《楊在清》04第4章酶

1、第 4章 酶 一、教學(xué)大綱基本要求 酶的化學(xué)本質(zhì)，酶催化反應(yīng)的特點(diǎn)，酶的活性中心，酶在細(xì)胞內(nèi)的分布特點(diǎn)；酶的習(xí)慣命名，酶的國(guó) 際系統(tǒng)命名，酶的系統(tǒng)分類及編號(hào)，按酶蛋白分子的組成分類，同工酶、誘導(dǎo)酶；酶催化反應(yīng)高效性的機(jī) 理，酶催化反應(yīng)專一性的機(jī)理，酶作用機(jī)理舉例；底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響，pH 值對(duì)酶促反應(yīng)速度 的影響，溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響，酶的濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響，激活劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響， 抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響，有機(jī)介質(zhì)中的酶促反應(yīng)；別構(gòu)效應(yīng)調(diào)節(jié)，共價(jià)調(diào)節(jié)，酶原的激活，多酶體 系調(diào)節(jié)。 二、本章知識(shí)要點(diǎn) 1酶的基本概念 酶是一類具有高催化效率、高度專一性、活性可以調(diào)節(jié)的

2、高分子生物催化劑。除了一些具有催化功能 的RNA以外，絕大部分的酶都是蛋白質(zhì)或帶有輔助因子的蛋白質(zhì)。 在生物體內(nèi)，種類繁多的酶使得各種代謝反應(yīng)迅速而有序的進(jìn)行。 2酶催化的特點(diǎn) (1) 催化效率高，酶催化反應(yīng)速度是相應(yīng)的無催化反應(yīng)速度的108-1020 倍，并且至少高出非酶催化反應(yīng)速 度幾個(gè)數(shù)量級(jí)。 (2) 專一性高，酶對(duì)反應(yīng)的底物和產(chǎn)物都有極高的專一性，幾乎沒有副反應(yīng)發(fā)生。 (3) 反應(yīng)條件溫和，溫度低于 100 C,正常大氣壓，接近中性 pH環(huán)境。 ( 4)酶的催化活性可以調(diào)節(jié)，根據(jù)生物體的需要，酶的活性受到多種調(diào)節(jié)機(jī)制的靈活調(diào)節(jié)。主要有反饋 抑制調(diào)節(jié)、抑制劑和激活劑對(duì)酶活性的調(diào)節(jié)、別構(gòu)調(diào)

3、節(jié)、酶的共價(jià)修飾調(diào)節(jié)、酶的合成和酶的活化與降解 等。 ( 5)容易失活，高溫、高壓、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和重金屬鹽等因素都可能使 3酶與非酶催化劑相比的幾點(diǎn)共性 ( 1 )催化效率高，含量低。 ( 2)只改變化學(xué)反應(yīng)速度，不改變化學(xué)反應(yīng)平衡點(diǎn)。 ( 3)降低反應(yīng)的活化能。 ( 4)反應(yīng)前后自身的結(jié)構(gòu)不變。 催化劑改變了化學(xué)反應(yīng)的途徑，使得反應(yīng)通過一條活化能比原來途徑低的途徑進(jìn)行。催化劑的作用只 反映在動(dòng)力學(xué)上，即加快反應(yīng)速度，但不影響反應(yīng)的熱力學(xué)，即不能改變化學(xué)平衡。 4酶的化學(xué)本質(zhì) （1）組成 酶的主要成分是蛋白質(zhì)。有些酶僅由蛋白質(zhì)組成，例如脲酶、溶菌酶、淀粉酶、脂肪酶和核糖核酸酶 等 有些酶不僅含有

4、蛋白質(zhì) （稱為脫輔酶） ，還含有非蛋白質(zhì)成分， 稱為輔助因子。 脫輔酶與輔助因子結(jié)合， 形成全酶以后才具有催化活性。例如，過氧化物歧化酶與輔助因子Cu2+、Zn2+M合，乳酸脫氫酶與輔助因子 naD吉合。 （2）酶的輔助因子 酶的輔助因子可以分為輔酶和輔基。輔酶是指與脫輔酶吉合比較松的小分子有機(jī)物，可以用透析法除 去，例如輔酶I和輔酶n。輔基是指以共價(jià)鍵和脫輔酶結(jié)合，不能用透析法除去的輔助因子，例如丙酮酸 氧化酶中的黃素腺嘌呤二核苷酸。 酶蛋白（脫輔酶）決定酶的專一性（選擇底物） ，輔助因子決定酶促反應(yīng)的類型（氧化還原、水解或基 團(tuán)轉(zhuǎn)移等）。例如naD可與多種脫輔酶結(jié)合，分別組成專一性強(qiáng)的乳酸

5、脫氫酶、醇脫氫酶、蘋果酸脫氫酶 和異檸檬酸脫氫酶。這些酶催化的底物不同，但是反應(yīng)的類型都是氧化還原反應(yīng)。 5酶的分類 （ 1）氧化還原酶類，催化氧化還原反應(yīng)。例如乳酸脫氫酶。 （2）轉(zhuǎn)移酶類，催化基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)，例如谷丙轉(zhuǎn)氨酶。 （3）水解酶類，催化水解反應(yīng)，例如淀粉酶和白酶。 （4）裂合酶類（裂解酶） ，催化從底物上移去一個(gè)基團(tuán)而形成雙鍵的反應(yīng)或其逆反應(yīng)，例如醛縮酶。 （ 5）異構(gòu)酶，催化同分異構(gòu)體相互轉(zhuǎn)化，例如6- 磷酸葡萄糖異構(gòu)酶。 （6）合成酶（連接酶），催化一切必須與 ATP分解相偶聯(lián)、并由兩種物質(zhì)合成一種物質(zhì)的反應(yīng)，例如CTP 合成酶。 根據(jù)酶蛋白的特點(diǎn)還可以將酶蛋白分為： （1）單

