精選-新生兒溶血病檢測操作SOP

1、新生兒溶血病檢測操作SOP一、產(chǎn)前診斷1. 夫婦血型檢測（微柱凝膠檢測法：ABO Rh（D）血型定型檢測卡）1.1將紅細胞稀釋至1%紅細胞生理鹽水懸液；1.2撕開微膠卡的封膜，于正定管藍 A、黃b灰D、Control微柱管反應腔中加入 1%待檢RBC 生理鹽水懸液各 50卩l(xiāng) ;于反定管白色 A BO自身管分別對應加入 1.0% A1、B、O型試 劑紅細胞和待檢紅細胞生理鹽水懸液 50卩l(xiāng)，再分別加入待檢血漿（血清） 50卩l(xiāng) ;1.3將檢測卡室溫反應 10 min,取出，置離心機 1000r/min 2min , 1800r/min 3 min 離心；1.4取出，判定結(jié)果（凝集強度判斷詳見結(jié)

2、果判定示圖）。按下表檢驗結(jié)果判定 ABO RhD血型：檢驗結(jié)果ABO RhD血型判定蘭A黃B灰DCont （待檢RBCA1BOCont （血漿與自身RBC+-+或-+-A型 RhD（ + 或-）-+或-+-B型 RhD（ + 或-）-+或-+-0型 RhD（ + 或-）+或-AB 型 RhD（ + 或-）2. 孕婦抗體效價的測定（微柱凝膠檢測法：抗人球蛋白檢測卡）2.1孕婦lgG（抗A/抗B）效價2.1.1取待檢血清和2-Me（二巰基乙醇）應用液各0.2ml，充分混勻，37C水浴2小時（以充 分破壞血清中的igM類抗體）。2.1.2取4支干凈試管排于試管架上；將第一管加入50微升中和血清和1.

3、6毫升低離子介質(zhì)（原液為1:1稀釋，此時稀釋倍數(shù)為原液的64倍）。2.1.3第2 4管中分別加入400微升低離子介質(zhì)；從第一管中吸出400微升的液體加入第二管，混勻，在從第二管吸出400微升加入第三管混勻，依次倍比稀釋。2.1.4取抗人球蛋白檢測卡，撕去鋁箔，在4管中個依次加入倍比稀釋好的滅活血清50微升和1 %的標準紅細胞（或父親紅細胞）低離子介質(zhì)（LIM）懸液50微升。2.1.5將加好樣的檢測卡入生科孵育器中孵育15分鐘。2.1.6將孵育好的檢測卡放入生科離心機中離心5分鐘（1000r/mi n 2 min ,1800r/mi n 3 min）,（離心必須在加樣后 30分鐘內(nèi)進行）2.1.

4、7取出，判定結(jié)果（凝集強度判斷詳見結(jié)果判定示圖）臨床參考值：孕婦lgG（抗A抗B）效價W 64。22孕婦lgG（抗D）效價測定2.2.1 確定孕婦為RhD陰性，丈夫為RhD陽性。2.2.2取待檢血清和2-Me（二巰基乙醇）應用液各0.2ml，充分混勻，37C水浴2小時（孕婦 血清與O型RhD陽性紅細胞反應鹽水法為陽性需要滅活，陰性不需要滅活）。2.2.3 取 4 支干凈試管排于試管架上；將第一管加入 50 微升中和血清和 400 毫升低離子介 質(zhì)（滅活血清為 1:1 稀釋，此時稀釋倍數(shù)為原液的 16 倍；如不滅活為 8倍）。2.2.4 第 24 管中分別加入 400 微升低離子介質(zhì)；從第一管中

5、吸出 400 微升的液體加入第 二管，混勻，在從第二管吸出 400 微升加入第三管混勻，依次倍比稀釋。2.2.5 取抗人球蛋白檢測卡， 撕去鋁箔，在 4 管中個依次加入倍比稀釋好的血清50微升和 1的標準紅細胞（或父親紅細胞）低離子介質(zhì) （LlM） 懸液 50微升。2.2.6 將加好樣的檢測卡入生科孵育器中孵育 15 分鐘。2.2.7 將孵育好的檢測卡放入生科離心機中離心 5分鐘（ 1000r/min 2 min， 1800r/min 3 min），（離心必須在加樣后 30 分鐘內(nèi)進行）2.2.8 取出，判定結(jié)果（凝集強度判斷詳見結(jié)果判定示圖）臨床參考值：孕婦lgG（抗D）效價w 16,其血型

