氨基柱的使用維護(hù)保養(yǎng)

1、氨基柱的使用維護(hù)保養(yǎng)氨基柱就是同時(shí)可以用于正相條件與反相條件的這一點(diǎn)很多用戶都已經(jīng)知道 ;但就是要注意到的就是 :正相溶劑與反相溶劑往往就是不互溶的 ,對(duì)這一點(diǎn)的忽略可能會(huì)帶給使用者一些麻煩。對(duì)于新購(gòu)買到的柱子,首先請(qǐng)注意打開分析測(cè)試說(shuō)明書,了解柱子的保存溶劑。 如果保存溶劑與您將要使用的流動(dòng)相極性不同不會(huì)互溶,請(qǐng)先用異丙醇過(guò)渡。過(guò)渡過(guò)程中注意因異丙醇粘度較大 ,會(huì)導(dǎo)致柱壓很高,適當(dāng)調(diào)低流速即可。如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動(dòng)相之前 ,先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過(guò)渡 ,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。柱效檢測(cè) :我用于判斷一個(gè)用戶就是否有經(jīng)驗(yàn)的指標(biāo)之一 ,就是用戶就是

2、否習(xí)慣配制一些柱效檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液。說(shuō)到柱效檢測(cè) ,我可以向大家提供一個(gè)方法 ,而且很通用 ,您也可以用同樣的標(biāo)準(zhǔn)溶液與流動(dòng)相來(lái)檢測(cè)硅膠柱與氰基柱。流動(dòng)相 :10乙酸乙酯 90正己烷流速 1、 0標(biāo)準(zhǔn)溶液 :乙苯 (如乙苯找不動(dòng)就用甲苯代替唄)苯甲酸甲酯檢測(cè)波長(zhǎng)254nm這個(gè)方法特別適用于新購(gòu)柱子(新購(gòu)柱子往往保存在正相溶劑中)時(shí)即進(jìn)行檢測(cè),如有問(wèn)題 ,可及時(shí)與供應(yīng)商溝通。也適合在柱子在準(zhǔn)備放置相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間之前進(jìn)行充分清洗后進(jìn)行檢測(cè)作為記錄留檔。 在平常的使用過(guò)程中,如果分析物就是固定重復(fù)的,我們當(dāng)然可以從對(duì)分析物的分離分析情況來(lái)作出判斷;但如果分析物與分析條件不同時(shí),定期檢測(cè)柱效可以避免柱效下

3、降導(dǎo)致分離不佳再分析查找原因這樣浪費(fèi)人力物力的過(guò)程。不過(guò)特別要注意的就是,當(dāng)氨基柱(或氰基柱 )在反相條件中使用時(shí),如用該條件檢測(cè),請(qǐng)注意流動(dòng)相的換相過(guò)渡氨基柱的使用 :需要注意的就是,氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比c18,c8 柱的鍵合官能團(tuán)c18,c8 要容易水解 ,所以首先要做好其使用壽命稍遜的心理準(zhǔn)備,特別就是當(dāng)您的使用條件就是反相條件下時(shí)。反相條件下使用時(shí),要特別注意控制ph 值范圍 ,ph 值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。所以 ,在使用后以及準(zhǔn)備長(zhǎng)時(shí)間放置該柱時(shí),必要的清洗與將氨基柱保存于純的有機(jī)溶劑中就是很好的保養(yǎng)措施。有一種情況就是,當(dāng)使用

4、氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)如果汁的分析時(shí)(分析其中的糖份),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。這時(shí) ,kromasil 專家所給的建議就是 :用 5-10 倍的柱體積的含0、5-1、 0 nh3 的 50-50 乙腈 -水溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0、 1。氨基柱的清洗 :簡(jiǎn)單說(shuō)起來(lái),正相條件下使用的氨基柱您就參照硅膠柱的清洗方法; 反相條件下使用的氨基柱您就參照c18 的清洗方法。平時(shí)在正相條件下使用:首

5、先用 50 倍柱體積的異丙醇清洗,因異丙醇粘度較大可適當(dāng)放低流速;之后 ,用 50 倍的甲醇清洗 ;之后 ,用異丙醇過(guò)渡回到平常使用的正相流動(dòng)相,即可。氨基柱的使用維護(hù)保養(yǎng)平時(shí)在反相條件下使用:緩沖鹽應(yīng)及時(shí)沖洗,以及不能直接用純甲醇沖洗緩沖鹽等,屬常識(shí)就不作特別交待了。用 50 倍純甲醇沖洗 ;之后 ,用異丙醇過(guò)渡后 ,用二氯甲烷沖洗色譜柱 ;之后 ,再用異丙醇過(guò)渡回來(lái)到甲醇條件下。這些清洗方法,主要就是針對(duì)當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時(shí)的處理方法,色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等luna 氨基柱的使用方法1、氨基柱既可以正相使用,也可以反相使用,但就是要注意到的就是:正相溶劑與反