6、體酶一般由一條肽鏈組成，例如溶菌酶和牛胰核糖核酸酶。有些單體酶由多條肽鏈組成，肽鏈 鍵有二硫鍵連接，例如胰凝乳蛋白酶。 （ 2）寡聚酶兩個(gè)或兩個(gè)以上亞基組成的酶。寡聚酶中有很多是調(diào)節(jié)酶，在代謝調(diào)控中起重要作用。大 多數(shù)寡聚酶是胞內(nèi)酶，而胞外酶一般是單體酶。 （ 3）多酶復(fù)合體幾種不同的酶依靠非共價(jià)鍵聚集在一起，往往催化一個(gè)連續(xù)的多步反應(yīng)，可以方便調(diào) 控和提高催化效率。 6酶的專一性 一種化合物能成為某種酶的底物，必須具備兩個(gè)條件：該分子上有被酶作用的化學(xué)鍵以及有一個(gè)或多 個(gè)結(jié)合基團(tuán)能與酶活性中心結(jié)合。酶專一性的類型有多種。 （1）結(jié)構(gòu)專一性 鍵專一性 （對(duì)底物的結(jié)構(gòu)要求最低） 酶只對(duì)其作用的鍵

7、的類型有限制， 而對(duì)鍵兩側(cè)基團(tuán)的種類沒有 特殊限制。例如酯酶可催化酯鍵（R CO OR ）水解，對(duì)酯鍵兩側(cè)的 R和R基團(tuán)的結(jié)構(gòu)沒有限制。 基團(tuán)專一性 酶不僅對(duì)鍵的類型有限制， 還對(duì)鍵一端基團(tuán)的種類有限制， 但對(duì)另一端的基團(tuán)限制不嚴(yán) 格。例如a - 葡萄糖苷酶，不僅要求作用的鍵是a -糖苷鍵，而且要求此鍵一端必須是葡萄糖殘基， 而對(duì)此鍵另一端的基團(tuán)無限制，可以是水解蔗糖或麥芽糖。 絕對(duì)專一性 一種酶只能作用于一個(gè)底物， 或只催化一個(gè)反應(yīng)。 例如大麥芽中的麥芽糖酶只作用于麥 芽糖，脲酶只催化尿素水解。 （ 2）立體異構(gòu)專一性 旋光異構(gòu)專一性 當(dāng)?shù)孜锞哂行猱悩?gòu)體時(shí)， 酶只能作用于其中的一種異構(gòu)體。

8、 例如谷氨酸脫氫酶只 作用于L Glu，乳酸脫氫酶只作用 L 乳酸。 幾何異構(gòu)專一性 這種專一性能夠區(qū)分順反異構(gòu)體。例如反丁烯二酸酶只催化反丁烯二酸生成蘋果 酸，對(duì)順丁烯二酸無作用。 立體化學(xué)專一性還表現(xiàn)在酶能區(qū)分從有機(jī)化學(xué)觀點(diǎn)看屬于對(duì)稱分子中的兩個(gè)等同的基團(tuán)，只催化其中 一個(gè)，而對(duì)另一個(gè)無作用。例如糖代謝中的順烏頭酸酶作用于檸檬酸時(shí)，兩個(gè)CH2COOH寸順烏頭酸酶 來說是不同的。 7酶的專一性假說 （ 1）三點(diǎn)結(jié)合及鎖鑰模型（剛性模板學(xué)說） 酶的活性中心在酶分子表面的凹槽或空穴中，它的形狀與底物分子的形狀互補(bǔ)。底物分子或其一部分 像鑰匙一樣，可以專一地插入酶活性中心，通過多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)與酶結(jié)合

9、，形成酶底復(fù)合物，使得酶活性 中心的催化基團(tuán)正好對(duì)準(zhǔn)底物的敏感鍵，進(jìn)行催化反應(yīng)。 三點(diǎn)結(jié)合學(xué)說指出，底物分子與酶活性中心的基團(tuán)必須三點(diǎn)都互補(bǔ)匹配，酶才能作用于這個(gè)底物。 （ 2）誘導(dǎo)楔合模型 酶分子與底物分子接近時(shí)，酶蛋白受底物分子誘導(dǎo)，構(gòu)象發(fā)生有利于與底物結(jié)合的變化，酶與底物在 此基礎(chǔ)上互補(bǔ)楔合，進(jìn)行催化反應(yīng)。 8酶的活力 有些酶的分子量還不確切。通常用酶催化反應(yīng)速度的大小來表示酶的活力。酶催化反應(yīng)的速度快，酶的活 力越高。 （ 2）酶促反應(yīng)速度用單位時(shí)間內(nèi)、單位體積中底物的減少量或產(chǎn)物的增加量表示酶促反應(yīng)速度。酶促 反應(yīng)速度以初速度為準(zhǔn)，因?yàn)榈孜餄舛鹊慕档?、酶的部分失活、產(chǎn)物抑制和逆反應(yīng)等

10、因素，都會(huì)使反應(yīng)速 度隨反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。 （ 3）酶的活力單位（ U） 國(guó)際酶學(xué)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)單位：在特定條件下， 1 分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化 1umol 底物的酶量，稱 一個(gè)國(guó)際單位（IU ）。特定條件是25C, pH及底物濃度采用最適條件。 實(shí)際工作中，每一種酶的測(cè)定活力的方法不同，對(duì)酶單位分別有一個(gè)明確的定義。同一種酶采用不同 的測(cè)活方法，得到的酶活力單位是不同的。 （ 4）酶的比活力每毫克酶蛋白所具有的酶活力，單位是 U/mg 蛋白質(zhì)，可以用來表示酶的純度。有時(shí) 也用每克酶制劑或每毫升酶制劑含有的活力單位表示。 通常在酶的分離、純化過程中，總的酶蛋白的量減少，總的酶活力減少，但是酶的比活力增高。

11、（ 5）酶的轉(zhuǎn)換數(shù)和催化周期 分子活性定義：每摩爾的酶在1 秒鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化底物的摩爾數(shù)。 亞基或催化中心活性定義：每摩爾的活性亞基或活性中心在1 秒鐘內(nèi)轉(zhuǎn)化底物的摩爾數(shù)。 轉(zhuǎn)換數(shù)的倒數(shù)是催化周期，表示一個(gè)酶分子每催化一個(gè)底物分子所需要的時(shí)間。例如乳糖脫氫酶轉(zhuǎn)換 數(shù) 1000/ 秒，則它的催化周期是 10-3 秒。 9酶的分離純化 酶的分離純化原則與蛋白質(zhì)的分離純化相同?？梢杂每偦盍Φ幕厥章屎捅然盍Φ奶岣弑稊?shù)這兩個(gè)指標(biāo) 來判斷分離純化的效果。 分離純化步驟： （ 1）選材選擇含酶量豐富的新鮮的材料。 （ 2）破碎分別采用不同的方法破碎動(dòng)物、植物、微生物細(xì)胞。 （ 3）提取用低溫、低鹽緩沖液提取組織勻

