磺丁基β-環(huán)糊精研究綜述

1、磺丁基-環(huán)糊精研究綜述一、 產(chǎn)品基本信息1、歷史背景：SBE-CD（商品名Captisol）是美國20世紀(jì)90年代由美國Cydex公司開發(fā)成功的陰離子、高水溶性的-CD衍生物，能很好地與藥物分子包合形成非共價(jià)復(fù)合物，從而提高藥物的穩(wěn)定性、水溶性、安全性，降低腎毒性、緩和藥物溶血性，控制藥物釋放速率，掩蓋不良?xì)馕兜取Ｅc-CD相比，其具有更好的水溶性，且溶血作用小、腎毒性低，是一種應(yīng)用前景非常廣闊的新型藥用輔料。2、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：磺丁基-環(huán)糊精SBE-CD是-環(huán)糊精與1，4-丁烷磺內(nèi)酯發(fā)生取代的產(chǎn)物，取代反應(yīng)可發(fā)生在-CD葡萄糖單元2，3，6碳羥基位置上，由于-CD是由7個(gè)吡喃葡萄糖通過-（1、4）糖

2、苷鍵連接而成，有21個(gè)可能發(fā)生取代反應(yīng)的位點(diǎn)，理論上可以到的取代度為21的-環(huán)糊精衍生物（7個(gè)伯羥基，6-OH，14個(gè)仲羥基2，3-OH），但由于立體位阻既反應(yīng)條件的限制，取代度一般不超過10%，因此通過該反應(yīng)所得到的產(chǎn)物是非常復(fù)雜的混合物。SBE-CD相對分子量和取代度關(guān)系為：MW=1135.01+CDs*157.09,其中CDs為取代度。常見SBE-CD取代度及分子量如下：代號SBE4-CDSBE7-CD取代度47分子量170422411347CAS.NO.25167-62-8194615-04-8182410-00-03、產(chǎn)品基本信息通用名磺丁基醚-環(huán)糊精CDESulfobutyleth

3、er-Cyclodextrin中文同義詞:磺丁基-環(huán)糊精SBE-B-CD環(huán)糊精，磺丁基醚-環(huán)糊精，磺丁基醚倍他環(huán)糊精，硫代丁基醚-環(huán)糊精鈉，硫代丁基醚倍他環(huán)糊精鈉，廿二碳六烯酸磺丁基-環(huán)糊精鈉鹽USP藥典英文名稱Betadex Sulfobutyl Ether Sodium英文同義詞:Docosahexaenoic Acids，Docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acidCAS號:25167-62-8，182410-00-0(鈉鹽) ,194615-04-8分子式C42H70-nO35（C4H8SO3Na）n分子量2-O-磺丁基-環(huán)糊精6-O-磺丁基-環(huán)糊精2,3,6

4、-三-O-磺丁基-環(huán)糊精n=4n=6.5n=7C44H79O33SC44H79O33SC56H97O33S3121712171393170421632241結(jié)構(gòu)式1結(jié)構(gòu)式2功能與應(yīng)用作為賦形劑，主要用于含氮類藥物中；對于含氮類藥物具有特殊的親和力和包合性。給藥途徑注射藥、口服藥、鼻部用藥、眼部用藥，對于含氮類藥物具有特殊的親和力和包合性。配伍禁忌水溶液中，環(huán)糊精的存在可能導(dǎo)致有些抗菌防腐劑的活性降低。常用量及最用量最大用量為66.67kg/d。放射性和口服、靜脈注射的最大維持劑量為320mg/kg/d二、 理化性質(zhì)本品為白色或類白色無固定型粉末，無臭，微甜。100ml水中溶解度大于50，30%

5、水溶液PH值為5.46.8。其他溶劑中溶解度信息如下：溶劑SBE-CD加入量（g）溶劑體積（ml）溶解結(jié)果結(jié)果判定水0.10.1DVery solublepH6.8的磷酸緩沖液0.10.1DVery solublepH7.4的磷酸緩沖液0.10.1DVery soluble0.1mol/L HCl0.10.1DVery soluble0.1mol/L NaOH0.10.1DVery soluble甲醇0.0110NVery lightly99.9Dsoluble乙腈0.01100NScarcely soluble丙酮0.01100NScarcely soluble三、 制備工藝（一）工藝路線1