6、不合的胎兒溶血病一般較；IgG（抗D）效價w64 時，其血型不合胎兒死胎率增高。3. 孕婦不規(guī)則抗體篩查（微柱凝膠檢測法：抗人球蛋白檢測卡）3.1 取抗人球蛋白檢測卡，撕去鋁箔，在 3 管中個依次加入孕婦血清（血漿） 50 微升和 1 的篩選細胞低離子介質(zhì) （LlM） 懸液 50 微升。3.2 將加好樣的檢測卡入生科孵育器中孵育 15 分鐘。3.3 將孵育好的檢測卡放入生科離心機中離心 5 分鐘（ 1000r/min 2 min， 1800r/min 3 min），（離心必須在加樣后 30 分鐘內(nèi)進行）3.4 取出，判定結(jié)果（凝集強度判斷詳見結(jié)果判定示圖）二、新生兒溶血病血型血清學診斷（三項）

7、1. 患兒紅細胞直接抗人球蛋白試驗（微柱凝膠檢測法：抗人球蛋白檢測卡）1.1取患兒血液，離心，洗滌，取壓積紅細胞用生理鹽水配制成1%的紅細胞懸液。1.2在抗人球蛋白檢測卡上標注患兒的姓名或者編號，撕開卡上的鋁箔。1.3將50微升1 %紅細胞懸液加入到相應的孔中。1.4 離心 5 分鐘（1000r/min 2 min , 1800r/min 3 min ）。1.5取出，判定結(jié)果（凝集強度判斷詳見結(jié)果判定示圖）。2. 患兒紅細胞的放散試驗（微柱凝膠檢測法：抗人球蛋白檢測卡）采集患兒的血液標本，按照所檢抗體的不同，使用不同的方法的到放散液 （具體操作見附件）。 2.1取出試劑卡，檢測前確保試劑卡及樣

8、品完全平衡至室溫并標記，撕開試劑卡上的鋁箔帶，僅暴露試驗所需使用的反應腔2.2將50卩L 1% A B、O紅細胞LIM懸液加入相應的反應腔中。2.3向相應的反應腔中加入100卩泊勺放散液。2.4觀察反應腔內(nèi)的反應物是否混勻，如需要，輕彈微柱。2.5將加好樣的檢測卡入生科孵育器中孵育15分鐘。2.6將孵育好的檢測卡放入生科離心機中離心5分鐘（1000r/min 2 min, 1800r/min 3 min）。2.7取出，判定結(jié)果（凝集強度判斷詳見結(jié)果判定示圖）熱放散法：取1ML體積的壓積血用鹽水至少洗滌三次，最后一次盡量取凈，然后和等量或半量的生理鹽水混勻，置于56C孵育10分鐘，期間搖動數(shù)次，

9、迅速取出3500r/min離心2-3分鐘，立即取上清。即熱放散液。酸放散：詳細見酸放散試劑盒說明書。結(jié)果判讀AcBcOc指示細胞+游離的抗A抗體游離的抗B抗體+游離的抗A抗B抗體OO游離的ABO以外抗體無游離抗體3. 游離抗體試驗（微柱凝膠檢測法：抗人球蛋白檢測卡）游離試驗是新生兒出生后 7天內(nèi)，輔助診斷新生兒溶血病的試驗。單純游離試驗陽性,不能診斷igG抗體已經(jīng)致敏新生兒紅細胞。3.1取出試劑卡，使用前確保試劑卡完全平衡到室溫。3.2分別向反應柱內(nèi)加入 50ul 1%A、B O紅細胞LIM懸液。3.3最后向反應柱內(nèi)加入 100 ul嬰兒血清或血漿。注，加樣時，槍頭請勿觸碰微柱管壁。3.4觀察柱中的反應物各組分是否混勻，必要時輕彈幾下微柱充分，使反應物混勻。3.5將加好樣的檢測卡入生科孵育器中孵育15分鐘。3.6將孵育好的檢測卡放入生科離心機中離心5分鐘(1000r/min 2 min，1800r/min 3 min )。2.7取出，判定結(jié)果(凝集強度判斷詳見結(jié)果判定示圖)。結(jié)果判讀AcBcOc指示細胞+游離的抗A抗體游離的抗B抗體+游離的抗A抗B抗體OO游離的ABO以外抗體無游離抗體4. 新生兒溶血病血型血清學診斷直抗試驗游離試驗釋放試驗結(jié)論OOO不能證實為由血型免疫抗體引起的新生兒溶血病+OO可疑為新生兒溶