12、漿液中的酶，得到酶的初提液。 （ 4）分離純化在低溫條件下，用各種分離純化蛋白質(zhì)的方法分離純化初提液中的酶。先用鹽析、等電 點(diǎn)沉淀、有機(jī)溶劑沉淀等方法初步分離純化，再用吸附層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、親和層析、 高效液相層析和制備電泳技術(shù)等方法進(jìn)一步分離純化，得到純酶溶液。 （5）結(jié)晶調(diào)節(jié)純酶液的pH,制備酶的晶體。 （ 6）保存如果無法得到結(jié)晶，可以將純酶液除鹽，凍干后低溫保存。也可將酶液制成25%或 50的甘 油儲(chǔ)存液，在25C或50C冰箱中保存。 10.米氏方程 米氏方程表示酶促反應(yīng)的初速度與底物濃度的關(guān)系。米氏方程只適用于單底物酶促反應(yīng)。單底物酶促 反應(yīng)包括異構(gòu)酶、水解酶及大部分

13、裂合酶催化的反應(yīng)。 中間絡(luò)合物學(xué)說：酶在催化化學(xué)反應(yīng)時(shí)先與底物結(jié)合，形成中間復(fù)合物(ES,然后生成產(chǎn)物(P),并 釋放出酶。 米氏方的程討論： (1) 米氏常數(shù)Km的意義 K m表示酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度的一半時(shí)底物的濃度。Km的單位與底物 濃度的單位一致(mol L-1或m mol L-1 )。 K m是酶的特征常數(shù)，Km的大小只與酶的性質(zhì)有關(guān)，與酶的濃度無關(guān)。 (2) Km可表示酶與底物的親和力如果一個(gè)酶有幾種底物，則每一種底物各有一個(gè)特定的Kn值，其中Km 值最小的底物稱該酶的最適底物或一天然底物。 K m越小，達(dá)到最大反應(yīng)速度一半所需的底物濃度愈小，表示底物與酶的親和力越大。 (

14、3) 相對(duì)速度(酶活性中心被占據(jù)分?jǐn)?shù)Ys) 當(dāng)反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度時(shí)，此時(shí)的反應(yīng)速度與底物濃度無關(guān)，只與總酶濃度成正比。這表明此 時(shí)酶的活性中心已經(jīng)全部被底物占據(jù)。當(dāng)反應(yīng)速度達(dá)到最大反應(yīng)速度的一半時(shí)，表明此時(shí)酶的部位有一半 被占據(jù)。 當(dāng)一個(gè)酶的Km已知時(shí)，任何底物濃度下酶活性部位被占據(jù)分?jǐn)?shù)為： (4) 米氏方程所作曲線的曲度，不隨Km和Vmax變化而變化。因此任何米氏酶，到達(dá)任何兩個(gè)特定最大反應(yīng) Ys V V max S Km S 速度分?jǐn)?shù)的時(shí)，對(duì)應(yīng)的底物濃度之比為常數(shù)。 設(shè)達(dá)到最大反應(yīng)速度的 0.9倍時(shí)，所需底物濃度為 S 0.9。根據(jù)米氏方程得到S 0.9=9Km S 0.8=4Km,

15、 S 0.7=2.33Km, S 0.6=1.5Km, S 0.5=1Km和S 0.1 =1/9K m。因此S 0.9 / S0.1 =81 , S 0.7 /S 0.1=21。 (5)雙倒數(shù)作圖法計(jì)算 Km和 Vmax 對(duì)米氏方程兩邊取倒數(shù)，即將實(shí)驗(yàn)所得的初速度數(shù)據(jù)v和S取倒數(shù)，得各種1/v和1/S值，將1/v 對(duì)1/S作圖，得一直線。 1 橫線距= 縱截距= V max Km 斜率= Km V max 11 多底物酶促反應(yīng)的類型 米氏方程只適用于單底物酶促反應(yīng)，如異構(gòu)、水解及大部分裂合反應(yīng)，不適用于多底物酶促反應(yīng)。 按照底物與酶的結(jié)合順序，分別用A、B表示不同的底物；按照產(chǎn)物從酶一產(chǎn)物復(fù)合

16、物中的釋放順序， 分別用P、Q表示不同的產(chǎn)物。 (1) 有序順序反應(yīng) 2個(gè)底物與酶結(jié)合的先后順序，以及2個(gè)產(chǎn)物從酶底復(fù)合物中釋放的順序都有嚴(yán)格 的限制。底物 A先與酶結(jié)合，然后底物 B再與酶結(jié)合，A為領(lǐng)先底物。產(chǎn)物 P先釋放，產(chǎn)物 Q后釋放。例 如乙醇脫氫酶。 (2) 隨機(jī)順序反應(yīng) 2 個(gè)底物與酶結(jié)合時(shí)沒有先后順序，2個(gè)產(chǎn)物從酶底復(fù)合物中釋放時(shí)也沒有嚴(yán)格先 后順序。 (3) 乒乓反應(yīng)底物A先與酶結(jié)合，生成產(chǎn)物 P,當(dāng)產(chǎn)物P釋放以后，底物 B再與酶結(jié)合，生成并釋放 產(chǎn)物Q。例如谷丙轉(zhuǎn)氨酶。 12.酶的抑制作用 大多數(shù)都酶是蛋白質(zhì)，使酶蛋白變性而引起酶活力喪失的作用稱為酶的失活作用。 使酶活力下降

17、，但并不引起酶蛋白變性的作用稱為抑制作用。抑制作用分為不可逆抑制作用和可逆抑 制作用。 抑制劑：不引起酶蛋白變性，但是能使酶分子活性中心上某些基團(tuán)發(fā)生變化，引起酶活性下降甚至喪 失，此類物質(zhì)稱為酶的抑制劑。 (1)不可逆抑制作用 抑制劑與酶活性中心的必需基團(tuán)共價(jià)結(jié)合，使酶的活性喪失，不能用透析、過濾等物理方法除去抑制 劑而使酶恢復(fù)活性。 非專一性不可逆抑制：此類抑制劑可以與一類或幾類基團(tuán)反應(yīng)。它們不僅能和酶分子中的必需基團(tuán)作 用，同時(shí)也能和相應(yīng)的非必需基團(tuán)作用。主要有?；瘎⑼榛瘎?、含活潑雙鍵試劑、親電試劑、還原劑、 有機(jī)汞、有機(jī)砷、氰化物和重金屬。 專一性不可逆抑制：此類抑制劑僅僅與活性部位