6、1、工藝原理2、工藝說明：以-環(huán)糊精和1,4-磺丁內(nèi)酯為原料，通過向堿性水溶液中引入適量有機(jī)溶劑，增加了1,4-磺丁內(nèi)酯的溶解度，提高了磺丁基醚-環(huán)糊精的合成收率;所得產(chǎn)品溶液經(jīng)過超聲透析，活性炭脫色，冷凍干燥等操作得到磺丁基醚-環(huán)糊精粉末產(chǎn)品。（二）工藝路線2-磺丁內(nèi)酯的制備1、工藝原理2、工藝說明將76mL干燥處理的四氫呋喃(THF)置于250mL燒瓶中，加入50mgZnCl2,攪拌均勻后，將65g重蒸處理的乙酰氯慢慢加入,加熱回流反應(yīng)1.5h后，減壓蒸餾(5.36.0kPa)，收取沸點(diǎn)98112的餾分，得到乙酸-氯丁酯103.6g；(2量取60mL(65g,=1.0805g/cm3)乙酸

7、-氯丁酯置于500mL的三頸瓶中，加入300mLH2O，再加入100g的Na2SO3，攪拌回流10h，然后將大部分的H2O減壓蒸除,剩余部分加入270mL甲醇，攪拌回流，并通入過量的HCl氣體，反應(yīng)持續(xù)8h后，使反應(yīng)液冷卻至室溫,經(jīng)過濾濃縮后減壓蒸餾(2.73.3kPa)，收集152165的餾分，得到43g暗紅色產(chǎn)物磺丁內(nèi)酯，產(chǎn)率73%。（三）工藝路線3-多取代磺丁基-環(huán)糊精(SBE(4)-CD)的合成稱取5g-CD(4.4mmol)置于50mL燒瓶中，加入10mL200g/LNaOH溶液，攪拌加熱至溶解，量取2.3mL(3.1g，=1.331g/cm3，22.5mmol)磺丁內(nèi)酯，慢慢加到反

8、應(yīng)液中，同時(shí)激烈攪拌,數(shù)小時(shí)后，反應(yīng)物成均相，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，加入20mLH2O稀釋，用HCl中和，除水，真空干燥，得微黃色物質(zhì)，加少量水溶解，過葡聚糖凝膠柱(G-25)除鹽純化，得到4.3g微黃色產(chǎn)物。比旋度D20=+325(2g/L水溶液)。元素分析:實(shí)測值wC32.80%，wH8.68%,wS5.77%，wC/wS=5.68，計(jì)算值(取代度為3.8)，wC/wS=5.64。（四）工藝路線4-單取代磺丁基-環(huán)糊精(SBE(1)-CD)的合成合成步驟同上，10g-CD(8.8mmol)，25mL250g/LNaOH溶液加熱攪拌至溶解，慢慢加入1.8mL(2.4g，=1.331g/cm3

9、，17.6mmol)磺丁內(nèi)酯，同時(shí)激烈攪拌，數(shù)小時(shí)后,反應(yīng)物呈均相，停止反應(yīng)，冷卻至室溫，加20mLH2O稀釋，用HCl中和，過濾除去未反應(yīng)的-CD，濾液濃縮，過葡聚糖凝膠柱(G-25)除鹽純化，得0.9g微黃色產(chǎn)物。D20=+580(2g/L水溶液)。元素分析:實(shí)測值wC36.71%，wH6.22%，wS2.77%，wC/wS=13.25，計(jì)算值(取代度為1.3)wC/wS=13.62四、質(zhì)量研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(一)質(zhì)量控制方法研究第一部分SBE-7-CD單一取代組分的分離和制備 目的：分離、純化和制備SB-7-CD單一取代組分，確證其取代度。 方法：采用DEAE SephadexA-25葡聚糖

10、凝膠為填料，玻璃砂芯色譜柱（29cm4cm）為填裝柱，自制分離柱，通過硫酸鈉濃度梯度（01.4mol/L）洗脫對SBE-7-CD進(jìn)行分離，得到單一取代組分。采用SephadexG-25葡聚糖凝膠為填料，玻璃砂芯色譜柱（40cm18mm）為填裝柱，自制脫鹽柱，通過去離子水的洗脫將各單一取代組分脫鹽純化。分別采用核磁共振波譜法和質(zhì)譜法對得到的各單一取代組分進(jìn)行取代度的測定。結(jié)果：共得到6種SBE_7-CD單一取代組分，其取代度分別為3、4、5、6、7、8。核磁共振波譜法和質(zhì)譜法取代度檢測結(jié)果一致。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功分離、純化和制備了6種SBE-7-CD單一取代組分，為SBE_7-CD的組分分析和平

