常見(jiàn)大腸桿菌感受態(tài)的特點(diǎn)和用途解析

1、1:DH5a 菌株DH5a 是一種常用于質(zhì)?？寺〉木?。 E.coli DH5a在使用 pUC 系列質(zhì)粒載體 轉(zhuǎn)化時(shí),可與載體編碼的-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn) -互補(bǔ)。可用于藍(lán)白斑篩選鑒別 重組菌株。基因型:F-, 80dlacZM15, (lacZ-aYrAgFU169, deoR , recA1, endA1, hsdR17(rk-, mk+, phoA , supE44, -, thi-1, gyrA96, relA12:BL21(DE3 菌株 該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體 T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體 (如 pET 系列的 基因。 T7噬菌體 RNA 聚合酶位于噬 菌體 DE3區(qū),該區(qū)整合于

2、 BL21 的染色體 上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白 ?；蛐?F-, ompT , hsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE33:BL21(DE3 pLysS 菌株該菌株含有質(zhì)粒 pLysS ,因此具有氯霉素抗性。 PLysS 含有表達(dá) T7溶菌酶的 基因,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平 ,但不干擾目的蛋白的表達(dá)。 該菌適合表達(dá) 毒性蛋白和非毒性蛋白?；蛐?F-, ompThsdS (rBB-mB -, gal , dcm (DE3, pLysS , Camr4:JM109菌株該菌株在使用 pUC 系列質(zhì)粒載體進(jìn)行 DNA 轉(zhuǎn)化或用 M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn) 染時(shí),由于載

3、體 DNA 產(chǎn)生的 LacZa 多肽和 JM09編碼的 LacZM15進(jìn)行-互補(bǔ) ,從 而顯示-半乳糖苷酶活性 ,由此很容易鑒別重組體菌株基因型 :recA1, endA1, gyrA96, thi -1, hsdR17, supE44, relA1,-p(rloaAc BM15/F traD36, proAB+, lacIq , lacZ5:TOP10菌株該菌株適用于 高效的 DNA 克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增 ,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳?；蛐?F- , m crA (m-rhr sd RMS-mcrBC, 80 , lacZ M15 ,l ac 74, recA1 , ara 139 (-alre

4、au7697, galU , galK , rps , (Strr endA1, nupG6:HB101 菌株該菌株遺傳性能穩(wěn)定 ,使用方便 , 適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)基因型 :supE44, hsdS20(rB-mB - , recA13, ara -14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20,xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-17:M110 或 SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有 Dam 甲基化酶和 Dcm 甲基化酶 , 前者可以在GATC 序列中腺嘌呤 N-6位上引 入甲基,后者在 CCA/TGC 序列的第一個(gè)胞嘧啶 C5 位置上引入甲基。常用的菌株

5、都會(huì)產(chǎn)生 dam,dcm , 從而受到甲基化的影響 .部分限制性?xún)?nèi)切酶對(duì)甲基化的 DNA 不能切割,如 FbaI 和 MboI 等,一般生物公 司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均 有說(shuō)明。大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割 ,而有些會(huì)影響 ,如 XbaI, BclI 等。而且甲 基化只發(fā)生在特定序列 , 以 XbaI 為例,只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn) GA 或 TC ,該 XbaI 位 才會(huì)被甲基化。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法 :(1選用上述酶的同功酶 ,如 Sau3AI , DNA 識(shí)別切割位點(diǎn)與 MboI 相同;但不受甲基化影響 ;(2 利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行 DNA 的制備,如 E.co

6、li JM110 和鏈霉菌等 , 前者 Dam 和 Dcm 甲基化酶已敲出 ,而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶 ,從這些細(xì)胞中 抽提的 DNA 就能被上述酶切割。 8:E.coli JM110要排除 dam,dcm 甲基化的影響 ,需要用特定的 dam-,dcm-的菌株 ,如 JM110如果由 JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株 產(chǎn)生的質(zhì)粒 ,則不會(huì)被甲基化 .各種感受態(tài)細(xì)胞的區(qū)別用途特征Xl1-Blue 菌株基因型 :endA1 gyrA96(nalR thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F Tn10 proAB+ lacIq (lacZM15 hsdR17(rK