18、的相關(guān)基團(tuán)反應(yīng)。 專一性不可逆抑制劑可以分為 Ks型專一性不可逆抑制和 Kcat型專一性不可逆抑制劑。 (2) 可逆抑制作用 抑制劑與酶以非共價(jià)鍵結(jié)合，引起酶活性的降低或喪失。可逆抑制劑與酶蛋白的結(jié)合是可逆的，可以用透折法除去抑制劑，恢復(fù)酶的活性?？赡嬉种谱饔梅譃楦?jìng)爭(zhēng)性抑制、非競(jìng)爭(zhēng)性抑制和反競(jìng)爭(zhēng)性抑制。 競(jìng)爭(zhēng)性抑制抑制劑與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心，阻止底物與酶結(jié)合。競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑具有與底物類似的 結(jié)構(gòu)，可與酶形成可逆的 EI復(fù)合物。增加底物濃度可以減小或解除此種抑制。 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制酶與底物結(jié)合后，可再與抑制劑結(jié)合；或者酶與抑制劑結(jié)合后，也可再與底物結(jié)合。 (2)非競(jìng)爭(zhēng)性抑制 抑制劑與酶活性中的以外的

19、位點(diǎn)結(jié)合，抑制劑結(jié)構(gòu)可能與底物無關(guān)。 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制 酶只有在與底物結(jié)合后，才能與抑制劑結(jié)合。 13.酶抑制動(dòng)力學(xué) (1)競(jìng)爭(zhēng)性抑制 在再競(jìng)爭(zhēng)性抑制屮，底物或抑制劑與酶的結(jié)合都是可逆的。加入競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑后，Vmax 不變，Km變大。 酶與底物結(jié)合后，可以再與抑制劑結(jié)合；酶與抑制劑結(jié)合后，也可以再與底物結(jié)合。 加入非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑后, Vmax變小，Km不變。 (3)反競(jìng)爭(zhēng)性抑制 酶先與底物結(jié)合，然后才與抑制劑結(jié)合。加入反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑后， Vmax和K都變小。 14. 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響 酶促反應(yīng)的速度在某一溫度下達(dá)到最大值，這個(gè)溫度稱為酶的最適溫度。溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響有兩 個(gè)方面：升高溫度

20、可以加快反應(yīng)速度；超過最適溫度后，酶蛋白開始變性失活，催化活性下降。這兩種因 素共同作用，在小于最適溫度時(shí)，前一種因素為主；在大于最適溫度時(shí)，后一種因素為主。 15. pH對(duì)酶促反應(yīng)的影響 酶的催化活性受到環(huán)境 pH的影響，在一定pH環(huán)境下酶的活性最大，而高于或低于此pH值時(shí)，酶的活 性會(huì)降低。通常把酶表現(xiàn)出最大活力時(shí)的pH值稱為該酶的最適 pHo pH影響酶促反速度的原因： (1) 過酸或過堿會(huì)破壞酶蛋白的空間結(jié)構(gòu)，改變酶分子的構(gòu)象，使酶的活性喪失。 (2) pH變化會(huì)改變酶分子和底物分子解離狀態(tài)，影響酶與底物的結(jié)合與催化，降低酶活性。 (3) pH變化會(huì)影響維持酶分子空間結(jié)構(gòu)的相關(guān)基團(tuán)的解

21、離，從而影響酶活性中心的構(gòu)象，降低酶活性。 16酶的激活 凡是能提高酶活性的物質(zhì)，都稱為酶的激活劑。酶的激活作用包括兩種情況：一種是由于激活劑的存 在，使一些本來有活性的酶活性進(jìn)一步提高，這一類激活劑主要是離子或簡(jiǎn)單有機(jī)化合物。另一種是酶原 的激活，這一類激活劑可能是離子或蛋白酶。 生物體內(nèi)合成的酶，有時(shí)不具有生物活性，經(jīng)過蛋白酶專一水解后，構(gòu)象發(fā)生變化，形成酶的活性部 位，變成有活性的酶。這些不具有活性的酶的前體稱為酶原。消化系統(tǒng)的胰凝乳蛋白酶、彈性蛋白酶和羧 肽酶等，它們都以酶原的形式在胰臟中儲(chǔ)存。 17酶的活性部位 酶的催化能力只局限在酶分子的一定區(qū)域，只有少數(shù)的氨基酸參與底物結(jié)合及催化

22、作用。這個(gè)與酶活 力直接相關(guān)的區(qū)域稱為酶的活性部位或活性中心。 酶的活性部位可以分為結(jié)合部位和催化部位。結(jié)合部位負(fù)責(zé)與底物結(jié)合，催化部位負(fù)責(zé)催化底物鍵的 斷裂和新鍵的形成，決定酶的催化能力。 酶活性部位的特點(diǎn)： （ 1）活性部位通常只占酶分子體積的 1 2。 （2）酶的活性部位是一個(gè)三維實(shí)體。 （ 3）酶的活性部位并不是與底物的形狀正好構(gòu)象互補(bǔ)，而是在酶和底物的結(jié)合過程中，底物分子或酶分 子的構(gòu)象發(fā)生變化后構(gòu)象互補(bǔ)。 （4）酶的活性部位位于酶分子表面的一個(gè)裂隙內(nèi)。 （5）底物通過次級(jí)鍵結(jié)合到酶分子上。 （6）酶的活性部位具有柔性或可運(yùn)動(dòng)性。 18酶催化反應(yīng)高效性的機(jī)理 （1）底物與酶鄰近效應(yīng)與