11、均取代度的測定奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。 第二部分SBE7-CD的高效毛細(xì)管電泳-間接紫外法組分分析和平均取代度測定 目的：建立SBE-7-CD的組分分析和平均取代度測定方法。 方法：采用高效毛細(xì)管電泳-間接紫外檢測分析方法。未涂層熔融石英毛細(xì)管柱（60.2cm50m50cm）；運(yùn)行緩沖液30mmol/L苯甲酸-Tris緩沖液（pH7.5）；溫度25；壓力進(jìn)樣6s（0.5psi）；分離電壓30kV；檢測波長214nm，間接檢測模式。平均取代度的計(jì)算：通過比較校正峰面積百分比對各單取代組分進(jìn)行組分分析。采用所建立的方法對11批供試品進(jìn)行了測定，并與美國藥典論壇（PharmacopoeiaForum，PF）

12、規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。 結(jié)果：SBE-7-CD中各組分的分離度符合要求，峰形和基線良好；該方法精密度和重復(fù)性良好，供試品溶液在8h內(nèi)基本穩(wěn)定；SB-7-CD中檢測到取代度分別為211的10種單取代組分，11批SBE-7-CD供試品的平均取代度為6.76.9，符合PF中的規(guī)定，但其組分分析結(jié)果與PF的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定有一定的差異。 結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、快速、分析成本低，能夠評價(jià)不同批次供試品的差異，為SBE-7-CD合成工藝的改進(jìn)提供了幫助。 第三部分 毛細(xì)管氣相色譜法測定SBE-7-CD中雜質(zhì)1,4-丁烷磺內(nèi)酯 目的：建立SBE-7-CD中的雜質(zhì)1,4-BS的測定方法。 方法：采用氣相色譜法。色譜柱：DB

13、1701（30m0.32mm0.25m，Agilent Technologies）；氫火焰離子化檢測器；載氣為氮?dú)猓兌?9.999%），燃?xì)鉃闅錃猓細(xì)鉃榭諝?；載氣流速30ml/min；進(jìn)樣口溫度為200；柱溫為程序升溫：初始溫度100，以10/min的升溫速率升到200，恒溫0min，再以30/min的升溫速率升到260，恒溫3min；檢測器溫度為270；柱前壓為9.9psi；分流比為10:1；進(jìn)樣1l。采用二乙砜作為內(nèi)標(biāo)。供試品處理：取SBE_7-CD供試品約0.2g，精密稱定，置10ml離心管中，精密加入水1ml，渦旋溶解，再精密加入二氯甲烷1ml，渦旋1min，靜置分層，取有機(jī)相，

14、進(jìn)樣分析，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。結(jié)果：二乙砜與1,4-BS的保留時(shí)間分別為6.131min和8.615min，分離度遠(yuǎn)大于1.5；1,4-BS的檢測限為0.1126ng，定量限為0.2599ng；1,4-BS在2.984g/ml8.952g/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9989）；儀器精密度（n=9）的RSD為4.7%；高、中、低三種濃度的加樣回收率分別為101.5%、99.3%、100.3%，精密度分別為1.6%、1.2%、1.2%；1,4-BS高、中、低三種濃度的平均萃取率分別為68.7%、68.4%、70.0%，RSD分別為15.2%、23.5%、17.4%；二乙砜高、中、低三種濃度

15、的平均萃取率分別為56.1%、57.7%、52.8%，RSD分別為18.8%、24.8%、13.9%。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)所建立的方法簡單、快速、準(zhǔn)確，靈敏度可滿足檢測要求，避免了PF規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)加入法的繁瑣計(jì)算，可作為SBE-7-CD中的雜質(zhì)1,4-BS的有效檢測方法。 第四部分 高效液相離子對色譜-液質(zhì)聯(lián)用同時(shí)測定SBE-7-CD中雜質(zhì)4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醚鈉 目的：建立SBE-7-CD中的雜質(zhì)4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醚鈉的測定方法。方法：采用高效液相離子對色譜-液質(zhì)聯(lián)用法。色譜柱：ODS-SPC18(4.6250mm，5m，GL Sciences Inc. Inertsil)，柱溫為

16、30；流動(dòng)相：甲醇-10mmol/L正戊胺水溶液（pH5.45）（30:70）；流速1.0ml/min，進(jìn)樣量10l。離子源：電噴霧離子（ESI）源；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式；負(fù)離子監(jiān)測模式。4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醚鈉的監(jiān)測離子對分別為m/z153.0/79.8和m/z289.0/152.9。 結(jié)果：4-羥基丁磺酸鈉與二磺烷基化醚鈉的保留時(shí)間分別為3.41min和4.24min，能夠完全分離；4-羥基丁磺酸鈉的檢測限為0.005294ng，定量限為0.01018ng，定量限的回收率在101.9%108.8%之間，RSD為3.4%；二磺烷基化醚鈉的檢測限為0.02054ng，定量

