在滅菌支架上冷卻后使用。4) 需要接轉(zhuǎn)的培養(yǎng)瓶或新培養(yǎng)瓶均應(yīng)在酒精燈下方處打開瓶蓋，且培養(yǎng)瓶的瓶口須在酒精燈上灼燒，然后用冷卻的無菌器械將材料切割后，植入新培養(yǎng)基上，快速將瓶蓋等封口材料在酒精燈上燎燒，蓋上瓶蓋等封口材料。記錄材料類型和接種日期，放置培養(yǎng)架上2、簡述莖尖作為外植體進行初代培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)環(huán)境特點？3、簡述胚胎培養(yǎng)的應(yīng)用領(lǐng)域？答：1)在遠緣雜交育種中的應(yīng)用:克服雜種胚不能正常發(fā)育2) 克服珠

6、心胚的干擾,提高育種效率3)縮短育種周期4)測定休眠種子的萌發(fā)率5)理論研究中的應(yīng)用(一) 克服遠緣雜交不親和性遠緣雜交中由于胚乳發(fā)育不正?；螂s種胚與胚乳之間生理上的不協(xié)調(diào)，造成雜種胚早期夭折。將早期幼胚進行離體培養(yǎng)進行胚挽救，可克服這種受精后障礙，產(chǎn)生遠緣雜種。，(二) 打破種子休眠?？s短育種周期許多植物的種子發(fā)育不完全或有抑制物存在而影響種胚發(fā)芽。通過幼胚培養(yǎng)，可促使這些植物的幼胚達到生理和形態(tài)上的成熟而提早萌發(fā)形成植株。(三) 提高種子萌發(fā)率長期營養(yǎng)繁殖的植物，雖具有形成種子的能力，但其生活力較低，萌發(fā)成苗率低下，胚培養(yǎng)可促進這類種子萌發(fā)和形成幼苗。意義：、克服遠緣雜種的不育性、使胚胎發(fā)

7、育不完全的植株獲得后代、縮短育種年限，提高育種效率4、簡述生長素的種類及其在組培中的主要生理作用？答：生長素類IAA(吲哚乙酸)：是天然存在的生長素，亦可人工合成，其活力較低，是生長素中活力最弱的激素，對器官形成的副作用小，高溫高壓易被破壞，也易被細(xì)胞中的IAA分解酶降解，受光也易分解。NAA(萘乙酸)：在組織培養(yǎng)中的起動能力要比IAA高出3-4倍，且由于可大批量人工合成，耐高溫高壓，不易被分解破壞，所以應(yīng)用較普遍。NAA和IBA廣泛用于生根，并與細(xì)胞分裂素互作促進芽的增殖和生長。IBA(吲哚丁酸)：是促進發(fā)根能力較強的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)：起動能力比IAA高10倍

8、，特別在促進愈傷組織的形成上活力最高，但它強烈抑制芽的形成，影響器官的發(fā)育。適宜的用量范圍較狹窄，過量常有毒效應(yīng)。生長素配制可先用少量95酒精助溶，2,4-D可用0.1molL的NaOH或KOH助溶。生長素常配成1mg/ml的溶液貯于冰箱中備用5、 簡述細(xì)胞分裂素的種類及其在組培中的主要生理作用？答：細(xì)胞分裂素：誘導(dǎo)不定芽分化和莖、苗的增殖（初代和繼代培養(yǎng)中均需要）包括6-BA、Kt(kinetin)、玉米素ZT等。其中ZT活性最強，但非常昂貴，常用的是6-BA。細(xì)胞分裂素使用濃度：0.05-10mgL。作用：誘導(dǎo)芽的分化促進側(cè)芽萌發(fā)生長。細(xì)胞分裂素與生長素相互作用，當(dāng)組織內(nèi)細(xì)胞分裂素生長素的

9、比值高時，誘導(dǎo)愈傷組織或器官分化出不定芽。促進細(xì)胞分裂與擴大。細(xì)胞分裂素多用于誘導(dǎo)不定芽的分化、莖、苗的增殖，抑制根的分化。避免在生根培養(yǎng)時使用。6、以植物莖尖為外植體，簡述外植體滅菌的一般過程？答：(1)將需要的材料用水洗干凈。(2)表面滅菌：用70%酒精浸30-60s左右。(3)滅菌劑處理：0.1%升汞10分鐘、或在2%次氯酸鈉液中浸泡20-25分鐘。(4)用無菌水沖洗3-5次左右7、簡述植物組織培養(yǎng)與田間植株常規(guī)繁殖技術(shù)相比，具有哪些優(yōu)越性表現(xiàn)？1) 外植體遺傳背景一致性高。再生植株的外植體可以來自細(xì)胞、組織、器官等，個體微小，可來源于同一植物體，遺傳性狀一致性高，試驗精度得到提高。2)

