反相高效液相色譜法測定絞股藍50總皂苷提取物中蘆丁和槲皮素的含量

1、文檔收集于互聯(lián)網(wǎng)，已重新整理排版.word版本可編借，有幫助歡迎下載支持. 反相高效液相色譜法測定絞股藍50%總皂昔 提取物中蘆丁和栩皮素的含量 作者：盧金清，喻樊，田耀平，肖波，陳黎，徐玉婷， 詹曉蓮 【關鍵詞】絞股藍50%總皂昔提取物；，蘆丁；，撇皮素；，反 相高效液相色譜法， 摘要：目的建立絞股藍50%總皂菇提取物中蘆丁與桝皮素的 含量測定方法。方法采用高效液相色譜儀，使用TURNER KromasilTMCIS 色譜柱(250 mmX4.6mm, 5 Pm),流動相為0. 4%磷酸水溶液甲醇乙 月青進行梯度洗脫，流速為0.5mlmin-l,檢測波長為360 nm； 柱溫為40Co結果蘆

2、丁在0.373.70 u g范圍內有良好的線性關系， r二0.999 9o撇皮素在0. 050. 50 Hg范圍內有良好的線性關系， 0.999 9；蘆丁的平均加樣回收率為99. 2%, RSD為1.69%；獅皮素的 平均加樣回收率為99.1%, RSD為2.21%。結論該方法簡便快捷，準確 度高。 關鍵詞：絞股藍50%總皂昔提取物；蘆??；糊皮素；反相 高效液相色譜法 Determination of Rutin and Quercetin in 50% Total Gypenoside Extraction of Gynostemma by RPHPLC Abstract: Objectiv

3、eTo determine the main flavonoids rutin and quercetin in 50% total saponins of Gynostemma by RPHPLC. MethodsThe separation was performed on TURNER KromasilTMCIS column (250 mmX4. 6 mm, 5 Um), the mobile phase consisted of 0. 4% phosphoric acid- methanol-acetonitrile, with the following rate of 0. 5

4、mlmin-lat 40 C , the wavelength for measurement was 360 nm. ResuItsThe calibration curves were linear in the range of 0. 373. 70 U g for rutin (r=0. 999 9)and in the range of 0. 050. 50 Ug for quercetin (r=0. 999 9). The average recovery of compound rutin was 99.2%(RSD=1. 69%), and that of compound

5、quercetin was 99. 1% (RSD二2. 21%). ConclusionThis method is accurate and reproducible. Key words: 50% Total saponins of Gynostemma; Rutin; Quercetin; RPHPLC 絞股藍(Gynostenmia)又名七葉膽，是葫蘆科絞股藍屬植物。 該屬植物我國有14種和3變種1?，F(xiàn)代藥理學證明，絞股藍具有抑 制腫瘤、防止衰老、降低血脂、增強免疫力、鎮(zhèn)靜止痛、保護心臟和 肝臟等作用2。絞股藍50%總皂苗提取物是總皂苛含量達50%的、一 種適用于口服制劑生產的原料藥

6、，它具有很廣的應用范圍，故木文采 用反相高效液相色譜法，可對絞股藍50%總皂苛提取物中的蘆丁、榊 皮素等成分進行有效的分離和準確的含量測定，并且操作簡便、快速、 靈敏度高、重現(xiàn)性好，能為建立絞股藍50%總皂廿提取物的質量標準 提供依據(jù)。 1儀器與試藥 DIONEXP680高效液相色譜儀(四元泵、Chromel eon色譜工作 站、UVD170U檢測器），AT201電子分析天平（d=0.01 mg,瑞士），蘆 丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號0080 9705）、獅皮素對 照品（中國藥品生物制品檢定所，批號081-9003）；甲醇（色譜純， 天津大茂化學儀器供應站）、乙睛（色譜純，天津大茂

7、化學儀器供應站）, 其它試劑均為分析純，水為雙蒸水。絞股藍原50%總皂苛提取物由湖 北中醫(yī)學院中藥制劑教研室提供。 2方法與結果 2. 1 色譜條件色譜柱為 TURNER KromasilTM（4. 6 mmX250 mm, 5 Um）；以0.4%磷酸水溶液為流動相A,以甲醇為流動相B,以乙購 為流動相C；按表1進行梯度洗脫，檢測波長為360 nm；流速為0. 5 mlmin-l,柱溫為40C。理論板數(shù)按蘆丁、撇皮素峰計算應 不低于3 000o色譜圖見圖14。 表1梯度洗脫（略） 圖1蘆丁對照品HPLC圖譜（略） 圖2欄皮素對照品HPLC圖譜（略） 圖3絞股藍50%總皂苛提取物供試品的HPLC