23、定向效應(yīng) 鄰近效應(yīng)顯著提高了酶活性中心附近底物的濃度，定向效應(yīng)使酶活性中心附近反應(yīng)基團(tuán)的分子軌道以 正確方位相互交疊，使分子間反應(yīng)轉(zhuǎn)變成分子內(nèi)反應(yīng)，這兩種效應(yīng)大大提高了酶的催化效率。 （2）扭曲變形和構(gòu)象變化的催化效應(yīng) 酶與底物形成酶底復(fù)合物時(shí)，酶分子中某些基團(tuán)可使底物分子的敏感鍵中某些基團(tuán)的電子云密度發(fā)生 變化，產(chǎn)生電子張力，使底物的構(gòu)象發(fā)生變化，變得更接近過渡態(tài)，大大降低了反應(yīng)的活化能。 （3）共價(jià)催化 共價(jià)催化有親核共價(jià)催化和親電共價(jià)催化。酶分子種的親核基團(tuán)或親電基團(tuán)能分別放出電子或接受電 子，使得酶與底物形成一個(gè)不穩(wěn)定的共價(jià)中間物，此中間物易變成過渡態(tài)，降低了反應(yīng)活化能，提高了反 應(yīng)速

24、度。 （4）酸堿催化 酸堿催化是通過瞬時(shí)的向底物提供質(zhì)子或從底物接受質(zhì)子以穩(wěn)定過渡態(tài)，提高反應(yīng)的速度底一類催化 機(jī)制。酸堿的強(qiáng)度和給出質(zhì)子或結(jié)合質(zhì)子的速度影響酸堿催化反應(yīng)的速度。 （ 5）金屬離子催化 金屬離子可以通過三種途徑參加催化過程。通過底物為反應(yīng)定向，通過可逆地改變金屬離子的氧化態(tài) 調(diào)節(jié)氧化還有反應(yīng)，通過靜電穩(wěn)定或屏蔽負(fù)電荷。 （6）活性中心的微環(huán)境 疏水環(huán)境：酶活性中心附近往往是一個(gè)疏水的環(huán)境，介電常數(shù)低，可加強(qiáng)極性基團(tuán)間的反應(yīng)。 電荷環(huán)境：酶活性中心附近，往往有一個(gè)電荷離子，可穩(wěn)定過渡態(tài)的離子，增加酶促反應(yīng)速度。 酶催化反應(yīng)的高效性是由于上述幾種因素協(xié)同作用的結(jié)果，而非酶催化反應(yīng)往

25、往只有一種催化機(jī)制。 19別構(gòu)調(diào)節(jié) 調(diào)節(jié)物（效應(yīng)物）與酶分子的非催化部位可逆地非共價(jià)結(jié)合，使得酶分子的構(gòu)象發(fā)生變化，引起酶催 化活性的改變，從而調(diào)節(jié)酶促反應(yīng)的速度。 別構(gòu)酶一般都是寡聚酶，表明當(dāng)?shù)孜餄舛劝l(fā)生較小變化時(shí)，如上升 3 倍，別構(gòu)酶的酶促反應(yīng)速度可以 從O.lVmax升至0.9Vmax。這種S形曲線體現(xiàn)為，當(dāng)?shù)孜餄舛劝l(fā)生較小變化時(shí)，別構(gòu)酶可以極大程度地控制 反應(yīng)速度，這是別構(gòu)酶可以靈活地調(diào)節(jié)反應(yīng)速度的原因。 別構(gòu)酶調(diào)節(jié)活性的機(jī)理： （1）序變模型酶分子中亞基結(jié)合底物后，構(gòu)象逐個(gè)地依次變化。 當(dāng)?shù)孜锱c第一個(gè)亞基結(jié)合以后，可以引起該亞基的構(gòu)象變化，從T態(tài)變?yōu)镽態(tài)，并使得鄰近的一個(gè)亞基發(fā) 生

26、同樣的構(gòu)象變化，影響對(duì)下一個(gè)底物的親和力。當(dāng)?shù)诙€(gè)底物結(jié)合后，又可以導(dǎo)致第三個(gè)亞基從T態(tài)變 為R態(tài)，如此順序傳遞，直到最后所有的亞基都從T態(tài)變?yōu)镽態(tài)。在這個(gè)序變過程中，有各種 TR型雜合 態(tài)。 （2）齊變模型 酶分子中的一個(gè)亞基結(jié)合底物以后，構(gòu)象發(fā)生變化，從T態(tài)變?yōu)镽態(tài)，使得其它的亞基 也幾乎同時(shí)從 T態(tài)變?yōu)镽態(tài)。在這個(gè)齊變過程中，不存在 TR雜合態(tài)。 20可逆的共價(jià)修飾 這種調(diào)控作用通過共價(jià)調(diào)節(jié)酶進(jìn)行。共價(jià)調(diào)節(jié)酶上的某些基團(tuán)被其它的酶共價(jià)修飾后，其活性狀態(tài)發(fā) 生改變，這種共價(jià)修飾是可逆的。 蛋白質(zhì)的磷酸化與脫磷酸化過程是生物體內(nèi)普遍的調(diào)節(jié)方式。 21同工酶 同工酶是指催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但其

27、蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫性能的方面都存在明顯差異 的一組酶。 同工酶不僅存在于同一個(gè)體的不同組織中，甚至存在于同一組織、同一細(xì)胞的不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中。 三重點(diǎn)、難點(diǎn) 重點(diǎn) : 酶催化反應(yīng)高效性的機(jī)理，酶催化反應(yīng)專一性的機(jī)理，酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，可逆抑制作用，酶活 性的調(diào)節(jié)。 難點(diǎn)： 酶促反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)方程，酶活性的調(diào)節(jié)。 四、典型例題解析 例題4-1：當(dāng)酶促反應(yīng)速度為 Vmax的80%寸，S與Km之比是多少？ 解：根據(jù)米氏方程 = VmaxS得知， Km+S 當(dāng)Km值(10 mol L)遠(yuǎn)小于S(10 -1 mol L)時(shí)，Km值可略去不計(jì)，因此，此時(shí)的初速度實(shí)際上就是 V,ax=10 mol