6、相溶劑往往就是不互溶的,正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中,例如luna氨基柱保存在正己烷-乙腈 (99:1)中。2、 正相使用2、 1 新柱子可直接用流動(dòng)相。推薦先用正己烷-乙腈 (99:1) 以 0、 5ml/min 的流速?zèng)_10 倍柱體積 ,再根據(jù)流動(dòng)相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速?zèng)_10 倍柱體積,最后換成流動(dòng)相。2、 2 正相使用時(shí) ,不宜分析含醛基、羰基的化合物 ,不可用于還原糖的分析底脫氣 ,并不得含有羰基化合物與過(guò)氧化物 (質(zhì)量不好的乙醚、四氫呋喃含有少量;流動(dòng)相要徹)。2、 3 任何時(shí)候更換流動(dòng)相時(shí)都要確保新流動(dòng)相與柱子原保存液可互溶。3 反相使用3、 1 先用正己烷

7、 -乙腈 (99:1) 以 0、5ml/min 的流速?zèng)_10 倍柱體積 ,再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水 (50:50) 沖柱子。3、 2 以 0、5ml/min 的流速用30 倍柱體積的ph11、 0 的氫氧化鈉 (luna) 水溶液沖柱子(注意 ph 值切不可超過(guò)3、3 配制流動(dòng)相時(shí)到 0、1。11、0),立即用水 (0、5ml/min 的流速 ,30 倍柱體積,應(yīng)各組分分別量取 ,比例較小的組分要精密量取)沖洗 ,再換成流動(dòng)相。,需調(diào) ph 值時(shí)要精密3、 4 反相條件下使用時(shí),要特別注意控制ph 值范圍動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)。最理想的,p

8、h 值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)ph 范圍在 ph 3、 0-7、 0,流3、5 如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類,建議在用分析流動(dòng)相之前的同比例流動(dòng)相過(guò)渡,這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出。,先用不含緩沖鹽3、6 有一種情況就是,當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí),酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在 ,可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議 :用 5-10 倍的柱體積的含0、5-1、0 nh3 的乙腈-水 (50:50)溶液沖洗該柱 (沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如 0、

9、1。), 之后再進(jìn)行分析這4 色譜柱的沖洗 :簡(jiǎn)單說(shuō)起來(lái) ,正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法條件下使用的氨基柱就參照 c18 的清洗方法。;反相5 色譜柱的保存5、 1 正相使用時(shí) ,將柱子沖洗干凈后,用正己烷 -乙腈 (99:1)保存。5、 2 反相使用時(shí) ,如短期不用 , 可用甲醇或乙腈保存 ; 長(zhǎng)期不用時(shí)需將甲醇依次用異丙醇、氯仿置換 ,最后用正己烷保存。6 色譜柱的再生6、1 方案 1:依次用甲醇、 異丙醇、 氯仿、正己烷、 氯仿、 異丙醇、 甲醇沖柱子 (各以 0、 5ml/min 的流速 ,20 倍柱體積 ),再換流動(dòng)相。這些清洗方法 ,主要就是針對(duì)當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸

10、附累積到填料上時(shí)的處理方法,色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等。6、2 方案 2:nh2 柱用于反相條件時(shí),nh2 鍵會(huì)水解 ,尤其就是在該柱子ph范圍以外,氨基柱的使用維護(hù)保養(yǎng)在極端酸性與堿性條件下柱壽命會(huì)下降很快,如果在這個(gè)條件下使用需要清洗一下,需要用10倍柱體積溶液沖洗,如下 :95水 /5乙腈thf 四氫呋喃95乙腈 /5水并保持 95乙腈 /5水繼續(xù)沖洗6、 3 方案 3:柱子使用一定時(shí)間后洗時(shí)依次用10 倍柱體積的下列溶液沖洗:,以低流速0、 2-0、 5ml/min 過(guò)夜沖洗。,柱效下降 ,老化 ,也可清洗一下柱子恢復(fù)柱性能, 清95水 /5乙腈thf 四氫呋喃95乙腈 /

11、5水再走流動(dòng)相即可色譜柱最基礎(chǔ)的一種分類就是根據(jù)柱填料類型分為正相柱與反相柱正相柱多以硅膠為柱填料。根據(jù)外型可分為無(wú)定型與球型兩種,另一類正相填料就是硅膠表面鍵合 cn,-nh2 等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠流動(dòng)相為非極性溶劑。反相柱主要就是以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ods) 的非極性填料。也有無(wú)定型與球型之分。常用的其她的反相填料還有鍵合c8、 c4、 c2、苯基等 ,流動(dòng)相為極性溶劑比較有意思的就是鍵合 cn,-nh2 等官能團(tuán)的一類所謂正相柱, (甚至有些的特殊填充的硅膠極性柱) 在反相條件下的使用這對(duì)于不少難以在反相柱達(dá)到分離分析目的的情況下變得非常有用、在反相條件下這些色譜柱的色譜分離規(guī)律與常規(guī)反相柱有顯著差異目前對(duì)改類色譜柱的分離規(guī)律研究極少根據(jù)本人使用經(jīng)驗(yàn)這兒以保留時(shí)間隨著有機(jī)相比例的變化為例說(shuō)明改類