17、限為0.03950ng，定量限的回收率在97.3%107.8%之間，RSD為4.0%；4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醚鈉分別在1.018ng/ml3.583ng/ml和3.950ng/ml13.90ng/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r分別為0.9997和0.9996；方法精密度（n=6）的RSD不大于3.8%；加樣回收率（n=6）為95.4%96.2%，RSD不大于4.2%；儀器精密度（n=6）的RSD不大于3.5%。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，是一種新的4-羥基丁磺酸鈉和二磺烷基化醚鈉的檢測方法，同時(shí)也為其他烷基磺酸鈉鹽化合物的分析提供了參考。第五部分 高效液相凝膠色譜-示差折光檢測法測定SB

18、E-7-CD的含量 目的：建立SBE-7-CD的含量測定方法。 方法：采用高效液相色譜法。Phenomenex PolySep-GFC-P3000凝膠柱，柱溫35；示差折光檢測器，檢測溫度35；流動(dòng)相：乙腈-0.1mol/L硝酸鉀水溶液（35:65），流速1.0ml/min；進(jìn)樣量10l。 結(jié)果：SBE_7-CD的保留時(shí)間為6.8min，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均不小于1.94；方法的檢測限為0.32g，定量限為0.48g；SBE-7-CD在0.4985mg/ml1.495mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.9998）；方法精密度（n=6）的RSD為1.4%；平均回收率（n=6）的平均值為9

19、8.0%，RSD為1.3%；6批供試品的含量均在95.8%99.3%之間。 結(jié)論：該方法準(zhǔn)確度和重復(fù)性良好，適合SBE-7-CD的含量測定，為SBE_7-CD質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立奠定了基礎(chǔ)。（二）離子色譜法測定磺丁基醚-環(huán)糊精中4-羥基丁磺酸目的:建立磺丁基醚-環(huán)糊精中4-羥基丁磺酸的離子色譜檢測方法。方法:采用IonPac AS23陰離子型交換柱(250mm4mm)為分析柱，IonPac AG23(50mm4mm)為保護(hù)柱，7mmol.L-1NaHCO3水溶液為淋洗液，流速為1.0 mL.min-1,以電導(dǎo)檢測器檢測。結(jié)果:在建立的色譜條件下，磺丁基醚-環(huán)糊精樣品中4-羥基丁磺酸與其他雜質(zhì)離子實(shí)現(xiàn)

20、基線分離，4-羥基丁磺酸在220mg.L-1范圍內(nèi)線性良好(r=0.9998),平均回收率為100.2%(RSD=1.3%,n=9)，檢測限與定量限分別為2和5ng。結(jié)論:該方法操作簡便,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，適用于磺丁基醚-環(huán)糊精中4-羥基丁磺酸的限量檢查。(三) 離子色譜法測定磺丁基倍他環(huán)糊精中羥基丁烷磺酸鈉采用離子色譜法，以陰離子分析柱為分離手段，采用電導(dǎo)檢測器，洗脫液為碳酸鈉碳酸氫鈉系統(tǒng)或者碳酸鈉（鉀）氫氧化鈉（鉀）系統(tǒng)，以此來解決磺丁基倍他環(huán)糊精中羥基丁烷磺酸（鈉）的限度檢測問題。步驟配制適當(dāng)濃度的洗脫液，洗脫液是碳酸鈉碳酸氫鈉系統(tǒng)或者碳酸鈉（鉀）氫氧化鈉（鉀）系統(tǒng)；配制適當(dāng)濃度的磺丁基倍

21、他環(huán)糊精樣品溶液和羥基丁烷磺酸（鈉）對照品溶液；離子色譜采用陰離子色譜柱、電導(dǎo)檢測器，樣品溶液和對照品溶液分別進(jìn)樣檢測，樣品溶液中羥基丁烷磺酸（鈉）的峰面積低于對照品峰面積為樣品合格。本檢測方法靈敏，樣品用量少、重現(xiàn)性高、結(jié)果可靠，可對磺丁基倍他環(huán)糊精進(jìn)行質(zhì)量控制和檢驗(yàn)，從而提高產(chǎn)品的品質(zhì)。（四）氣相色譜法檢測磺丁基倍他環(huán)糊精中1,4-丁烷基磺酸內(nèi)酯方法:.樣品的前處理-1，將磺丁基倍他環(huán)糊精樣品用水溶解，配制成樣品的水溶液；.樣品的前處理-2，采用有機(jī)溶劑對樣品水溶液進(jìn)行液液萃取，合并有機(jī)相萃取液，濃縮到適當(dāng)體積，得到待測樣品溶液；.對照品溶液的配制，將1，4-丁烷基磺酸內(nèi)酯對照品用有機(jī)溶劑

