實驗一、槐米中蘆丁的提取、分離和鑒定

1、實驗一 槐米中蘆丁的提取、分離和鑒定一、概述槐米系豆科植物槐樹（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清熱、涼血、止血的功效，用于治療便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，風熱目赤，痛疽瘡毒，還可用于預防中風。近年來被用作治療高血壓的輔助藥物。藥理實驗證明，槐花米具有調節(jié)毛細血管的滲透作用，抗炎作用，解痙、抗?jié)n瘍作用，影響脂質代謝，抗菌等多種生物活性?；被字兄饕悬S酮苷，皂苷、甾醇和鞣質等成分，其中蘆丁(Rutin)含量最高，達1220%。主要化學成分的結構及理化性質：蘆?。╮utin）：C27H30O163H2O，淺黃色針狀結晶，mp174178（含三分子水）；1

2、88（無水物）。難溶于冷水（1：800010000），可溶于熱水（1：180200），熱甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），熱乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；難溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于堿液。槲皮素（quercetin）：C15H10O72H2O，黃色結晶，mp313314（2分子結晶水），316（無水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；難溶于水、苯、石油醚等溶劑。二、實驗部分（一）實驗目的1、通過蘆丁的制備，掌握黃酮類化合物提取分離的原理和操作。2、掌握酸水解將蘆丁生成槲皮素的方法。3、

3、掌握蘆丁與槲皮素的鑒別方法，聚酰胺薄膜的操作方法，電子天平的使用方法。（二）實驗原理1、蘆丁的提取原理：蘆丁中含有多個酚羥基，具有酸性，故用堿提酸沉法。2、蘆丁的分離原理：蘆丁在沸水中溶解，在冷水中析出。3、蘆丁的鑒定原理：蘆丁與槲皮素分別為黃酮類化合物的苷與苷元，用Molish反應可以進行鑒別，也可以利用聚酰胺的氫鍵吸附性質進行定性分析，Rf值也應不同。（三）實驗藥材、儀器與試劑1、藥材：槐米50g(每組)。2、儀器：電爐子、不銹鋼鍋、量杯、1000ml燒杯、冰箱、濾紙、PH試紙、減壓抽濾裝置、錐形瓶、玻璃漏斗、紗布、電子天平、聚酰胺薄膜。3、試劑：0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、

4、濃鹽酸、蒸餾水、鎂粉、濃硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化鋁醇溶液、醋酸鎂乙醇液等。（四）實驗方法1、蘆丁的提?。海▔A提酸沉法）取槐米50g，加0.4%硼砂水溶液400ml至小鍋中，加熱煮沸，用石灰乳調節(jié)PH=9，加熱微沸30min，隨時補充失去的水分及控制PH值，四層紗布過濾，藥渣再重復處理一次（不用調PH值）。合并兩次濾液，用濃鹽酸調PH=3，放入冰箱中析晶。2、蘆丁的精制：（水重結晶法）（1）抽濾：用虹吸法先除去上清液，再進行抽濾，可更換濾紙。（2）精制：取全部蘆丁粗品，加入蒸餾水800ml，煮沸至全部溶解（15min），趁熱抽濾，放入冰箱析晶。3、蘆丁的水解：（酸水解法）取蘆丁1g，加

5、入2%硫酸150ml，小火加熱微沸30min，注意觀察現(xiàn)象：溶液由渾濁變澄清，逐漸析出黃色結晶，抽濾，得到槲皮素粗品。剩下的蘆丁要妥善保管，下次課還要帶來。4、鑒別反應（1）稱槲皮素重量，計算水解率。（2）薄層色譜鑒定樣品：自制蘆丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液。（每組稱取20mg）對照品：蘆丁及槲皮素對照品的1mg/ml甲醇溶液。展開劑：90%乙醇溶液顯色：噴三氯化鋁溶液，紫外光（365nm）觀察熒光。實驗結果記錄：觀察斑點顏色，記錄圖譜并計算Rf值。（3）顯色反應Molish反應：取蕓香苷及槲皮素樣品分別1ml，加入3%-萘酚溶液1滴，振搖，沿壁滴加濃硫酸1ml，觀察現(xiàn)象。鹽酸-鎂粉反應：

6、分別取樣品1ml，加入濃鹽酸2-3滴，再加入少許鎂粉，觀察現(xiàn)象。紙片反應：取一張濾紙，分別滴加樣品1滴，在上面再滴加三氯化鋁溶液1滴，觀察現(xiàn)象。（同理，再用醋酸鎂顯色）（五）注意事項1、提取時控制小火加熱，微沸即可。2、加熱完成后要放冷抽濾。3、用石灰水調節(jié)蘆丁提取溶液的PH，既可以達到堿提取蘆丁的目的，還可以除去槐米中含有的大量粘液質。但鈣離子濃度及pH值均不宜過高，否則多余的鈣能與蘆丁形成螯合物沉淀，同時黃酮母核在強堿性條件下易被破壞。4、用HCl調PH時，應注意PH不要過低，因為PH過低（PH2以下）會使蘆丁形成钅羊 鹽而使已形成的沉淀重新溶解，同時黃酮母核也會在強堿性條件下被破壞，導致收率下降。5、Molish反應中加入濃硫酸后不可振搖。6、紙片反應待溶液干燥后觀察熒光效果