Agilent1100型高效液相色譜儀操作規(guī)程PPT參考課件

1、1,Agilent 1100型高效液相色譜儀操作規(guī)程,溶劑架,在線脫氣,泵,Purge閥,自動進樣器,柱溫箱,檢測器,溶劑瓶,2,儀器各組件,泵 ：四元泵、二元泵 在線脫氣器 進樣器：自動進樣器及手動進樣器 柱溫箱 檢測器： DAD檢測器、UV檢測器,3,Agilent1100在線脫氣機,4,Agilent1100在線脫氣機工作原理,5,何時需要使用Agilent在線脫氣機,如果在低UV波長段，用最高靈敏度進行檢測 如果要求使用最佳進樣精度 如果要求保留時間重現性很高 （在0.5ml/min流速以下） 如果樣品和檢測對流動相中溶解氧敏感,6,Agilent 1100泵,7,Agilent 11

2、00四元泵工作原理,8,Agilent 1100泵頭結構,9,Agilent 1100自動進樣器結構,10,Agilent 1100自動進樣器工作原理,11,Agilent 1100柱溫箱結構,12,柱溫箱流路連接,13,開機,打開計算機,進入Windows NT 或Windows 2000 畫面,并運行Bootp Server程序（點擊左下方【Bootp Server】圖標） 打開色譜儀各組件電源，待Bootp Server里顯示已聯上各組件的信息及各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online ，圖標打開工作站?；瘜W工作站自動與1100通訊。進入的工作站畫面如下所示,14,1

3、5,排氣,將流動相放入溶劑瓶中，打開Purge 閥，依次單擊【Pump】【Set up Pump】，設Flow為2ml/min，單擊OK ，再依次單擊【Pump】【control】，選中on，單擊OK，則系統開始Purge至管路無氣泡為止，切換管路反復操作至所需管路均無氣泡。 在【control】選項中選off，關閉泵，關閉Purge 閥。單擊泵下面瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積。如圖所示。 打開10異丙醇溶液控制閥，用針筒抽吸至管路中有液體流出。調節(jié)控制閥松緊，控制流量至流出量約為每分鐘515滴,16,17,編輯分析方法,新方法建立：點擊【Method】，點擊【Edit entire m

4、ethod】或【New method】選項，進行方法編緝,18,19,在Method Comments 中加入方法的信息如方法的用途等,20,泵參數設定,在Flow 處輸入流量, 在Solvent A、B、C、D 處輸入比例，也可Insert一行”Timetable” ,編輯梯度，在Pressure Limits Max 處輸入柱子的最大耐高壓。單擊Ok進入下一畫面,21,自動進樣器參數設定,選擇合適的進樣方式 進樣體積 洗瓶位置 進樣方式：“Standard Injection”只能輸入進樣體積“Injection with Needle Wash”可以輸入進樣體積和洗瓶位置此方式針從樣品瓶

5、抽完樣品后會在洗瓶中洗針 Use injector program -可以點擊Edit 鍵進行進樣程序編輯 點擊Ok進入下一畫面,22,23,柱溫箱參數設定,在”Temperature”下面的方框內輸入所需溫度,并選中它,點擊”more”鍵,選中“Same as left”使柱溫箱的溫度左右一致 點擊ok進入下一畫面,24,25,檢測器參數設定UV,在”Wavelength”下方的空白處輸入所需的檢測波長,如254nm, 在“Peakwidth (Response time)”下方點擊下拉式三角框,選擇合適的響應時間, 如0.1min(2s) 在Timetable 中可以Insert 一行輸入

6、隨時間切換的波長 點擊ok進入下一畫面,26,27,檢測器參數設定DAD,樣品波長-一般選擇最大吸收處的波長 樣品帶寬BW一般選擇最大吸收值一半處的整個寬度 參比波長一般選擇在靠近樣品信號的無吸收或低吸收區(qū)域 參比帶寬BW至少要與樣品信號的帶寬相等許多情況下用100nm作為缺省值 Peak width Response time 其值盡可能接近要測的窄峰峰寬 選中所用的燈點擊Ok進入下一畫面,28,29,方法保存,單擊Method 菜單選中Save method as 輸入一方法名，如test 單擊Ok,30,編輯分析方法,選擇已有方法：點擊【Method】，點擊【Load method】選項

7、，選取已存的各種操作方法,31,樣品分析與采集數據,將樣品放于樣品盤中相應位置，所有的樣品均需澄清。 待儀器顯示Ready，基線平穩(wěn)，從【Run control】菜單中選擇【Run Method】，開始進樣分析。 數據處理：單擊【View】菜單，單擊【Data analysis】選項，進行數據分析。單擊【View】菜單，單擊【Method and Run control】選項，回到樣品分析界面,32,數據分析方法編輯,從File 菜單選擇Load signal 選中您的數據文件名 單擊Ok,33,積分,從Integration 中選擇“Auto integrate”,如積分結果不理想,再從菜單

8、中選擇Integration Events 選項選擇合適的Slope sensitivity Peak width Area reject Height reject 從Integration 菜單中選擇Integrate 選項則數據被積分 如積分結果不理想則修改相應的積分參數直到滿意為止 單擊左邊圖標將積分參數存入方法,34,單擊左邊圖標將積分參數存入方法,35,關機,沖洗系統：反相柱用5的甲醇水沖洗系統30分鐘，再用純甲醇沖洗系統20分鐘，然后關泵，正相柱先用合適溶劑沖洗，后用柱保存液沖洗。 退出工作站，關閉計算機。 關閉10異丙醇溶液控制閥。 關閉儀器各組件 關掉Agilent 1100

9、電源開關,36,注意事項,儀器運行時，泵頭必須用10%異丙醇水溶液虹吸沖洗，不能干涸。 注意各流動相所剩溶液的容積設定，若設定的容積低于最低限會自動停泵。 對于手動進樣器當使用緩沖溶液時要用水沖洗進樣口同時搬動進樣閥數次每次數毫升,37,注意事項,溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動相時注意保護，當發(fā)現過濾頭變臟或長菌時，不可用超聲洗滌，可用35%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌。 檢測器的燈有使用壽命限制，一般在正式進樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，分析結束，立即關燈。 使用雙泵時，A、B、C、D四相中，若所用流動相中有含鹽流動相，則A、D（進液口位于混合器下方）放置含鹽流動相，B、C（進

10、液口位于混合器上方）放置不含鹽流動相,38,泵的維護,流動相使用前必須脫氣過濾 使用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項 關機前反相色譜柱用5%的甲醇水沖洗系統30分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統20分鐘，然后關泵。正相色譜柱用適當的溶劑沖洗。 及時更換Purge Valve內的過濾芯，當打開Purge Valve時壓力高于10bar 表明過濾芯已堵,39,使用梯度比例時的注意事項,當鹽溶液與有機溶劑溶液混合時鹽溶液能與有機溶劑溶液完全混溶而不會出現沉淀。 由于在比例閥的混合點重力作用使鹽顆粒沉淀下來通常閥A接水相/鹽溶液D接有機溶劑此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中并被溶解若顛倒過來鹽可能落在有機溶劑中出現問題 當使用緩沖鹽溶液和有機溶劑時推薦將緩沖鹽通道接在A通道上有機溶劑通道直接接在A通道的上方D通