10、 經(jīng)濟方便。外植體培養(yǎng)和繁殖為微型化和精密化，來源廣泛，易管理，成本低。3) 培養(yǎng)材料生長條件可控制。培養(yǎng)材料生長所需的條件，即培養(yǎng)基和環(huán)境條件均可處于人人工控制下，植株生長發(fā)育所需條件一致性高，試驗誤差低。4) 生長周期短。外植體生長處于優(yōu)化條件下，其生長和繁殖速度快。5) 周年生長且規(guī)?；a(chǎn)。不受季節(jié)影響，可周年進行工廠化大規(guī)模生產(chǎn)，保障了產(chǎn)品的質(zhì)量和數(shù)量。8、簡述鐵皮石斛（或馬鈴薯）試管苗的移栽馴化操作技術(shù)程序？移栽前，打開瓶蓋煉苗2-3天。當(dāng)試管苗高約3并有3-4條1左右的新根時，即可進行移栽。移栽前，洗凈組培苗根上的培養(yǎng)基，用0.1滅菌靈消毒，以防止栽培后的石斛苗根腐爛?；|(zhì)可采用

11、經(jīng)過滅菌處理的蛭石。移栽后最初幾天，要將空氣濕度保持在85-95，先進行遮陰，遮光率為60，逐漸增加光照強度。環(huán)境溫度控制在18-22。經(jīng)1-2月的管理，即可定植于由泥炭、碎磚屑以體積3:2所配成的混合基質(zhì)中。石斛喜濕潤的土壤環(huán)境，在管理期間應(yīng)多噴水?；|(zhì)無需追肥。當(dāng)小苗完全適應(yīng)外界環(huán)境后，可每隔1-2周在其葉面噴施一次1/4MS培養(yǎng)基作為追肥。石斛喜溫暖，怕低濕，最好將環(huán)境溫度保持在15-25?；静僮鞑襟E：煉苗（2周）開瓶（1-2天）掏取苗去愈傷組織，洗凈培養(yǎng)基消毒晾苗移栽控制條件（中溫、高濕、低光）培養(yǎng)10-15天大田移栽。9、簡述MS培養(yǎng)基的特點？無機鹽濃度高，特別是硝酸鹽、鉀離子和銨

12、離子含量豐富；元素平衡較好，緩沖性能好；微量元素和有機成分含量齊全且較豐富，是目前使用最廣泛的培養(yǎng)基。為較穩(wěn)定的平衡濃度，是通用型培養(yǎng)基。10、簡述莖尖培養(yǎng)的優(yōu)越性？莖尖生長速度快，繁殖率高，不容易產(chǎn)生遺傳變異，而且莖尖培養(yǎng)時獲得無病毒苗木的有效途徑。所以莖尖培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)最常用的試才之一，分為微莖尖培養(yǎng)和普通莖尖培養(yǎng)，微莖尖培養(yǎng)可以做到脫毒。三、論述題1、綜合分析產(chǎn)生植物組培室污染的原因，并提出控制污染的措施？a) 培養(yǎng)基及各種接種器皿滅菌不徹底b) 外植體滅菌不徹底c) 操作時認(rèn)為帶入d) 環(huán)境不清潔e) 超凈工作區(qū)域不清潔f) 環(huán)境濕度過大措施：a) 滅菌前充分排盡滅菌鍋內(nèi)冷空氣，當(dāng)

