實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的使用及微生物形態(tài)的觀察

1、實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的使用及微生物形態(tài)的觀察,1熟悉普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及各部分的功能； 2學(xué)習(xí)并掌握油鏡的原理和使用方法； 3學(xué)習(xí)觀察微生物的個(gè)體形態(tài)； 4學(xué)會(huì)生物圖的繪制。,一、目的要求,二、顯微鏡的基本構(gòu)造,1. 物鏡轉(zhuǎn)換器 2. 接物鏡 3.游標(biāo)卡尺 4.載物臺(tái) 5.聚光器 6. 彩虹光闌 7.光源 8. 鏡座 9. 電源開關(guān) 10. 光源滑動(dòng)變阻器 11. 粗調(diào)螺旋 12. 微調(diào)螺旋 13. 鏡臂 14.鏡筒 15.目鏡 16.標(biāo)本移動(dòng)螺旋,顯微鏡是由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩大部分組成。,1機(jī)械裝置 鏡座（base）和鏡臂（arm） 鏡座位于顯微鏡底部 , 呈馬蹄形，它支持全鏡。鏡臂有固定式和活

2、動(dòng)式兩種，活動(dòng)式的鏡臂可改變角度。鏡臂支持鏡筒。 鏡筒（body tube） 是由金屬制成的圓筒，上接目鏡，下接轉(zhuǎn)換器。鏡筒有單筒和雙筒兩種，單筒又可分為直立式和后傾式兩種。而雙筒則都是傾斜式的，傾斜式鏡筒傾斜45。雙筒中的一個(gè)目鏡有屈光度調(diào)節(jié)裝置，以備在兩眼視力不同的情況下調(diào)節(jié)使用。,轉(zhuǎn)換器（nosepiece）：為兩個(gè)金屬碟所合成的一個(gè)轉(zhuǎn)盤，其上裝 3 - 4個(gè)物鏡 , 可使每個(gè)物鏡通過(guò)鏡筒與目鏡構(gòu)成一個(gè)放大系統(tǒng)。 載物臺(tái)（stage）：又稱鏡臺(tái)，為方形或圓形的盤，用以載放被檢物體，中心有一個(gè)通光孔。在載物臺(tái)上有的裝有兩個(gè)金屬壓夾稱標(biāo)本夾，用以固定標(biāo)本；有的裝有標(biāo)本推動(dòng)器，將標(biāo)本固定后，能

3、向前后左右推動(dòng)。有的推動(dòng)器上還有刻度，能確定標(biāo)本的位置，便于找到變換的視野。 調(diào)焦裝置：是調(diào)節(jié)物鏡和標(biāo)本間距離的機(jī)件，有粗動(dòng)螺旋（coarse adjustment）即粗調(diào)節(jié)器和微動(dòng)螺旋（fine adj-ustment）即細(xì)調(diào)節(jié)器，利用它們使鏡筒或鏡臺(tái)上下移動(dòng)，當(dāng)物體在物鏡和目鏡焦點(diǎn)上時(shí)，則得到清晰的圖像。,2光學(xué)系統(tǒng) 物鏡（objective）：安裝在鏡筒下端的轉(zhuǎn)換器上，因接近被觀察的物體，故又稱接物鏡。其作用是將物體作第一次放大，是決定成像質(zhì)量和分辨能力的重要部件。物鏡上通常標(biāo)有數(shù)值孔徑、放大倍數(shù)、鏡筒長(zhǎng)度、焦距等主要參數(shù)。如10/0.25 ；160/0.17 ，其中 “10 ”表示放大

4、倍數(shù)，“0.25” 表示數(shù)值孔徑（numerical aperture），“160/0.17”分別表示鏡筒長(zhǎng)度和所需蓋玻片厚度（mm）。 目鏡（coular lens）：裝于鏡筒上端，由兩塊透鏡組成。目鏡把物鏡造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般標(biāo)有4、10、16等放大倍數(shù)，可根據(jù)需要選用。一般可按與物鏡放大倍數(shù)的乘積為物鏡數(shù)值孔徑的 500-700 倍，最大也不能超過(guò) 1000 倍的選擇。目鏡的放大倍數(shù)過(guò)大，反而影響觀察效果。,聚光器（condenser）：光源射出的光線通過(guò)聚光器匯聚成光錐照射標(biāo)本，增強(qiáng)明度和造成適宜的光錐角度，提高物鏡的分辨力。聚光器由聚光鏡和虹彩光圈（iris di