28、min。在S為 102mol L 和 10-3mol L，與 心比較，也可相對(duì)地忽略， 則=Vmax S=10 7mol L 時(shí)，代入上式得.=Vmax 2=5 10 mol min。 例題4-2:簡(jiǎn)述酶活的性調(diào)節(jié)方式。 解：酶活性的調(diào)節(jié)方式是多種多樣的。主要可以分為兩大類。 (1) 酶的含量不變，通過改變酶蛋白的結(jié)構(gòu)，或酶蛋白各亞基的解離與裝配，以及和其它蛋白質(zhì)的相互 作用而實(shí)現(xiàn)的調(diào)節(jié)。主要有：別構(gòu)調(diào)節(jié)酶分子的非催化部位與某些化合物可逆地非共價(jià)結(jié)合后發(fā)生 構(gòu)象的改變，進(jìn)而改變酶的活性狀態(tài)?？赡娴墓矁r(jià)修飾調(diào)節(jié)共價(jià)調(diào)節(jié)酶上的某些基團(tuán)可以被其它的 酶可逆共價(jià)修飾，使其處于活性與非活性的互變狀態(tài)，從

29、而調(diào)節(jié)酶的活性。酶原的激活生物體內(nèi)合成 的酶有時(shí)不具有酶活性，經(jīng)過蛋白酶專一水解后，構(gòu)象發(fā)生變化，形成酶的活性部位，變成有活性的酶。 通過激素調(diào)節(jié)酶的活性激素與細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)受體結(jié)合，引起一系列生物化學(xué)反應(yīng)，以此來調(diào)節(jié)酶 的活性。 此外還有反饋抑制調(diào)節(jié)、抑制劑和激活劑對(duì)酶活性的調(diào)節(jié)。 (2) 酶量的調(diào)節(jié)，這類調(diào)節(jié)主要涉及酶蛋白的表達(dá)調(diào)控。從RNA的轉(zhuǎn)錄、加工，至憔白質(zhì)的合成、轉(zhuǎn)運(yùn) 等各個(gè)水平的調(diào)控。酶量的調(diào)節(jié)主要有兩種形式，一種是誘導(dǎo)或抑制酶的合成，另一種是調(diào)節(jié)酶的降解速 度。 例題4-3:以胰凝乳蛋白酶為例，簡(jiǎn)述酶原的激活過程。 解：在胰蛋白酶的作用下，胰凝乳蛋白酶原被限制性酶解，使得Arg

30、15 Ile16兩個(gè)殘基間的肽鍵斷裂， 生成具有活性的但不穩(wěn)定的二胰凝乳蛋白酶。二胰凝乳蛋白酶自我切除Ser14 Arg15和Thr147 Asn148兩 段二肽，生成具有活性的穩(wěn)定的：胰凝乳蛋白酶。同時(shí)，激活產(chǎn)物的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，新暴露的Ile16 的氨基與分子內(nèi)部的 Asp194的側(cè)鏈羧基之間的靜電作用導(dǎo)致Met192外翻到分子表面，形成酶的底物結(jié)合 部位。 例題4-4:如果當(dāng)抑制劑濃度增加時(shí)，酶對(duì)其底物的Km保持不變，你對(duì)這種抑制方式能說些什么？ 解：此抑制劑的作用屬于非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，因?yàn)橐种苿舛仍黾訒r(shí)，被結(jié)合的底物比例保持不變。 例題4-5:酶溶液在加熱時(shí)，酶的活性會(huì)逐漸喪失。己糖激

31、酶在45C加熱12分鐘后，活性喪失 50%。但是 如果己糖激酶溶液中有大量的底物(葡萄糖)存在時(shí)，在45加熱12分鐘后，活性只喪失3%。 底物存在時(shí)，己糖激酶的熱變性會(huì)受到抑制？ 解：沒有底物時(shí)，酶分子以游離狀態(tài)存在。有大量底物時(shí)，大多數(shù)酶分子與底物形成酶-底復(fù)合物。在加 熱時(shí)，酶-底復(fù)合物的熱穩(wěn)定性比游離的酶高，酶分子不易發(fā)生熱變性，活性喪失不大。 例題4-6:當(dāng)酶促反應(yīng)速度為 Vmax的80%寸，S與Km之比是多少？ 解：根據(jù)米氏方程 V S = V max - Km S 將0.8V max代替式中得： 0.8S+0.8Km=S 經(jīng)整理 S=4 Km 例題 4-7:一個(gè)酶促反應(yīng)，Vmax為

32、6.0Wmol L_1min 一1,K為1.0 10_3molK1,計(jì)算當(dāng)S=5.0 L-1,非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑l=22.510-5mol L -1 ( K=2.5 105mol L -1)時(shí)的反應(yīng)初速度。 解：非競(jìng)爭(zhēng)性抑制時(shí)，酶促反應(yīng)初速度： VmaxS6.0X10 上 X5.0X10 鼻 V0= (Km s)(1 -)(1.0 10” 5.0 10 4)(1 225 10 5 ) Ki25X10 =2.010_7mol L _1min-1 例題4-8:在一個(gè)級(jí)聯(lián)反應(yīng)(見下圖)中，活性酶A激活無活性酶 B,而活性酶B又激活無活性酶 被激活。假定該途徑中每個(gè)酶的轉(zhuǎn)換數(shù)是103mi n。問每分鐘內(nèi)將

33、有多少酶D分子被激活？ A活性 B A B無活性B活性 f J C無活性C活性 C無活性D活性 假設(shè)的級(jí)聯(lián)反應(yīng) 3339 解：1 103 103 103 = 109 個(gè)分子 min 為什么有 10_4mol C,直到D 解：組氨酸殘基可以起親核物質(zhì)及廣義酸或堿作用。因?yàn)?pK值在6 -7左右，這樣組氨酸殘基在生理pH 例題4-9:為什么說組氨酸殘基在涉及酶促反應(yīng)機(jī)理方面是一個(gè)特別重要的殘基？ 下能被質(zhì)子化或去質(zhì)子化；它能提供質(zhì)子或者接受質(zhì)子，具有很強(qiáng)的酸堿催化能力。 例題4-10:計(jì)算Hill系數(shù)n=2.0的別構(gòu)酶在0.9Vmax和0.嘰滅時(shí)底物濃度的比值S 0.9 S 0.1。 解：因?yàn)?.