8、圖譜（略） 圖4空白溶劑圖譜（略） 2.2供試品溶液的制備取本品0.2g,精密稱定，置具塞錐 形瓶中，精密加入甲醇50 ml,稱定重量，超聲處理30 min,放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，精密量取20 ml,蒸干，殘渣 用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù) 濾液，即得。 2.3對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制 成每毫升含0. 368 mg的溶液，即得蘆丁對照品溶液；精密稱取榊皮素 對照品適量，加甲醇制成每毫升含0. 054 8 mg的溶液，即得獅皮素對 照品溶液。 2.4標準曲線的制備分別精密吸取蘆丁、糊皮素對照品溶液 1.0, 2.0,

9、4.0, 6.0, 8.0, 10.0 H1,注入液相色譜儀，測定峰面積 值，結果見表1,以進樣量為橫坐標（X）,峰面積為縱坐標（Y）,繪 制標準曲線，得蘆丁的回歸方程為：y = 61.194 5x + 1. 100 4, r=0. 999 9；榊皮素的回歸方程為：y = 129.036 0X-0. 833 4, r二0. 999 9。線 性范圍：蘆丁為0.373. 70 ng；欄皮素為0.050.50 Ugo 圖5 蘆丁標準曲線（略） 圖6撇皮素標準曲線（略） 2.5精密度實驗取2.3項下蘆丁和糊皮素對照品溶液各5 U1,分別連續(xù)進樣5次，測定峰面積，結果見表23。蘆丁和榊皮 素的RSD分別

10、為:0. 08%和0. 26%o 表2蘆丁精密度實驗結果（略） 表3懈皮素精密度實驗結果（略） 2.6穩(wěn)定性實驗 取2. 2項下樣品溶液室溫放置0, 3, 6, 9, 12, 24 h后測定，結果見表45,測得蘆丁和桝皮素峰而積基本不變, RSD分別為1. 77%, 2. 80%,表明樣品溶液在24h之內穩(wěn)定。 表4蘆丁穩(wěn)定性實驗結果（略） 表5欄皮素穩(wěn)定性實驗結果（略） 2.7重復性實驗 取同一批樣品5份，照2. 2項下的方法依法 制備，測定樣品中蘆丁和榊皮素的含量，結果見表67。測得蘆丁和 攔皮素含量的分別為0. 955%和0. 222%, RSD分別為1. 29%和1. 71%。 2.8

11、加樣回收實驗 取已知含量的本品粉末6份，每份0. 1 g, 精密稱定，分別加入一定量的蘆丁、郴皮素對照品，按2. 2項下的方 法依法制備，按上述色譜條件進行測定，結果見表曠9。蘆丁加樣回 收率為99. 6%, RSD為1. 07%,榊皮素加樣回收率為99. 1%, RSD為2. 21%。 2.9樣品測定按2. 2項下方法配制樣品溶液5份，依法測定, 結果見表10o 表6蘆丁重復性實驗結果（略） 表7懈皮素重復性實驗結果（略） 表8蘆丁加樣回收實驗結果（略） 表9撇皮素加樣回收試驗結果（略） 表10 5批絞股藍藥材中蘆丁、榊皮素含量測定結果（略） 3討論 3.1提取方法的選擇在絞股藍原藥材蘆丁、

12、懈皮素的含量測 定中，我們曾對不同極性的提取溶劑（如：不同濃度的甲醇、不同濃 度的乙醇）和不同的提取方式（如：超聲、回流等）進行過考察，并 對提取時間進行了單因素實驗，綜合考慮以石油瞇回流提取，除去脂 溶性較大的成分，再以甲醇回流提取3 h實際工資效果最好。 3.2檢測波長的選擇在檢測波長選擇中根據(jù)對蘆丁對照品、 糊皮素對照品溶液紫外光譜的測定，在360 nm處有最大吸收，最終選 擇測定波長為360 nmo 3.3流動相的選擇流動相的選擇曾使用過乙月青-水、乙睛-甲 醇-水、甲醇-水、乙月青-0.4%磷酸等流動相進行等度及梯度洗脫，由于 干擾峰難以分離，最后根據(jù)分離情況選擇了表1中的流動相。絞股藍 50%總皂苛提取物色譜圖中除蘆丁、榊皮素的色譜峰外還有其他的色譜 峰，分離度也較好，亦可以作為指紋圖譜用于絞股藍50%總皂苛提取 物的鑒別。經(jīng)方法學驗證，此方法能對絞股藍50%總皂苛提取物中的 蘆丁、WI皮素進行有效的