22、溶解，配制成對照品溶液，所用有機(jī)溶劑與步驟的有機(jī)溶劑相同；.分別將待測樣品溶液和對照品溶液注入氣相色譜儀，根據(jù)結(jié)果，計(jì)算得樣品中1，4-丁烷基磺酸內(nèi)酯的含量。本檢測方法靈敏、重現(xiàn)性高、結(jié)果可靠，可對磺丁基倍他環(huán)糊精中的1，4-丁烷基磺酸內(nèi)酯進(jìn)行檢驗(yàn)和質(zhì)量控制，從而保證產(chǎn)品的質(zhì)量。（五）高效液相色譜法測定磺丁基-環(huán)糊精中的-環(huán)糊精殘留含量方法:采用Waters XTerraMs-C18(4.6 mm250 mm,5m)柱；流動(dòng)相:甲醇-水(892)；檢測器:示差折光率檢測器；流速:0.8 mLmin-1；柱溫:25。結(jié)果:在所選定的色譜條件下,磺丁基-環(huán)糊精與-環(huán)糊精能分離完全；-環(huán)糊精在0.1

23、1.6 mgmL-1內(nèi)，峰面積與濃度線性關(guān)系良好，r=0.9999；最低檢測限為2g。結(jié)論:方法簡便，準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可用于磺丁基-環(huán)糊精中的-環(huán)糊精檢測及含量測定質(zhì)量控制。（六）質(zhì)量指標(biāo)序號檢驗(yàn)項(xiàng)目方法限度1外觀白色粉末,無嗅,微甜2鑒別AIR符合規(guī)定BHPLC符合規(guī)定C取代度符合規(guī)定D鈉鹽符合規(guī)定3檢查3-1PH4.06.83-2-環(huán)糊精離子色譜法或HPLC0.1%3-31,4-丁烷基磺酸內(nèi)酯GC毛細(xì)管氣相色譜法0.5ppm3-4氯化鈉離子色譜法0.2%羥基丁烷磺酸鈉離子色譜法0.09%二磺烷基化醚鈉離子色譜法0.05%3-5溶液澄清度符合規(guī)定3-6取代度毛細(xì)管電泳法高效毛細(xì)管電泳-間接紫

24、外法6.26.93-7干燥失重10.0%3-8灼燒殘?jiān)?0%3-9重金屬5ppm3-10砷鹽4ppm3-11氯化物0.02%3-12細(xì)菌總數(shù)（個(gè)/g）1000霉菌總數(shù)（個(gè)/g）100致病菌不得檢出4含量高效液相凝膠色譜-示差折光檢測法95.0105%高效液相離子對色譜-液質(zhì)聯(lián)用高效毛細(xì)管電泳-間接紫外法（七）美國藥典USP35分析方法Betadex Sulfobutyl Ether Sodium磺丁基醚-環(huán)糊精鈉C42H70-nO35（C4H8SO3Na）n 分子量2163，當(dāng)n=6.5磺丁基醚環(huán)糊精鈉；磺丁基醚環(huán)糊精硫酸鈉182410-00-0。定義磺丁基醚環(huán)糊精鈉是由環(huán)糊精和1,4-丁烷磺

25、內(nèi)酯在堿性條件下制備而成。環(huán)糊精的取代度應(yīng)不小于6.2和不高于6.9。它包含磺丁基醚-環(huán)糊精鈉C42H70-nO35（C4H8SO3Na）n按無水物計(jì)算應(yīng)不小于95.0和不高于105.0。鑒別A.紅外吸收B在含量測定條件下，樣品溶液的主峰的保留時(shí)間應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)溶液一致。C.它滿足了測試平均取代度的要求。D.鑒別試驗(yàn)，鈉含量測定程序流動(dòng)相：乙腈和0.1M硝酸鉀溶液（1：4）標(biāo)準(zhǔn)溶液：10mg/ml的USP磺丁基醚-環(huán)糊精鈉RS樣品溶液：10mg/ml的磺丁基醚-環(huán)糊精鈉色譜系統(tǒng)（見色譜，系統(tǒng)適用性。）模式：LC檢測器：折射率檢測器溫度：352列：7.8mm30cm的分析柱;填料L37。 注-沖洗柱，