7、- mK+ 。特點(diǎn):具有卡那抗性、四環(huán)素抗性和氯霉素抗性。用途:分子克隆和質(zhì)粒提取。BL21(DE3 菌株基因型 :F ompT gal dcmlonhsdSB(rB- mB- (DE3 lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5。特點(diǎn):該菌株用于以 T7 RNA 聚合酶為表達(dá)系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達(dá)宿 主。 T7噬菌體 RNA 聚合酶 基因的表達(dá)受控于 噬菌體 DE3區(qū)的 lacUV5 啟動(dòng)子, 該區(qū)整合于 BL21 的染色體上。該菌適合于非毒性 蛋白的表達(dá)。用途:蛋白質(zhì)表達(dá)。BL21(DE3ply 菌株基因型 :F- ompT gal dcmlonhsdS

8、B(rB- mB- (DE3 pLysS(cmR。特點(diǎn):該菌株帶有 pLysS ,具有氯霉素抗性。此質(zhì)粒還有表達(dá) T7溶菌酶的基因 , T7 溶菌酶能夠降低目的 基因的背景表達(dá)水平 ,但不干擾 IPTG 誘導(dǎo)的表達(dá)。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白 的表達(dá)。用途:蛋白質(zhì)表達(dá)DH5菌株基因型 :F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoRnupG 80dlacZ M15 (lacZYA-argFU169, hsdR17(rK-, 特點(diǎn) :一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍Ｆ?80dlacZ M1基5 因的表達(dá)產(chǎn)物與 pUC 載體編碼的 -半乳糖苷酶 氨基端實(shí)現(xiàn) 互

9、補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。 recA1 和 endA1 的突變有利于克隆 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。用途:分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。JM109菌株基因型 :endA1 glnV44 thi-1 relA1 gy rA96 recA1 mcrB+ (la-cproAB e14-F traD36 proAB+ lacIq lacZ M15hsd-mRK17+(。rK特點(diǎn):部分抗性缺陷 ,適合重復(fù)基因表達(dá) , 可用于 M13克隆序列測(cè)定和藍(lán)白斑篩 選。用途:分子克隆、質(zhì)粒提取和蛋白質(zhì)表達(dá)。DH10B 菌株基因型:F- mcrA (mr-rhsdRMS-mcrBC 80dlacZ

10、M15 lacX74 endA1 recA1 deoR (ara,leu7697 araD139galUgalKnupGrpsL -The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。host for pUC and other -complementation vectors; pBR322useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues, useful for plasmid rescue

11、 procedure。sELECTROMAX DH10B T1 CELLS說(shuō)明:DH10B 細(xì)胞是高轉(zhuǎn)化效率的 E. coli,可以完美應(yīng)用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。DH10B 基因型具有以下特點(diǎn) :? lacZ M1用5 于重組克隆的藍(lán) /白斑篩選? 消除了 mcrA 、 mcrBC 、 mrr 和 hsdRMS 限制系統(tǒng) , 允許構(gòu)建更多具有代表 性的基因組文庫(kù) (1,2? endA1 突變 ,可以增加質(zhì)粒產(chǎn)量和數(shù)量? 高效率轉(zhuǎn)化大小為 150 kb的質(zhì)粒,用于產(chǎn)生 cDNA 或基因組文庫(kù)DH10B? 可以表達(dá) tonA 的基因型 , tonA 能夠提供對(duì) T1和 T5噬菌體感染的抗 性 (DH10B? T1R 。DH10B? 的基因型 :F mcrA -(hmsdrrRMS-mcrBC 80lacZ M15 lacX74 rp