5、aphragm）組成，聚光鏡由透鏡組成。虹彩光圈由簿金屬片組成，中心形成圓孔，推動(dòng)把手可隨意調(diào)整透進(jìn)光的強(qiáng)弱。調(diào)節(jié)聚光鏡的高度和虹彩光圈的大小，可得到適當(dāng)?shù)墓庹蘸颓逦膱D像。 光源（light source）：較新式的顯微鏡其光源通常是安裝在顯微鏡的鏡座內(nèi)，通過(guò)按扭開關(guān)來(lái)控制；老式的顯微鏡大多是采用附著在鏡臂上的反光鏡，反光鏡是一個(gè)兩面鏡子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍鏡觀察時(shí)，用平面反光鏡；使用油鏡或光線弱時(shí)可用凹面反光鏡。 濾光片（filter）：可見光是各種顏色的光組成的，不同顏色的光線波長(zhǎng)不同。如只需某一波長(zhǎng)的光線時(shí)，就要用濾光片。選用適當(dāng)?shù)臑V光片，可以提高分辨力，增加影

6、像的反差和清晰度。濾光片有紫、青、藍(lán)、綠、黃、橙、紅等各種顏色的，分別透過(guò)不同波長(zhǎng)的可見光，可根據(jù)標(biāo)本本身的顏色，在聚光器下加相應(yīng)的濾光片。,三、基本原理,1、細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)是指細(xì)菌細(xì)胞的大小，形狀等特征，利用觀察個(gè)體形態(tài)對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步識(shí)別和鑒定。,2、放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。,3、霉菌可產(chǎn)生復(fù)合分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長(zhǎng)到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌

7、絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)。,毛霉與根霉,青霉,分生孢子,分生孢子梗,小梗,?；?附枝,曲霉,分生孢子,次生小梗,初生小梗,頂囊,分生孢子梗,足細(xì)胞,顯微鏡、細(xì)菌三型涂片、霉菌 和放線菌的永久玻片等。,四、器材,五、操作步驟,（1）置顯微鏡于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，鏡座距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊沿約 3-4 ，鏡檢者姿勢(shì)要端正，一般用左眼觀察，右眼便于繪圖或記錄，兩眼必須同時(shí)睜開，以減少疲勞，亦可練習(xí)左右眼均能觀察。 （2）調(diào)節(jié)光源、光線較強(qiáng)的天然光源宜用平面鏡；光線較弱的天然光源或人工光源宜用凹面鏡。,（3）低倍鏡觀察 檢查的標(biāo)本需先用低倍鏡觀察，因?yàn)榈捅剁R視野較大，易發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定檢查的位置

8、。 將三型涂片玻片標(biāo)本置鏡臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，移動(dòng)推動(dòng)器，使觀察對(duì)象處在物鏡正下方，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，物鏡降至距標(biāo)本約0.5cm處，由目鏡觀察，此時(shí)可適當(dāng)?shù)乜s小光圈，否則視野中只見光亮一片，難見到目的物，同時(shí)用粗調(diào)節(jié)器慢慢升起鏡筒，直至物像出現(xiàn)后再用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)到物像清楚時(shí)為止，然后移動(dòng)標(biāo)本，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部位，找到合適的目的物，并將其移至視野中心，準(zhǔn)備用高倍鏡觀察。,（4）高倍鏡觀察 將高倍鏡轉(zhuǎn)至正下方，在轉(zhuǎn)換物鏡時(shí)，需用眼睛在側(cè)面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。如果高倍鏡觸及載玻片應(yīng)立即停止旋動(dòng)，說(shuō)明原來(lái)低倍鏡就沒有調(diào)準(zhǔn)焦距，目的物并沒找到，要用低倍鏡重調(diào)，如果調(diào)對(duì)了，換高倍鏡時(shí)基本可以看到目的物，

9、若有點(diǎn)模糊，用細(xì)調(diào)節(jié)器調(diào)就清晰可見。找到最適宜觀察的部位后，將此部位移至視野中心，準(zhǔn)備用油鏡觀察。,（5）油鏡觀察 用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒提起約2，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。 在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油，切勿加多。 從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在香柏油中，其鏡頭幾乎與標(biāo)本相接，應(yīng)特別注意不能壓在標(biāo)本上，更不可用力過(guò)猛，否則不僅壓碎玻片，也會(huì)損壞鏡頭。 標(biāo)本觀察完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈，然后用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上殘留的油跡，最后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。,（6）觀察后的處理工作 擦完后，把物鏡轉(zhuǎn)離光軸，把反光鏡轉(zhuǎn)到與載物臺(tái)垂直的方向，以減少灰塵粘落上面，而后罩上鏡套，小心的放回鏡箱內(nèi)，保存?zhèn)溆谩?注意：微生物標(biāo)本片，多用涂片法制成