13、滅菌鍋壓強達1.03X105-1.38X105Pa、溫度為121-126時，應(yīng)保持滅菌時間20-30分鐘b) 接種器具每次使用后應(yīng)有酒精灼燒或滅菌器滅菌c) 污染的外植體材料應(yīng)及時淘汰，若果種源有限，對外植體材料可進行二次滅菌d) 操作人員接種時應(yīng)用75酒精擦拭雙手和培養(yǎng)瓶表面，操作室內(nèi)不要放入過多待用培養(yǎng)瓶，防止氣流被擋住e) 接種環(huán)境應(yīng)定期用福爾馬林等熏蒸滅菌，經(jīng)常打開紫外燈照射滅菌f) 超凈工作臺應(yīng)定期對初過濾器清洗和更換，提前15-20分鐘打開紫外燈，并用75酒精擦拭整個工作臺g) 控制環(huán)境濕度2、綜合論述植物組織培養(yǎng)在生產(chǎn)中的應(yīng)用領(lǐng)域？答：（1）快速繁殖運用組織培養(yǎng)的途徑，一個單株一

14、年可以繁殖幾萬到幾百萬個植株；（2） 種苗脫毒針對病毒對農(nóng)作物造成的嚴(yán)重危害，通過組織培養(yǎng)可以有效地培育出大量的無病毒種苗；（3） 培育和創(chuàng)制新品種利用組織培養(yǎng)可以使難度很大的遠緣雜交取得成功，從而育成一些罕見的新物種；（4） 大量生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)通過植物細(xì)胞培養(yǎng)獲得的生物堿、維生素、色素、抗生素以及抗腫瘤藥物不下50多個大類，其中已有30多種次生物質(zhì)的含量在人工培養(yǎng)時已達到或超過親本植物的水平。植物細(xì)胞次生物質(zhì)的研制與生產(chǎn)碩果累累，后來居上。5）植物種質(zhì)資源的離體保存植物組織培養(yǎng)結(jié)合超低溫保存技術(shù)，可以給植物種質(zhì)保存帶來一次大的飛躍。因為保存一個細(xì)胞就相當(dāng)于保存一粒種子，但所占的空間僅為原來

15、的幾萬分之一，而且在-193度的液氮中可以長時間保存，不像種子那樣需要年年更新或經(jīng)常更新。（6）人工種子 人工種子便于貯藏和運輸，適合機械化播種；繁殖速度快，不受季節(jié)和環(huán)境限制，利于工廠化生產(chǎn)；體細(xì)胞胚由無性繁殖體系產(chǎn)生，可以固定雜種優(yōu)勢。一）快速繁殖種苗用組織培養(yǎng)的方法進行快速繁殖是生產(chǎn)上最有潛力的應(yīng)用，包括花卉觀賞植物、蔬菜、果樹、大田作物及其他經(jīng)濟作物?？旆奔夹g(shù)不受季節(jié)等條件的限制，生長周期短，而且能使不能或很難繁殖的植物進行增殖。（二）無病毒苗的培養(yǎng)植物在生長過程中幾乎都要遭受到病毒病不同程度的危害，有的種類甚至同時受到數(shù)種病毒病的危害，尤其是很多園藝植物靠無性方法來增殖，若蒙受病毒病

16、，代代相傳，越染越重，甚至?xí)斐蓸O嚴(yán)重的后果。三）在育種上的應(yīng)用植物組織培養(yǎng)技術(shù)為育種提供了許多手段和方法，使育種工作在新的條件下更有效的進行（4） 人工種子人工種子，是指植物離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚狀體或不定芽，被包裹在含有養(yǎng)分和保護功能的人工胚乳和人工種皮中，從而形成能發(fā)芽出苗顆粒體。（5） 工廠化育苗是指以植物組織培養(yǎng)為基礎(chǔ)，將外植體接種在人工配制的培養(yǎng)基上，通過控制環(huán)境條件，使細(xì)胞脫分化、再分化成新的組織、器官，進而培育出與母株一樣的批量幼苗的方法。具有這些優(yōu)點：繁殖快，整齊、一致，無病蟲害，周期短，周年生產(chǎn)，性狀穩(wěn)定2、 綜合論述如何實現(xiàn)組培廠的提質(zhì)增效？答：a) 提高勞動生產(chǎn)率：按工作性

17、質(zhì)進行操作人員分工，實行崗位責(zé)任制，或定額管理計件工資b) 減少設(shè)備投資，延長使用壽命：定期檢查設(shè)備，及時維修c) 降低消耗：用耐高溫的器皿、盡量使用自然光照和溫度，充分利用培養(yǎng)室空間d) 降低污染，提高繁殖率和成活率：e) 簡化培養(yǎng)基：白糖代替蔗糖，自來水代替蒸餾水3、綜合論述培養(yǎng)基的制備操作步驟？答：（1）確定培養(yǎng)基的配方。（2）貯備液（或母液）的配制與保存配一些濃溶液，用時稀釋，這種濃溶液叫貯備液或母液。按藥品種類和性質(zhì)分別配制，單項、單獨保存或幾種混合保存。一般應(yīng)按配方順序依次稱量，分別溶解在少量蒸餾水中，最后再依次加到一起，并定容到規(guī)定體積。貯備液配好后貼上標(biāo)簽，保存在冰箱中。（3）

