乙肝兩對(duì)半終結(jié)版

1、乙肝兩對(duì)半定量測(cè)定技術(shù) 對(duì) HBV 感染診斷、治療的意義邳州市中醫(yī)院檢驗(yàn)科 平1、前言乙型病毒肝炎是由乙肝病毒（HBV）感染引起的傳染性疾病。在全球圍，乙肝的發(fā)病率均比較高，屬于臨床上常見(jiàn)的一種傳染病。因?yàn)橐腋尾《靖腥疽邹D(zhuǎn)化為慢性乙肝，繼而發(fā)展成肝硬化，肝癌，所以需要早診斷早治療。我國(guó)是乙肝病毒的高危流行地區(qū)。在我國(guó)大部分醫(yī)院，預(yù)防、診斷及治療乙肝時(shí)，乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)結(jié)果為主要依據(jù)。通過(guò)乙肝兩對(duì)半的檢測(cè)結(jié)果，可將乙肝病毒活動(dòng)性復(fù)制及傳染性是否存在直接反映出來(lái)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ ELISA）是將抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用原理有機(jī)的結(jié)合起來(lái)，可敏感的檢測(cè)生物標(biāo)本中微量的特異性抗體

2、或抗原的一種臨床檢驗(yàn)方法。因其操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，經(jīng)濟(jì)安全，不需特殊設(shè)備等特點(diǎn)而在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到廣泛應(yīng)用1。然而，此方法屬于定性檢測(cè)方法，只能進(jìn)行定性分析，“灰區(qū)”樣本易導(dǎo)致漏診。同時(shí)在臨床應(yīng)用過(guò)程中，定性方法難以判斷乙肝病毒感染復(fù)制情況，患者病情及療效情況不能實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)的監(jiān)測(cè)，使得其在臨床中的應(yīng)用受到一定的限制2。近年來(lái)，乙肝兩對(duì)半檢測(cè)中開(kāi)始采用定量檢測(cè)方法，如時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TRIFA），化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）等，因這些方法具備的高靈敏度、強(qiáng)穩(wěn)定性等優(yōu)勢(shì)，而在臨床檢測(cè)中得以迅速的推廣，在一定程度上彌補(bǔ)了ELISA 方法存在的局限。2、我科乙肝兩對(duì)半檢測(cè)的現(xiàn)狀分析酶聯(lián)免疫吸

3、附實(shí)驗(yàn)（ ELISA）法作為傳統(tǒng)的傳染病標(biāo)志物檢測(cè)技術(shù)，多年來(lái)一直被我科用于乙肝兩對(duì)半、丙肝、梅毒等的實(shí)驗(yàn)室診斷。鑒于其定性方法方法學(xué)的特性，應(yīng)用受到極大的限制。因此在 2014 年 7 月，我科引進(jìn)了一臺(tái) EFFICUTA 全自動(dòng)時(shí)間分辨熒光分析儀器， 用于開(kāi)展傳染病標(biāo)志物的定量檢測(cè)。該機(jī)器采用時(shí)間分辨熒光免疫分析法（TRFIA），有效排除背景雜質(zhì)光對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，可獲得高靈敏度、高準(zhǔn)確性的傳染病標(biāo)志物定量分析結(jié)果，不僅在早期診斷和判斷是否痊愈中可以應(yīng)用，而且可在治療過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)治療效果，對(duì)于臨床治療方案的制定給予實(shí)驗(yàn)室支持。3、問(wèn)題確立對(duì)于傳統(tǒng)項(xiàng)目因方法學(xué)改變而產(chǎn)生的收費(fèi)差異，臨床上還