34、9 =n81 So.i 所以，當(dāng)n=2.0時(shí), 1 同0.9 =2. 81 =（ 81） S 0.1 log 0.9 =丄log 81 =0.5 1.91 =0.955 S0.1 2 同 0.9 =9.0 S 0.1 例題4-11: 一個(gè)純酶，在對(duì)水透析時(shí)會(huì)失去活性。這種現(xiàn)象可能會(huì)有2種原因：（1）透析除去了必要的輔 助因子，（2）在低離子強(qiáng)度溶液中酶去折疊。試通過實(shí)驗(yàn)確定確切的原因。 解：將透析袋外的溶液凍干濃縮，然后放回酶溶液中，如果酶的活性恢復(fù)，則表明透析時(shí)除去了必要的輔 助因子。測(cè)定有活性的酶與無活性的酶的光學(xué)活性（螺旋的含量），如果光學(xué)活性發(fā)生改變，則表明酶分 子發(fā)生了去折疊。 五、

35、單元自測(cè)題 （一）名詞解釋或概念比較 1. 活化能，2 .轉(zhuǎn)換數(shù)，3 .酶的專一性，4 .反饋抑制，5 .多酶復(fù)合體，6 .絕對(duì)專一性，7.核酶， 正協(xié)同效應(yīng)的酶，Hill系數(shù)（ ）;負(fù)協(xié)同效應(yīng)的酶，Hill系數(shù)（ ）酶，蛋白質(zhì)去磷酸化時(shí)需要 （ 11蛋白質(zhì)的磷酸化是可逆的。 蛋白質(zhì)磷酸化時(shí)需要 （ 12在紫外光或可見光照射時(shí)，酶蛋白會(huì)發(fā)射熒光。 （ ）氨酸。 13化學(xué)酶工程也稱為初級(jí)酶工程，是指天然酶、 究和應(yīng)用。 14在酶的分離純化過程中，通常用（ 15當(dāng)無激活劑存在時(shí)，蛋白激酶A 由（ 組成。 16許多核酸酶的活性能被螯合劑（ 17激酶是一類催化（）反應(yīng)的酶。 18根據(jù)酶催反應(yīng)的類型，可

36、以將酶分為（ 酶。 酶蛋白的熒光主要來自（ ）氨酸和 （ ），（ ）和（ ）的研 ）和（ ）來判斷純化方法的優(yōu)劣。 ）個(gè)催化亞基 （C） 和（ ）個(gè)調(diào)節(jié)亞基 （R） 所 ）抑制，這是因?yàn)椋?）。 ），（ ），（ ），（ ）， （ ）和（ ）。 19轉(zhuǎn)氨酶的輔基是（）。 參考答案 1供體，受體 2競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑 34 4苯丙氨酸，亮氨酸 5小，天然底物或最適底物 6生物素 7 可逆的共價(jià)，磷酸化酶 a，磷酸化酶b 8催化效率高，專一性強(qiáng) 9. 最慢的，第一步反應(yīng) 10等于1,大于1,小于1 11 蛋白激酶，蛋白磷酸酯酶 12 色氨酸，酪氨酸 13 化學(xué)修飾酶，固定化酶，人工模擬酶 14. 回收率的

37、高低，比活力提高的倍數(shù) 15. 2, 2 16. EDTA去除了核酸酶所必須的鎂離子 17. 底物磷酸化 18 氧化還原酶，轉(zhuǎn)移酶，水解酶，裂合酶，異構(gòu)酶，連接酶 19磷酸吡哆醛 （三）選擇題 1在米氏方程的雙倒數(shù)作圖中，酶對(duì)底物的米氏常數(shù)是雙倒數(shù)直線的（） A. 縱軸截距的倒數(shù) B. 斜率 C. 橫軸截距絕對(duì)值的倒數(shù) D. 橫軸截距的絕對(duì)值 2下列物質(zhì)中哪種是琥珀酸脫氫酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑？（） A. 二酮戊二酸 B.延胡索酸 C. 草酰乙酸 D. 丙二酸 3酶促反應(yīng)降低反應(yīng)的活化能的能量來源是（） A. 酶與底物結(jié)合能B.底物形變能 C.酶分子構(gòu)象變化釋放的能量D.底物化學(xué)鍵斷裂釋放的化學(xué)能

38、4以焦磷酸硫胺素為輔酶的酶是（） A. 轉(zhuǎn)氫酶B.氨基酸脫羧酶 C.谷氨酸脫氫酶D.丙酮酸氧化脫氫酶 5. CTP對(duì)ACT酶的別構(gòu)效應(yīng)被稱為（） A.同促激活 B.同促抑制C.異促激活D.異促抑制 6. 5 磷酸核糖與 ATP作用生成5 磷酸核糖焦磷酸，催化這個(gè)反應(yīng)的酶是（） A.磷酸核糖焦磷酸激酶B. ATP 激酶 C.磷酸核糖激酶D.磷酸核糖酶 7. DNA聚合酶在分類時(shí)屬于六類酶中的（） A.合成酶 B. 裂合酶 C.氧化還原酶D. 轉(zhuǎn)移酶 c.并不改變 g -，但改變產(chǎn)物對(duì)反應(yīng)物的比值； D.增加正向和逆向的反應(yīng)速度。 10. 下述哪一種酶能識(shí)別對(duì)稱性底物？（） A.延胡索酸酶B.琥珀

39、酸脫氫酶 C. 順烏頭酸酶D.異檸檬酸脫氫酶 11下圖表示酶活力是溫度的函數(shù)。在溫度X時(shí)， A. 底物能量太高不能與酶形成穩(wěn)定的復(fù)合物。 B. 反應(yīng)自發(fā)進(jìn)行，不需要酶的參加； C. 酶的熱變性發(fā)生； D. 反應(yīng)產(chǎn)物變得不穩(wěn)定。 12人體消化系統(tǒng)內(nèi)的酶，通常以非活性的酶原形式存在，但是也有例外，例如（ A.胃蛋白酶B. 羧肽酶 C.核糖核酸酶 13. 在酶的分類命名表中，RNA聚合酶屬于（） A.水解酶 B. 裂合酶 C. 合成酶 D. 轉(zhuǎn)移酶 14 . Km值是酶的特征常數(shù)之一，它與酶促反應(yīng)的性質(zhì)和條件有關(guān)，但與下列因素中的哪一種無關(guān)? ( ) A. 酶濃度 B.反應(yīng)溫度C. 底物種類D. p