18、配制培養(yǎng)基先在潔凈的不銹鋼鍋理放入約750ml蒸餾水，加入所需要的瓊脂和糖，最好能在水浴鍋理將瓊脂溶化，如直接加熱應(yīng)不停地攪拌，防止在鍋底燒焦或沸騰溢出。按需要加入相應(yīng)量的母液。按需要加入相應(yīng)量的植物激素和其它物質(zhì)。加蒸餾水定容。充分混合好后，用1NKOH（或NaOH）調(diào)整PH值到所需值。（4）分裝：按容器的大小和培養(yǎng)要求，趁熱將適量培養(yǎng)基分注到三角瓶或試管中，并即刻用封口膜封住瓶口。（5）滅菌：壓力108kPa，溫度121度，時間1530分鐘。1) 取出母液按順序放好，將有機營養(yǎng)物質(zhì)母液溶解待用。將潔凈的各種玻璃器皿如量筒、燒杯、移液管、移液槍和玻璃棒等放在指定位置。2) 取出一只燒杯，放入

19、1/3左右蒸餾水，將母液按順序加入，并不斷攪拌。3) 加入植物生長調(diào)節(jié)劑和蔗糖，待糖溶解后定容。4) 將定容的培養(yǎng)基倒入容器中，稱重并記住重量。加入瓊脂，并加熱使其完全溶解。再稱重，用蒸餾水補充由于蒸發(fā)而損失的水分。5) 調(diào)整pH，用預(yù)先配好的氫氧化鈉或稀鹽酸進行pH調(diào)整。6) 將培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿中，封瓶口。7) 滅菌，用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌或過濾除菌。8) 滅菌后待高壓鍋壓力降為0時，打開滅菌鍋，取出培養(yǎng)瓶，平放凝固后待用。4、 培養(yǎng)基母液配制倍數(shù)、培養(yǎng)基制備中用量的計算方法。答：大量元素：擴大10倍，母液體積1000mL，配1L培養(yǎng)基吸取量100mL鈣鹽：擴大10倍，母液體積1000mL，

20、配1L培養(yǎng)基吸取量100mL微量元素：擴大100倍，母液體積1000mL，配1L培養(yǎng)基吸取量10mL鐵鹽：擴大100倍，母液體積1000mL，配1L培養(yǎng)基吸取量10mL有機元素：擴大50倍，母液體積500mL，配1L培養(yǎng)基吸取量10mL四、綜合掌握1、組織培養(yǎng)各階段（初代、繼代、生根）出現(xiàn)的各種不良培養(yǎng)物現(xiàn)象、產(chǎn)生原因和預(yù)防措施。答：（一）初代培養(yǎng)階段：（1）a、培養(yǎng)物水澤狀，變色，壞死，莖斷面附近干枯。b、可能原因：表面殺菌劑過量，消毒時間過長，外植體選用不當(dāng)（部位或時期）C、改進措施：調(diào)換其他殺菌劑或降低濃度；縮短消毒時間，試用其他部位，生長初期取材。（2） a、培養(yǎng)物長期培養(yǎng)幾乎沒反應(yīng)。

21、b、原因：基本培養(yǎng)基不適宜；生長素不當(dāng)或用量不足；溫度不適宜。C、措施：更換培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基成分，尤其是調(diào)整鹽離子濃度；增加生長素的用量，試用2，4-D；調(diào)整培養(yǎng)基溫度。（3） a、愈傷組織生長過旺、疏松、后期水澤狀原因：激素過量，溫度偏高，無機鹽含量不當(dāng)（大量元素濃度過高）措施：減少激素用量適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整無機鹽含量，適當(dāng)提高瓊脂用量增加培養(yǎng)基硬度。（4） 愈傷組織太緊密，平滑或突起、粗厚原因：細(xì)胞分裂素用量過度多；糖濃度過高，生長素過量。措施：減少細(xì)胞分裂素用量，調(diào)整細(xì)胞分裂素與生長素比例，降低糖濃度。（5） 側(cè)芽不萌發(fā)，皮層膨大，皮孔長出愈傷組織原因：枝條過嫩，生長素、細(xì)胞分裂素