4、是存在一定的疑慮，尤其是肝病科，由于其科室（我院特色科室之一）的診治的乙肝病人較多，醫(yī)生多次向我科咨詢：（1）轉(zhuǎn)變方法學(xué)，定性和定量檢測(cè)的區(qū)別是什么？（2）定量檢測(cè)的臨床意義是否真的比定性檢測(cè)更具有優(yōu)勢(shì)？對(duì)此，本人以乙肝兩對(duì)半檢測(cè)項(xiàng)目為例，選擇肝病科病人，同時(shí)對(duì)其血液樣本進(jìn)行乙肝兩對(duì)半的定性和定量檢測(cè)，比較檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)兩種檢測(cè)方法在診斷乙型肝炎病毒感染中的差異，向臨床醫(yī)生介紹乙肝兩對(duì)半定性和定量結(jié)果的區(qū)別和臨床意義。同時(shí)探討 TRFIA 的臨床價(jià)值，給臨床醫(yī)生、給病人選擇檢測(cè)項(xiàng)目提供參考依據(jù)。4、文獻(xiàn)查證在我國(guó)總?cè)丝跀?shù)量中，約有 10%的人口為乙肝病毒攜帶者，預(yù)防、診斷及治療乙肝時(shí)，乙肝兩對(duì)

5、半的檢測(cè)結(jié)果為主要依據(jù)。目前，酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）為我國(guó)檢測(cè)乙肝兩對(duì)半時(shí)較為常用的方法，此種檢測(cè)屬于定性檢測(cè)。由于定性檢測(cè)方法存在一定的局限性，容易導(dǎo)致“灰區(qū)”樣本漏診的發(fā)生3。近年來(lái)，部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)已逐漸采用定量檢測(cè)方法測(cè)定乙肝兩對(duì)半，逐步替代定性的 ELISA 方法。常用的定量檢測(cè)方法有放射免疫分析法（RIA），化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA），時(shí)間分辨熒光免疫分析法（ TRIFA）等4-6。因定量方法具備的靈敏度高、穩(wěn)定性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)而廣泛得應(yīng)用于臨床檢測(cè)中，并在一定程度上彌補(bǔ)了定性ELISA 方法存在的局限。同時(shí)有報(bào)道指出，定量測(cè)定乙肝兩對(duì)半與HBV-DNA 血清水平的定量聯(lián)合測(cè)定對(duì)乙

6、肝的臨床診斷，療效觀察和預(yù)后判斷具有更大的臨床價(jià)值，這是定性方法無(wú)法替代的7。5、研究方法1檢測(cè)對(duì)象以 2014 年 9 月2015 年 9 月選擇肝科病人 400 例，（其中住院病人 190 例，門診病人 210 例）為研究對(duì)象，其中男226 例，女 174 例；年齡 2281 歲，平均（51.82.3）歲。2方法2.1 標(biāo)本采集：住院病人收集肝病科病房護(hù)士早上抽取的病人空腹靜脈血，門診病人由采血室護(hù)士抽取病人靜脈血，并及時(shí)分離血清。2.2 ELSIA 法檢測(cè)：試劑來(lái)源于科衛(wèi)臨床診斷試劑，酶標(biāo)儀是華科瑞科的HR801 儀器，乙肝五項(xiàng)定性檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑及儀器說(shuō)明書進(jìn)行操作。2.3 TRIFA

7、 法檢測(cè)：TRIFA 檢測(cè)時(shí)采用的試劑來(lái)于源新波技術(shù)，儀器EFFICUTA 全自動(dòng)時(shí)間分辨熒光分析儀器，乙肝五項(xiàng)定量檢測(cè)操作嚴(yán)格按照試劑及儀器說(shuō)明書進(jìn)行。2.4 陽(yáng)性判讀標(biāo)準(zhǔn)： ELSIA 法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半?yún)⒖紘繛殛幮裕?TRIFA 檢 測(cè) 的 參 考 圍 為 ： HBsAg 為 0-0.2ng/ml, HBsAb 為0-10mIU/ml,HBeAg 為 0-0.5PEIU/ml, HBeAb 為 0-0.2PEIU/ml, HBcAb 為 0-0.9PEIU/ml.6、結(jié)果ELISA 方法與TRIFA 方法的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表 1 和表 2 所示。表 1.兩種方法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的陽(yáng)性例數(shù)及構(gòu)成

