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文檔簡介

1、實驗五 dna回收及純化,實驗目的： 1、了解dna回收與純化的基本原理； 2、掌握凝膠回收試劑盒的使用方法,實驗原理,pcr產(chǎn)物、酶切產(chǎn)物、提取的質(zhì)粒等dna樣品通過電泳后，可以使目的dna片段與其它dna雜帶、酶、rna等雜質(zhì)有效分離，然后通過膠回收的手段將目的從凝膠中分離出來，得到純化的目的dna。,膠回收的關鍵參數(shù): 回收產(chǎn)物的質(zhì)量：純度，完整性 回收得率 膠回收的常用方法： 透析袋電洗脫法 低融點瓊脂糖凝膠法 3. 化學融膠法 dna回收試劑盒,dna回收試劑盒： 1.瓊脂糖能溶解于一些鹽溶液中(nai, ki, naclo4),然后可用特殊的純化柱將dna樣品溶液純化。 2.玻璃纖

2、維柱：特殊硅基質(zhì)材料，在高鹽緩沖系統(tǒng)下高效專一地吸附dna。 溶液a： 含naclo4；溶液b：3m naac；溶液c：用時添加無水乙醇；溶液d：te緩沖液。,注意事項,紫外燈的照射時間盡量短，盡量使用長波 紫外燈；短波紫外線(254nm)會引起dna的斷裂或是形成tt二聚體 。 防止dna酶污染，與回收片段接觸的試劑與器皿等都應進行滅菌(酶)處理 。 動作輕柔，防止機械剪切力對較長片段dna的破壞。,實驗步驟,電泳dna樣品 切下含有目的dna的膠塊（盡可能不多切） 膠回收： 將切下的膠帶放入1.5ml離心管中,按照1：3 (膠帶重量：溶液a的體積)的比例加入溶液a； 55水溶10min,膠帶完全要求完全溶化,其間可振蕩助溶23次,待溶化后置室溫加入50l溶液b,充分混勻； 將溶液置于離心柱中,靜置2min,10000rpm離心20s； 倒掉液體,加入500l溶液c于離心柱中10000rpm離心20s,棄液體,重復該步驟一次；, 12000rpm離心1min,甩干剩余液體以除去殘余乙醇； 將離心柱置于新的離心管中,室溫敞開離心管蓋放置510min,使乙醇揮發(fā)殆盡 加入2030l溶液d(使用前50水浴),靜置2min； 1

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