26、用乙腈和水的溶液（1：9）在完成運(yùn)行的系列 流速：1.0ml/min進(jìn)樣量：20l系統(tǒng)適用性示例：適用性要求標(biāo)準(zhǔn)的解決方案相對標(biāo)準(zhǔn)偏差：不高于2.0分析樣本：標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液計(jì)算磺丁基醚-環(huán)糊精鈉的比例，C42H70-nO35（C4H8SO3Na）n的百分比部分磺丁基醚-環(huán)糊精鈉采取：結(jié)果=（RU/ RS）（CS/ CU）100RU=磺丁基醚-環(huán)糊精鈉的樣品溶液峰值響應(yīng)RS =標(biāo)準(zhǔn)溶液的磺丁基醚-環(huán)糊精鈉峰值響應(yīng)CS=USP對照品標(biāo)準(zhǔn)溶液中磺丁基醚-環(huán)糊精鈉濃度RS（mg/ml）CU=樣品溶液中磺丁基醚-環(huán)糊精鈉濃度（mg/ml）驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：基于無水95.0-105.0雜質(zhì)檢查-重金屬：方法I

27、I：不高于5 PPM-環(huán)糊精（BETADEX）溶液A：25 mMol的氫氧化鈉溶液B：250mMol的氫氧化鈉和1M硝酸鉀流動(dòng)相：見表1。時(shí)間A(%)B(%)010004100050100100100111000201000標(biāo)準(zhǔn)溶液：USP -環(huán)糊精的2g/mlRS樣品溶液：磺丁基醚-環(huán)糊精鈉2mg/ml色譜系統(tǒng)（見色譜，系統(tǒng)適用性和離子色譜。）模式：IC檢測器：脈沖安培（金工作電極和銀參考電極電化學(xué)電池）柱保護(hù)柱：4.0毫米5厘米的陰離子交換;包裝L61分析柱：4.0毫米25厘米陰離子交換;包裝L61柱溫度：502流量：1.0ml/分鐘注射量：20L波形脈沖安培檢測器：見表2。時(shí)間電壓（V）

28、0.000.10.30整合開始0.500.10.5整合結(jié)束0.510.60.590.60.60-0.60.65-0.6系統(tǒng)適用性示例：標(biāo)準(zhǔn)溶液適用性要求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差：不大于5.0分析樣本：標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液計(jì)算的-環(huán)糊精在磺丁基醚-環(huán)糊精鈉中所占的百分比：結(jié)果=（RU/ RS）（CS/ CU）F100RU=測試環(huán)糊精的樣品溶液峰值響應(yīng)RS =測試環(huán)糊精標(biāo)準(zhǔn)溶液峰值響應(yīng)CS=在標(biāo)準(zhǔn)溶液USP -環(huán)糊精RS濃度（g/ml）CU=在樣品溶液磺丁基醚-環(huán)糊精鈉濃度（mg/ml）F =轉(zhuǎn)換系數(shù)（10-3mg/g）驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：不大于0.1-1,4-丁烷磺內(nèi)酯內(nèi)標(biāo)溶液：0.25g/ml二乙砜標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液A：0

29、.5g/ml的1,4-丁烷磺內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液B：1.0g/ml的1,4-丁烷磺內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液C：2.0g/ml的1,4-丁烷磺內(nèi)酯樣品原液：磺丁基醚-環(huán)糊精鈉的內(nèi)標(biāo)溶液250mg/ml空白溶液和樣品溶液A，B，C，D遵循表3放置的內(nèi)標(biāo)溶液，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，樣品原液，水，或二氯甲烷的數(shù)量在各玻璃試管用塞子。 注-A 10ml試管是合適的?；旌显跍u流混合器上的每個(gè)試管30秒，并允許它靜置至少5分鐘，或直至相完全分離。萃取有機(jī)相到GC小瓶中，并密封。 注-小心翼翼拿水相的最低量可能加入1,4-丁磺內(nèi)酯批量樣品溶液A，B，C和D是0.5，1.0，2.0和0g，分別。遵循表3放置的內(nèi)標(biāo)溶液，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)