8、比。方法學(xué)項(xiàng)目ELISA（n=400）陽(yáng)性構(gòu)成比TRIFA（n=400）陽(yáng)性構(gòu)成比HBsAg12130.25%13132.75%HBsAb19147.75%20350.75%HBeAg5112.75%5112.75%HBeAb11929.75%13233%HBcAb20751.75%22355.75%表 2.兩種方法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的模式匯總。 （1.HBsAg; 2.HBsAb; 3.HBeAg; 4.HBeAb; 5.HBcAb模式例數(shù)構(gòu)成比例數(shù)構(gòu)成比4 陽(yáng)性0010.25%2,4 陽(yáng)性30.75%41%1 陽(yáng)性0030.75%5 陽(yáng)性61.5%82%1,5 陽(yáng)性92.25%102.5%全陰

9、性7518.75%4812%2 陽(yáng)性11428.5%12030%2,5 陽(yáng)性276.75%287%2,4,5 陽(yáng)性4711.75%5012.5%4,5 陽(yáng)性71.75%102.5%1,4 陽(yáng)性10.25%10.25%1,2,5 陽(yáng)性0010.25%1,3,4,5 陽(yáng)性10.25%10.25%1,3,5 陽(yáng)性5012.5%5012.5%1,4,5 陽(yáng)性6015%6516.25%對(duì)比兩種檢測(cè)方法的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，存在檢測(cè)結(jié)果不一致的現(xiàn)象。每一個(gè)單項(xiàng)或每一種模式，TRIFA 方法的陽(yáng)性結(jié)果普遍高于ELISA 方法；同時(shí)存在比如TRIFA 方法檢測(cè)HBsAg 顯示為陽(yáng)性者，ELISA 方法檢測(cè)顯示為陰性或者

10、TRIFA 方法檢測(cè)HBcAb 顯示為陰性者，ELISA 方法檢測(cè)顯示為陽(yáng)性。說(shuō)明 ELISA 方法測(cè)試時(shí)存在假陽(yáng)性或假陰性的結(jié)果。7、結(jié)果分析兩種檢測(cè)方法結(jié)果的不同表明兩種方法的方法學(xué)性能存在差異， 但是哪一種方法更加適合臨床需要進(jìn)一步的討論與驗(yàn)證。1.定量檢測(cè)乙肝兩對(duì)半具有更高的檢測(cè)靈敏度乙肝兩對(duì)半檢測(cè)中，采用 ELISA 方法檢測(cè)時(shí)，酶標(biāo)陽(yáng)性的呈現(xiàn)需要達(dá)到 2ng/ml 的血清水平；而采用 TRIFA 方法檢測(cè)時(shí)，陽(yáng)性呈現(xiàn)僅需達(dá)到 0.1ng/ml 即可，檢測(cè)靈敏度顯著提升8。因此，采用TRIFA方法定量檢測(cè)后，HBsAg 陽(yáng)性可以在更早期被檢出，以確證 HBV 感染。在急性乙肝早期檢測(cè)

11、中采用ELISA 方法時(shí)，HBsAg 的檢測(cè)結(jié)果會(huì)顯示為陰性，造成漏診；在部分慢性乙肝患者中，機(jī)體免疫對(duì)乙肝病毒包膜蛋白的應(yīng)答缺乏，從而降低HBsAg 的表達(dá)，利用ELISA 檢測(cè)時(shí)，HBsAg會(huì)顯示為陰性，而且抗-HBs 會(huì)也顯示為陰性，造成漏診；乙肝病毒變異后，表達(dá)量會(huì)比較低，抗原采用 ELISA 檢測(cè)時(shí)不能檢測(cè)，造成漏診；部分乙肝病毒攜帶者的HBsAg 濃度比較低，尤其是特殊群體，受到長(zhǎng)期密切接觸的影響，轉(zhuǎn)變?yōu)榧毙砸腋?，但傳播感染途徑并非直接?jīng)由血液，而是少量感染長(zhǎng)期積累而成，此種情況下，感染濃度比較低，定性的ELISA 方法檢測(cè)將不易檢出，造成漏診；然而上述情況若采用定量方法檢測(cè)，則假