22、用量過多。措施：減少激素用量，使用較老化枝條。（2） 繼代培養(yǎng)階段：目標(biāo)：增殖、分化（愈傷組織叢生芽）（1） 苗分化數(shù)量少，速度慢，分枝少個別苗生長細(xì)高。原因：細(xì)胞分裂素不足，溫度偏高，光照不足。措施：增加細(xì)胞分裂素用量，適當(dāng)降低溫度，改善光照。（2） 苗分化過多，生長慢，有畸形苗，節(jié)間較短，苗叢密集，微型化。原因：細(xì)胞分裂素用量過多，溫度不適宜。措施：同原因相反。（3） 分化率低，畸形，培養(yǎng)時間長時苗再次愈傷組織化。原因：生長素用量偏高，溫度偏高。措施：減少生長素用量，適當(dāng)降溫。（4） 葉粗厚變脆原因：生長素用量過多或兼有細(xì)胞分裂素偏高。措施：同原因相反（5） 再生苗的葉緣，葉面等處偶有不定

23、芽分化出來。原因：細(xì)胞分裂素用量過多。措施：減少用量，分階段利用這一再生方式（6） 叢生芽過于細(xì)弱，不適于生根或者移栽。原因：細(xì)胞分裂素濃度過高或赤霉素使用不當(dāng)，溫度過高，光照短，光照不足，久轉(zhuǎn)不移。措施：減少細(xì)胞分裂素用量，免用赤霉素，延長光照時間，增加光照，及時轉(zhuǎn)接，降低接種密度，更換封口紙的種類。（7） 幼苗淡綠，部分失綠。原因：無機鹽含量不足，pH值不適宜，鐵，錳，鎂等缺少或比例失調(diào)，光照溫度不適。措施：調(diào)整培養(yǎng)基，調(diào)好PH，調(diào)控光溫。（8） 幼苗生長無力，發(fā)黃落葉，有黃葉死苗夾于叢生苗中。原因：瓶內(nèi)氣體狀況惡化，PH值變化過大，久不轉(zhuǎn)接導(dǎo)致糖耗盡，營養(yǎng)元素虧缺失調(diào)，溫度不適。措施：及

24、時轉(zhuǎn)接，降低密度，調(diào)節(jié)元素濃度，改善氣體狀況，控制溫度。（3） 生根階段（1） 培養(yǎng)物久不生根，切口沒有適宜的愈傷組織。原因：生長素用量種類不適宜，生根部位通氣不良，生根程序不當(dāng)，PH不適，無機鹽濃度及配比不當(dāng)。（2） 愈傷組織生長過快過大，根莖部腫脹或畸形，幾條根并聯(lián)或愈合原因：生長素種類不適，用量過高，或伴有細(xì)胞分裂素用量過高，生根誘導(dǎo)培養(yǎng)程序不對。措施：調(diào)換生長素種類，降低使用濃度2、污染、褐化、玻璃化現(xiàn)象、產(chǎn)生原因和預(yù)防措施。（一）污染：在組培過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。（1）污染原因：細(xì)菌、真菌為病原菌；污染途徑有外植體帶菌，培養(yǎng)基及器皿滅菌不徹底，操作人員未

25、遵守操作規(guī)程，環(huán)境不清潔。（2）預(yù)防措施：A、防止材料帶菌：避免陰雨天在室外采集外植體；春秋培養(yǎng)；材料預(yù)培養(yǎng)。B、嚴(yán)格外植體的滅菌。C、接種工具滅菌徹底。D、嚴(yán)格無菌操作規(guī)程。E、保持培養(yǎng)室清潔。（2） （1）玻璃化是試管苗的一種生量失調(diào)癥狀，當(dāng)植物材料進行離體繁殖時，有些培養(yǎng)物的嫩莖、葉片往往會出現(xiàn)半透明狀和水漬狀，為生理失調(diào)癥這種現(xiàn)象稱為玻璃化。（2） 產(chǎn)生玻璃化的主要原因有：a、激素濃度：尤其是CTK增加或CTK/IAA高；b、溫度：溫度低；C、濕度d、培養(yǎng)基的硬度：瓊脂濃度低；e、光照時間：大于15hf、通風(fēng)條件不好。g、培養(yǎng)基離子種類及比例不適宜。（3） 克服措施：增加培養(yǎng)基中的溶質(zhì)