40、H和離子強(qiáng)度 15 .蛋白激酶C是一種（ ) A. 雙功能酶B.雙關(guān)酶 C. 多功能酶D.同工酶 16 .某給定酶的同工酶（ ）。 A. 具有不同的亞基數(shù)目B. 對(duì)底物有不同的 Km值 C. 具有不冋的底物專一性D. 呈現(xiàn)相同的電泳遷移率 A.每個(gè)酶分子每秒鐘將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的分子數(shù) B. 每個(gè)酶的亞基每秒鐘將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的分子數(shù) C. 每個(gè)酶的催化中心每秒鐘將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的分子數(shù) 18 腺苷酸環(huán)化酶存在于（） A.線粒體 B.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系膜 C. 細(xì)胞核 D.質(zhì)膜 A.反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑B. 非競(jìng)爭(zhēng)性 19. 在酶的雙倒數(shù)作圖中，只改變斜率不改變橫軸截距的抑制劑屬于 抑制劑C.競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑 20

41、. 酶促反應(yīng)中酶的作用是（） A.改變Kcat B.提高反應(yīng)的活化能C.降低反應(yīng)的活化能 D. 提高正向反應(yīng)速度 21 . 2+ Mg 催化2ADP ATP+AM反應(yīng)的酶是 A. 腺苷酸激酶 B.鳥苷酸激酶 C. 胞苷酸激酶D.尿苷酸激酶 22. 在實(shí)驗(yàn)室中， 如果用酶催化合成法合成多肽，通常用的酶類是（ A. 氨基轉(zhuǎn)移酶 B. 蛋白激酶 C. 蛋白水解酶 D. 氨基酸t(yī)RNA連接酶 23. 端粒酶屬于（ ) A. 肽酰轉(zhuǎn)移酶 B. DNA 聚合酶 C. 限制性內(nèi)切酶 D. RNA 聚合酶 （四）是非題 1 .調(diào)節(jié)酶的Km值隨酶的濃度而變化。 2. 能催化蛋白質(zhì)磷酸化的酶酶稱為磷酸化酶。 3.

42、 蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化是可逆的，該可逆反應(yīng)是有同一種酶催化完成的。 4. 酶反應(yīng)的最適 pH只取決于酶蛋白的結(jié)構(gòu)。 5. 寡聚酶是由兩條或多條多肽鏈通過共價(jià)鍵結(jié)合而成的復(fù)合體。 6. 脲酶的專一性很強(qiáng)，它只能作用于尿素。 7. 酶的催化作用是指通過改變反應(yīng)物的平衡點(diǎn)以加快某一方向的反應(yīng)速度。 &通常情況下，固定化酶不如溶液酶穩(wěn)定。 9 .某些別構(gòu)酶在低溫下不穩(wěn)定，這是由于低溫不利于蛋白質(zhì)亞基之間的相互作用。適當(dāng)升高溫度時(shí)酶的 穩(wěn)定性明顯增強(qiáng)，由此可以推斷這些別構(gòu)酶的亞基之間的主要作用力是疏水作用力。 10在進(jìn)行酶促動(dòng)力學(xué)測(cè)定中，當(dāng)?shù)孜餄舛炔粩嗉哟髸r(shí)，所有的酶都會(huì)出現(xiàn)被底物飽和的現(xiàn)象。 11

43、. 1g粗酶制劑經(jīng)過純化以后得到10mg電泳純的酶，那么它的比活力比原來提高了100倍。 12催化三酰甘油水解成甘油和脂肪酸的酶稱脂肪酶。 13. 同工酶是指催化相同的化學(xué)反應(yīng)，但其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和免疫性能等方面不同的一組酶。 14. 別構(gòu)酶一般都是寡聚酶，往往催化多酶體系的第一步反應(yīng)。 15. 別構(gòu)酶的動(dòng)力學(xué)曲線符合米氏方程。 1 6 .有的抑制劑雖然不與底物競(jìng)爭(zhēng)酶結(jié)合部位，但仍然表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。 17. 具有正協(xié)同效應(yīng)的酶，其Hill 系數(shù)總是小于 1。 18. 輔基于輔酶的區(qū)別在于它們于酶蛋白結(jié)合的牢固程度不同，并沒有嚴(yán)格界限。 19. 抗體酶是一種具有催化功能的免疫球蛋白，

44、在其可變區(qū)具有酶的特性。 20. 核酶與蛋白質(zhì)酶的差異不僅在于化學(xué)本質(zhì)不同，同時(shí)兩者的催化化學(xué)也明顯不同。 核酶的轉(zhuǎn)換數(shù)在 0.1 5 之間，比大多數(shù)蛋白質(zhì)酶低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。 21. 固體狀態(tài)的酶比在溶液中的酶對(duì)溫度的耐受力要高。 22. 酶活性部位的氨基酸殘基在一級(jí)結(jié)構(gòu)上可能相距很遠(yuǎn)，甚至在不同的肽鏈上，通過肽鏈的折疊、盤繞 而在空間結(jié)構(gòu)上相互靠近。 23. 米氏常數(shù)是酶與底物形成復(fù)合物的結(jié)合常數(shù)。 24. 不能用序變模型理論來解釋負(fù)協(xié)同效應(yīng)。 （五）簡(jiǎn)答與計(jì)算 1 .簡(jiǎn)述固定化酶技術(shù)的特點(diǎn)。 2. 一個(gè)二肽酶對(duì)二肽 Ala Gly和二肽Leu Gly的Km分別為2.8 X 104和3.5 X

45、 102,哪一個(gè)二肽是該酶 的最適底物？該酶的兩個(gè)非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的抑制常數(shù)K值分別為5.7 X 10 2和2.6 X 10 4。哪一個(gè)是最強(qiáng)的 抑制劑？ 3. 按照酶作用方式的不同，核酸酶可分為哪兩大類？舉例說明它們的作用方式和專一性。 4. 什么是核酶（ribozyme ）和抗體酶（abzyme）?它們與酶（enzyme）有什么不同？ 5假設(shè)一個(gè)酶促反應(yīng)系統(tǒng)中加入修飾劑Q得到如下圖所示的結(jié)果。問 Q起什么作用？它與 E結(jié)合還是與 ES結(jié)合，還是與 E和ES都能結(jié)合？為什么？ 6某酶在0.9Vmax和O.lVmax時(shí)的底物濃度之比是S 0.9 S 0.1 =10。A.計(jì)算Hill系數(shù)n值，B.問此酶屬于 哪種動(dòng)力學(xué)類型？ 7.在