12、陰性的情況基本不會(huì)出現(xiàn)，提高了 HBV 感染的診斷準(zhǔn)確率9。在HBV 感染的早期診斷中，采用定量檢測(cè)時(shí)，因檢出靈敏度的提升可及早發(fā)現(xiàn)患者的病情，從而積極的治療、預(yù)防，避免發(fā)展為乙肝或慢性乙肝攜帶者。臨床觀察乙肝患者病情時(shí)，“窗口期”時(shí)間也隨著方法檢測(cè)靈敏度的提升而明顯縮短，有利于病情的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。2.乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)可對(duì)患者病情動(dòng)態(tài)的觀察與監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)生、發(fā)展具備動(dòng)態(tài)性，而且治療過(guò)程中，療效及預(yù)后也是動(dòng)態(tài)變化的。乙肝五項(xiàng)的濃度變化可直接反映乙肝患者的病情變化情況、療效情況等，通過(guò)定量檢測(cè)方法，可對(duì)變化過(guò)程實(shí)施動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，并指導(dǎo)醫(yī)生對(duì)患者病情的判定及治療方案的調(diào)整，提升治療效果。急性乙肝患者治療過(guò)

13、程中，HBsAg、HBsAb 濃度變化利用定量分析監(jiān)測(cè)時(shí)，可以較為準(zhǔn)確的判斷患者病情是否處于恢復(fù)期當(dāng)中，通常HBsAg 濃度出現(xiàn)下降，而 HBsAb 濃度出現(xiàn)升高時(shí)，表示患者病情正在發(fā)展至恢復(fù)期10。乙肝患者病情及治療效果的變化可通過(guò) HBeAg 和 HBeAb 濃度的變化情況反映出來(lái)。此外，HBeAb 的濃度非常高時(shí)，說(shuō)明患者急性感染乙肝。3.乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)與 HBV-DNA 定量分析的聯(lián)合應(yīng)用可更好地反映病毒復(fù)制狀態(tài)和治療效果臨床治療乙肝患者時(shí)，治療一段時(shí)間后，患者 HBsAg 檢測(cè)呈陰性或HBV-DNA 檢測(cè)呈陰性時(shí)，并不能說(shuō)明已經(jīng)完全清除了乙肝病毒， 綜合性分析乙肝兩對(duì)半的五項(xiàng)指標(biāo)

14、檢測(cè)結(jié)果之后，機(jī)體乙肝病毒狀態(tài)可以客觀的反映出來(lái)，可對(duì)患者預(yù)后較為準(zhǔn)確的判斷11。血清HBV-DNA 檢測(cè)結(jié)果顯示為陰性，而且 HBsAg、HBeAb 濃度檢測(cè)結(jié)果顯示比較高時(shí)，說(shuō)明患者的病情并未全部痊愈，病情存在惡化的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)對(duì)患者的病情密切的觀察，但血清 HBV-DNA 檢測(cè)結(jié)果顯示為陰性，而且HBsAg、HBeAb 濃度檢測(cè)結(jié)果顯示比較低時(shí)，提示患者病情治療效果良好，正在逐漸痊愈，預(yù)后情況可有效的改善。4.乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)可正確評(píng)價(jià)抗體中和乙肝病毒的免疫力情況檢測(cè)乙肝患者“兩對(duì)半”時(shí)，HBsAb 的濃度含量如果超過(guò)10mIU/mL，那么采用ELISA 方法檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)結(jié)果會(huì)顯示為陽(yáng)性，