26、水平，以降低培養(yǎng)基的水勢；減少培養(yǎng)基中含氮化合物的用量；適當(dāng)提高蔗糖和瓊脂濃度。增加自然光照；控制光照時間。增加容器通風(fēng)，進行C02施肥（有明顯的作用）；降低培養(yǎng)溫度，進行變溫培養(yǎng)，有助于減輕試管苗玻璃化現(xiàn)象；降低培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量，可以考慮加入適量脫落酸或少量聚乙烯醇。（三）（1）褐變是指在組培過程中，由培養(yǎng)材料向培養(yǎng)基中釋放褐色物質(zhì)，致使培養(yǎng)基逐漸變成褐色，培養(yǎng)材料也隨之慢慢變褐而死亡的現(xiàn)象。2）褐變產(chǎn)生的主要原因：植物品種。不同品種間的褐變現(xiàn)象是不同的。生理狀態(tài)。幼嫩的組織在接種后褐變程度不明顯，而老熟的組織在接種后褐變程度較為嚴(yán)重。休眠期材料容易發(fā)生褐變。培養(yǎng)基成分。濃度過高的無機

27、鹽會使某些觀賞植物的褐變程度增加，此外，細(xì)胞分裂素的水平過高也會刺激某些外植體的多酚氧化酶的活性，從而使褐變現(xiàn)象加深。培養(yǎng)條件不當(dāng)。如果光照過強、溫度過高、培養(yǎng)時間過長等，均可使多酚氧化酶的活性提高，加速被培養(yǎng)的外植體的褐變程度，還有材料轉(zhuǎn)移時間。（3）減輕褐化現(xiàn)象的途徑有以下：選擇合適的外植體。最好選擇生長處于旺盛的外植體，這樣可以使褐變現(xiàn)象明顯減輕。合適的培養(yǎng)條件。無機鹽成分、植物生長物質(zhì)水平、適宜溫度、及時繼代培養(yǎng)均可以減輕材料的褐變現(xiàn)象。使用抗氧化劑。在培養(yǎng)基中，使用半胱氨酸、抗壞血酸等抗氧化劑、0.1-0.5的活性炭能夠較為有效地避免或減輕很多外植體的褐變現(xiàn)象。連續(xù)轉(zhuǎn)移。對容易褐變的

28、材料可每間隔12-24h的培養(yǎng)后，再轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。3、 植物原生質(zhì)體（細(xì)胞、組織、器官）培養(yǎng)的分類及類型、應(yīng)用部位等基本概念。答：（1）液體淺層培養(yǎng)（2） 平板法培養(yǎng)（3）微懸滴法培養(yǎng)（4）雙層培養(yǎng)法（5）飼養(yǎng)層培養(yǎng)4、培養(yǎng)基組成、基本用量。答：水、無機鹽、有機物、植物激素、培養(yǎng)體的支持材料、其它輔助性物質(zhì)。培養(yǎng)基的成份有：（1）無機營養(yǎng)：包括：氧(O)、碳(C)、氫(H)、氮(N)、鉀(K)、磷(P)、鎂(Mg)、硫(S)和鈣(Ca)等大量元素；鐵（Fe）、銅（Cu）、鋅（Zn）、錳（Mn）、鉬（Mo）、硼（B）、碘（I）、鈷（Co）、氯（Cl）、鈉（Na）等微量元素（2）有機營養(yǎng)：氨

29、基酸、天然提取物、維生素、糖類（3）植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：主要包括生長素類和細(xì)胞分裂素類。（4）其他：包括水、活性炭、瓊脂等。5、 培養(yǎng)條件控制、消毒及滅菌基本方法。一、填空題2、植物組織培養(yǎng)中人工控制的環(huán)境條件是指、等條件的人工控制，滿足植物材料在離體條件下正常生長和發(fā)育。5、用作植物組織培養(yǎng)的有效并常用的植物組織有：、等。6、在植物組織培養(yǎng)中，有效并常用的胚胎培養(yǎng)材料有：、 等。7、 在作植物組織培養(yǎng)中，有效并常用的細(xì)胞培養(yǎng)材料有：、等。8目前，植物組織培養(yǎng)的研究成果主要應(yīng)用于、及.9植物組織培養(yǎng)技術(shù)體系包括、等。12、 對培養(yǎng)基的滅菌通常采用和兩種滅菌方式。13、培養(yǎng)基中的無機鹽類可分為和。