30、儲備溶液，樣品原液，水，或二氯甲烷的數(shù)量在各玻璃試管用塞子。注-A螺旋蓋，10ml試管是合適的。在渦流混合器上混合每個(gè)試管30秒，并靜置至少5分鐘，或直至相完全分離。萃取有機(jī)相到GC小瓶中，并密封。 注-盡可能小心翼翼使水相為最低量分別加入1,4-丁烷磺內(nèi)酯樣品溶液A，B，C和D是0.5，1.0，2.0和0g。樣品名稱溶液1添加（ml）溶液2添加（ml）加入二氯甲烷（ml）空白溶液內(nèi)標(biāo)溶液，4.0水，1.01.0樣品溶液A樣品原液，4.0標(biāo)準(zhǔn)儲備液A，1.01.0樣品溶液B樣品原液，4.0標(biāo)準(zhǔn)儲備液B，1.01.0樣品溶液C樣品原液，4.0標(biāo)準(zhǔn)儲備液C，1.01.0樣品溶液D樣品原液，4.0水

31、，1.01.0注：使用前立即準(zhǔn)備。色譜系統(tǒng)（見色譜，系統(tǒng)適用性。）模式：GC檢測器：氫火焰離子化柱：0.32mm25m熔融石英毛細(xì)管柱;的0.5m的G46相涂層溫度檢測器：270注入口：200柱：溫度方案見表4。初始溫度（）升溫（/min）最終溫度（）保持時(shí)間（min）10010200-200352705載氣：氦氣，入口壓力一般在12psi進(jìn)樣量：1.0L進(jìn)樣方式：不分流注入0.5min，然后以50ml/min分流。 注意-建議使用合適的不分流進(jìn)樣襯管。系統(tǒng)適用性樣品：樣品溶液B注-二乙基砜和1,4-丁烷磺內(nèi)酯的相對保留時(shí)間分別為0.7和1.0。適用性要求相對標(biāo)準(zhǔn)偏差：不大于10.0分析樣品：

32、空白溶液，試樣溶液A、B、C和D較正的1,4-丁烷磺內(nèi)酯的峰響應(yīng)值與樣品溶液A，B，C或D中二乙基砜峰響應(yīng)值的比值減去空白溶液中1,4-丁烷磺內(nèi)酯與乙基砜比值。以試樣溶液A，B，C或D中1,4-丁烷磺內(nèi)酯校正峰響應(yīng)值比二乙砜的比值，對所添加的1,4-丁烷磺內(nèi)酯量（g）。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線和軸線的交點(diǎn)與原點(diǎn)之間的距離代表1,4-丁烷磺內(nèi)酯的量，計(jì)算在樣品母液4ml中含有多少A(g)。計(jì)算1,4-丁磺酸內(nèi)酯中環(huán)糊精磺丁基醚鈉含量：結(jié)果= A /（VEXTCUF）A =如上確定VEXT=在提取步驟中使用樣品儲備溶液的體積，4.0mlCU=樣品原料溶液中環(huán)糊精磺丁基醚鈉濃度（mg/ml）F =換算系數(shù)

33、（10-3克/mg）驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：不大于0.5.ppm-氯化鈉，4-羥基-1-磺酸，和雙（4-磺丁基）醚二鈉溶液A：5mM的氫氧化鈉，在密閉容器中脫氣15分鐘溶液B：25mM的氫氧化鈉，在一個(gè)封閉容器脫氣15分鐘流動(dòng)相：見表5。時(shí)間（min）溶液A（%）溶液B（%）0100041000107030247030251000401000柱洗滌液A：50 mM檸檬酸鈉柱洗滌液B：150mM的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：配制一個(gè)溶液含有USP氯化鈉RS 8g/ml，4-羥基丁烷-1-磺酸濃度4g/ml的的，和4g/ml的雙（4-磺丁基）醚二鈉。樣品溶液：磺丁基醚-環(huán)糊精鈉4mg/ml色譜系統(tǒng)（見色譜，系統(tǒng)適用性和離

34、子色譜。）模式：IC檢測器：電導(dǎo)率范圍：30S當(dāng)前：100mA柱：注-在每次運(yùn)行結(jié)束，用柱洗滌液A以1mL/分鐘的流速?zèng)_洗35分鐘，然后使用柱洗滌液B以同樣的流速清洗色譜柱35分鐘。保護(hù)柱：4.0mm5.0cm陰離子交換;包裝L61分析：4.0mm25cm陰離子交換;包裝L61柱溫度：30抑制器：微膜負(fù)離子自動(dòng)抑制1或合適的化學(xué)滅火系統(tǒng)抑制劑：自動(dòng)抑制流量：1.0ml/min注射量：20L系統(tǒng)適用性樣品：標(biāo)準(zhǔn)溶液注，提供相對保留時(shí)間供參考。相對保留時(shí)間分別是1.0，1.4和8.6的為4-羥基丁烷-1-磺酸根離子，氯離子，和雙（磺丁基）醚離子。適用性要求分辨率：不小于2.0 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差：不大于

