毛細管電泳原理PPT課件

1、第二章 毛細管膠束電動色譜,電解質(zhì)中加入表面活性劑(surfactant，例如SDS)，使之形成膠束（Micelle），樣品根據(jù)其疏水性(Hydrophobicity)強弱的差異，在膠束與電解質(zhì)的分配系數(shù)有所不同來進行分離 ，樣品疏水性愈強，則進入膠束的機會愈大。通常物質(zhì)進入膠束后，泳動的速度會變慢，因此疏水性愈強的物質(zhì)則愈慢出來,毛細管膠束電動色譜原理,Micellar Electrokinetic Chromatography (MEKC,七種青霉素的分離,CZE : 20mM Pi-Borate, pH 8.5,B) MEKC : 0.1 M SDS in (A) soln,膠束電動色譜

2、的特點,優(yōu)點 增加對弱極性物質(zhì)分離的分離度 在中藥分析、天然產(chǎn)物分析、農(nóng)藥分析中經(jīng)常使用,缺點 穩(wěn)定性不佳，達到好的重復性比較困難,第三章 毛細管凝膠電泳,毛細管內(nèi)先填充凝膠(例如polyacrylamide或cellulose)，此時凝膠會在毛細管內(nèi)形成分子篩，樣品依分子量的大小在毛細管內(nèi)移動速度不同而進行分離。 主要用于核酸片斷及蛋白分子量分析,毛細管凝膠電泳,CE雙鏈及單鏈核酸分析,45-寡核苷酸質(zhì)控,CE-SDS蛋白分子量分析,第四章 毛細管等電聚焦,第五章 親和毛細管電泳-分離條件基于CZE,當在CZE樣品或緩沖液中引入抗原或抗體時，便可以用于研究和分析抗體或抗原，也可以利用這種方法

3、對電泳峰進行特異性定性。顯然除抗原與抗體的選擇需要應用生化知識外，其他方面的選擇與CZE等相同。 用于研究 分子間相互作用測定，分子構(gòu)型變化 特定物質(zhì)檢測 活性物質(zhì)篩選,ACE測定分子間結(jié)合常數(shù)與解離速率,JAK2與SH2-B之間的相互作用研究,CE藥物篩選,ACE用于相互作用篩選,適體Aptamer類似于抗體，但可以體外合成，結(jié)合常數(shù)比抗體更高，有廣泛的藥物篩選和臨床診斷應用潛力 目前已有以下的一些蛋白的aptamer是采用CE方法篩選得到的 IgE HIV type 1 reverse transcriptase Thrombin Anti-thrombin III Taq DNA pol

4、ymerase,ACE用于相互作用篩選,傳統(tǒng)篩選方法如親和色譜或者CEC篩選一個Aptamer需要4-6周 而CE只需要幾天就可以了，大大提高了篩選速度 -MicroScale Bioseparations 2006,第六章 檢測器選擇,小分子檢測 大分子檢測,CE檢測器種類及性能,小分子檢測,有紫外吸收 首先選擇二極管陣列檢測器或紫外檢測器 無紫外吸收 可以衍生化的，可以采用自外衍生的方法再用紫外檢測器檢測，如氨基酸、還原性糖等 不可以衍生化的，可采用間接紫外法用紫外檢測器檢測，也可以嘗試電化學檢測器 有熒光或需要高靈敏度檢測的可采用LIF檢測器 需要測定結(jié)構(gòu)或者難以用光學檢測器檢測的，可以

5、考慮質(zhì)譜檢測,大分子檢測,蛋白、核酸 可以首先選擇紫外檢測器 如果需要高靈敏度檢測可以采用柱前或者柱上衍生的方法標記熒光，然后用LIF檢測 如果需要特異性檢測，可使用特異性熒光探針，標記后再LIF檢測 需要測定分子量或氨基酸序列，可采用質(zhì)譜檢測 多糖 含量較高的多糖可以采用末端吸收法以紫外檢測器檢測 含量較低的還原性多糖可用衍生試劑標記后以LIF、UV的方式檢測,第七章 分離條件選擇流程,分離條件的選擇是毛細管電泳中最重要但也是最難之處。不同的專業(yè)研究工作者可能會有各自不同的選擇策略和流程，我們提出如下九步選擇流程，僅供參考： 第一步，盡可能多地了解分離樣品的類型、來源、組成及其性質(zhì)； 第二步，根據(jù)樣品的可能性質(zhì)和來源，選擇分離模式，若無樣品信息可先選CZE,條件選擇流程,第三步，根據(jù)樣品性質(zhì)確定檢測方法，一般先選直接紫外吸收； 第四步，確定樣品處理方式，包括衍生方案以及離心過濾除蛋白等； 第五步，根據(jù)樣品解離常數(shù)計算最佳pH，或利用75mID毛細管和磷酸緩沖體系確定pH范圍,條件選擇流程,第六步，根據(jù)所需pH構(gòu)建緩沖體系，包括進