30、15、培養(yǎng)基中添加氨基酸不僅能為培養(yǎng)物提供有機氮源，同時還對和、的分化起促進作用。16、培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素，其目的是促進，誘導(dǎo)、以及的產(chǎn)生。18、天然有機物質(zhì)通常富含或，因此在培養(yǎng)基中添加天然有機物質(zhì)能顯著改善培養(yǎng)材料的生長。21、離體培養(yǎng)的外植體細(xì)胞要實現(xiàn)其全能性，首先要經(jīng)歷過程使其恢復(fù)分生狀態(tài)，然后進行。22、根的培養(yǎng)材料一般來自或。離體根培養(yǎng)的方式有：、3種類型。25、植物種子培養(yǎng)是指對或種子進行離體培養(yǎng)的技術(shù)。26、植物分生組織培養(yǎng)是指對植物的分生組織進行離體培養(yǎng)技術(shù)，包括植物、等頂端分生組織或組織的培養(yǎng)，其中以培養(yǎng)的研究最為深入。27、植物細(xì)胞培養(yǎng)是指對植物器官或愈傷組織上分離出

31、的或進行培養(yǎng)，形成或的技術(shù)。28、 莖尖培養(yǎng)廣泛用在、以及等生產(chǎn)與理論研究。29人工種子包括、和3個部分。30植物營養(yǎng)繁殖的方法有、等。31、植物組織培養(yǎng)按培養(yǎng)材料不同可分為、和。32、原生質(zhì)體培養(yǎng)分為和。33、利用芽、莖段、葉片、花器等外植體，在離體培養(yǎng)條件下可誘導(dǎo)出、或、。二、名詞解3、愈傷組織：4、胚胎培養(yǎng)：5、細(xì)胞培養(yǎng)：6、人工種子：7、細(xì)胞分化：8、脫分化：9、植物花器官培養(yǎng)：10、植物分生組織培養(yǎng)：11、植物愈傷組織培養(yǎng)：12、植物細(xì)胞培養(yǎng)：二、選擇3、培養(yǎng)基中添加氮元素通常是 和 兩種。A、尿素B、硝酸銨C、氨水D、硝酸鉀5、培養(yǎng)基中添加的氨基酸時，通常的用量是。A、1-3mg/

32、LB、3-6mg/LC、6-9mg/LD、10-15mg/L6、以下不屬于生長素的是。A、NAAB、IAAC、2，4-DD、ABA9、以下不屬于生長素的是。A、NAAB、TDZC、2，4-DD、IAA10、以下不屬于細(xì)胞分裂素的是。A、TDZB、KTC、GA3D、6-BA11、以下不屬于細(xì)胞分裂素的是。A、2，4-DB、KTC、TDZD、6-BA13、在配制母液時，需要配成單獨母液的是。A、磷酸二氫鉀B、硫酸錳C、碘化鉀D、鐵鹽14、在配制母液時，需要配成單獨母液的是。A、鈣鹽B、硫酸錳C、碘化鉀D、鐵鹽17、在配制母液中，不能直接用水溶解的是。A、鈣鹽B、NAAC、碘化鉀D、IBA18、在配

33、制母液中，需先溶于少量1mol/LHCl中，再加水定溶的是。A、KTB、6-BAC、2，4-DD、IBA19、在配制母液中，需先用少量95%酒精溶解，再加水定溶的是。A、KT B、2，4-DC、赤霉素 D、6-BA21、在母液保存中，必須進行采用冰箱進冷藏的是。A、大量無素B、微量元素C、生長素D、細(xì)胞分裂素23、利用芽、莖段、葉片、花器等外植體在離體培養(yǎng)條件下培養(yǎng)后，不能誘導(dǎo)出的是。A、愈傷組織B、不定芽C、胚狀體D、完整植株25、繼代培養(yǎng)是更換新鮮培養(yǎng)基，來實現(xiàn)的繁殖。A、愈傷組織B、不定芽C、完整植株D、從生芽28、在初代培養(yǎng)中，培養(yǎng)物水浸狀、變色、壞死、莖斷面附近干枯的原因A、殺菌劑選用濃度過低B、殺菌劑選用