35、10.0分析樣本：標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液計(jì)算氯化鈉，4-羥基丁烷-1-磺酸，二（磺丁基）環(huán)糊精醚百分比鈉含量結(jié)果 = (rU/rS) (CS/CU) F 100RU=氯化鈉，4-羥基丁烷-1-磺酸，或樣品溶液中雙（磺丁基）醚二鈉峰值響應(yīng)RS =氯化鈉，4-羥基丁烷-1-磺酸，或標(biāo)準(zhǔn)溶液中雙（磺）乙醚二鈉峰值響應(yīng)CS =氯化鈉，4-羥基丁烷-1-磺酸，或標(biāo)準(zhǔn)溶液中雙（磺丁基）醚二鈉濃度（g/ml）CU=樣品溶液中磺丁基醚-環(huán)糊精鈉濃度（mg/ml）F =轉(zhuǎn)換系數(shù)（10-3mg/微磺丁基醚-環(huán)糊精鈉g）驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉：不大于0.24-羥基丁烷-1-磺酸：不大于0.09雙（磺丁基）醚二鈉：不大于0.05

36、特定實(shí)驗(yàn)-細(xì)菌內(nèi)毒素檢查：細(xì)菌內(nèi)毒素的水平是這樣的，根據(jù)有關(guān)的劑型專著（多個(gè)），其中使用環(huán)糊精磺丁基鈉的規(guī)定都能得到滿足。其中，該文章指出環(huán)糊精磺丁基鈉的注射劑型的必須在制備過程中進(jìn)行進(jìn)一步的處理，使得細(xì)菌內(nèi)毒素的水平符合相關(guān)劑型的專著（多個(gè)）的要求，其中使用環(huán)糊精磺丁基鈉的規(guī)定可以得到滿足。-微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)和指定微生物試驗(yàn)：總需氧細(xì)菌數(shù)不超過100個(gè)/g，總霉菌和酵母菌數(shù)不超過50個(gè)/g。它滿足了不應(yīng)該檢測出大腸桿菌的需求。 澄明度試驗(yàn)樣品溶液：30（重量/體積）溶液分析：使用白色和黑色的背景光箱樣品溶液檢查，并記錄任何陰霾，熒光，纖維，斑點(diǎn)，或其他異物的存在。驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：該試驗(yàn)方案是明確的，

37、基本上不含異物顆粒。平均取代度運(yùn)行電解質(zhì)：用100 mmol三（羥甲基）氨基甲烷緩沖液調(diào)節(jié)30mmol苯甲酸至pH值適用該儀器。由于不同毛細(xì)管之間的差別，沒有指定一個(gè)單一的普遍適用的電解液的pH值。相反，每個(gè)毛細(xì)管相關(guān)的最佳pH值應(yīng)根據(jù)儀器說明書確定。標(biāo)準(zhǔn)溶液：10mg/ml的USP磺丁基醚-環(huán)糊精鈉RS樣品溶液：10mg/ml的磺丁基醚-環(huán)糊精鈉毛細(xì)管沖洗過程：使用單獨(dú)的運(yùn)行電解質(zhì)的小瓶進(jìn)行毛細(xì)管沖洗和樣品分析。每天進(jìn)行分析前及每個(gè)分析之前的沖洗：用0.1N氫氧化鈉沖洗毛細(xì)管30分鐘，并且用水沖洗不少于2 h，并運(yùn)行電解質(zhì)不少于1小時(shí)。執(zhí)行預(yù)噴射沖洗每次進(jìn)樣之前。用0.1N氫氧化鈉沖洗毛細(xì)管不少于1分鐘，并且運(yùn)行電解質(zhì)不少于3分鐘。如果正在使用新的毛細(xì)管中，除了上述的常規(guī)沖洗，新的毛細(xì)管，需要在第一次使用之前漂洗。新毛細(xì)管用1M氫氧化鈉沖洗1小時(shí)，接著用水沖洗2小時(shí)。電泳系統(tǒng)（見毛細(xì)管電泳1053。）模式：高效毛細(xì)管電泳檢測器：反相紫外檢測波長200 nm，具有20 nm的帶寬?！咀?A 205 nm檢測波長10 nm帶寬，可以作為替代。柱：50M50厘米的熔融石英柱柱溫：25電壓：10分鐘電壓從0線性升到30 kV，然后在30 kV維持20分鐘注射量：等量在0.5psi 壓力差下維持10秒系統(tǒng)適用性示例：標(biāo)準(zhǔn)溶液 注：見表6中近似的相對遷移時(shí)間磺丁基醚-環(huán)糊精鈉