15、但此結(jié)果并不能說(shuō)明機(jī)體免疫力一定存在；而其濃度含量在10 100mIU/mL 之間時(shí)，ELISA 檢測(cè)結(jié)果依然為陽(yáng)性，此時(shí)，機(jī)體免疫乙肝病毒的能力比較弱，甚至乙肝病毒感染預(yù)防的能力都不存在，乙肝病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)比較高12。當(dāng) HBsAb 濃度含量超過(guò) 100mIU/mL 時(shí)，機(jī)體方具備較強(qiáng)的抵御乙肝病毒感染的能力。由此可知，機(jī)體中HBsAb 的濃度含量越高時(shí)，機(jī)體抵御乙肝病毒感染的能力越高，而且可長(zhǎng)時(shí)間的持續(xù)。采用 TRIFA 檢測(cè)機(jī)體中HBsAb 的濃度含量時(shí)，機(jī)體抵御乙肝病毒的狀態(tài)、接種乙肝疫苗的效果均可被判斷出來(lái)：如果機(jī)體中HBsAb 的濃度含量比較少時(shí)，乙肝疫苗的接種應(yīng)加強(qiáng)，從而降低機(jī)體

16、感染乙肝病毒的風(fēng)險(xiǎn)。此外，個(gè)體差異的存在導(dǎo)致機(jī)體接種乙肝疫苗后產(chǎn)生不同的免疫力，有些個(gè)體接種乙肝疫苗后，數(shù)十年 HBsAb 的濃度含量均會(huì)持續(xù)比較高的狀態(tài)，而有些個(gè)體接種乙肝疫苗后，幾年即會(huì)消失。因此，乙肝預(yù)防及篩查中，應(yīng)十分注意這類高危人群。8、結(jié)論綜上所述，乙肝兩對(duì)半檢測(cè)中，定量檢測(cè)的靈敏度及準(zhǔn)確性要優(yōu)于定性檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)可綜合采用這兩種檢測(cè)方法，揚(yáng)長(zhǎng)避短，提升檢測(cè)的準(zhǔn)確性，避免漏診。預(yù)防性篩查乙肝患者時(shí)，可以用定性分析。對(duì)于疑似乙肝患者或是乙肝患者應(yīng)進(jìn)行定量檢測(cè)，可提升診治的準(zhǔn)確性，盡早發(fā)現(xiàn)患者的乙肝病情，及時(shí)給予患者治療，改善患者預(yù)后?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1王蘭蘭，臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn).人民衛(wèi)生，M

17、2012 年第 5 版：91-92. 2國(guó)繪，許文龍，竇琳琳等.1128 例HBV-DNA 定量和乙肝血清學(xué)標(biāo)志物定量結(jié)果之間的相關(guān)性研究J.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（02）：351-354.3慧.乙型肝炎血清兩對(duì)半檢測(cè)與HBV-DNA 濃度的分析J.中外醫(yī)療，2013，10（27）：188+190.4黃志勇，然峰，董長(zhǎng)林等.固相放免法定量乙肝兩對(duì)半轉(zhuǎn)珠前后結(jié)果比較分析J.武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，13（5）：401，406.5龍紹芬，黎鐵斌等.乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)結(jié)果分析J.實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2012，30（2）：187-188.6燦，靜，雯.化學(xué)發(fā)光法與 ELISA 法對(duì)乙肝兩對(duì)半少見(jiàn)模式測(cè)定的比較分析J.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2007，11（12）：16807胡夷.乙肝兩對(duì)半定量檢測(cè)和 HBV-DNA 定量檢測(cè)結(jié)果對(duì)比分析J. 中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)，2015，25（10）：275.8雙元.ELISA 法檢測(cè)乙肝兩對(duì)半的意義及臨床應(yīng)用J.當(dāng)代醫(yī)學(xué)， 2013，8（26