眼用藥物(改劑型改途徑)臨床前安全性評價的一些考慮[谷風經(jīng)驗]

1、發(fā)布日期 20040220 欄目 化藥藥物評價非臨床安全性和有效性評價 標題 眼用藥物（改劑型改途徑）臨床前安全性評價的一些考慮 作者 文宇 部門 正文內(nèi)容 眼用藥物（改劑型改途徑）臨床前安全性評價的一些考慮 審評三部醫(yī)學組文 宇 部分國內(nèi)申請中對改劑型眼用藥存在一些較為突出的現(xiàn)象，就是對臨床前安全性研究缺乏較系統(tǒng)的認識，大多僅提供了眼部刺激性試驗資料，未能結(jié)合所申報品種的具體情況進行綜合分析。針對上述問題，參考國內(nèi)外有關問題提出以下改劑型眼用藥物臨床前安全性評價的一些考慮，愿與大家共同探討。 一、一般考慮 與一般藥物的臨床前評價安全性評價原則相同，改劑型眼用藥物臨床前評價的重點也在于安全性。

2、只是這種安全性的考慮即要體現(xiàn)在系統(tǒng)性上，又要結(jié)合眼科用藥的特點和化合物本身情況進行綜合分析。改劑型的眼用藥物臨床前安全性評價的一般考慮為： （一）全身毒性： 眼部用藥的給藥劑量甚微，據(jù)測定人結(jié)膜囊內(nèi)的最大液體容量為2030ul，除去10ul的正常淚液，最多只能容納20ul藥液。眼部給藥后藥物進入體循環(huán)的量非常少，一般不產(chǎn)生具有臨床意義的全身藥理作用。通常下列情況下無需進行進一步的全身毒性研究： 1已證明藥物眼部吸收緩慢，可明確排除該藥物眼部給藥的全身作用。 2藥物可被吸收，但以前已進行了充分的全身毒性研究（包括急性毒性、長期毒性、生殖毒性、致突變、致癌試驗等）。 （二）眼部耐受性： 1眼部刺激

3、性試驗：眼用藥物的臨床前安全性首先需評價眼部刺激性，這項試驗對于各種類型眼用藥物的研發(fā)均必不可少。 11試驗的意義：藥物直接接觸角膜后會引起刺激作用，表現(xiàn)為炎癥反應。短期內(nèi)接觸刺激性較強的藥物可產(chǎn)生灼痛、流淚、畏光等癥狀以及結(jié)膜充血、水腫等體征。長時間接觸刺激性較弱的藥物可引起慢性結(jié)膜炎或瞼緣炎，表現(xiàn)為充血、分泌物增多。 兔眼與人眼結(jié)構(gòu)相似，故可采用兔眼進行眼部刺激性試驗以提供初步的眼部用藥安全性信息，保證受試藥物用于人眼時無明顯的刺激性。 若該試驗結(jié)果顯示受試藥物對兔眼具有一定的眼部刺激性，申請人需綜合分析其原因（試驗操作上的系統(tǒng)誤差或兔眼與人眼的差異或藥物本身所致）以及考慮是否需要修改處方

4、（如PH值、濃度、滲透壓、粘滯度等） 12試驗目的：觀察動物眼睛接觸受試物后所產(chǎn)生的刺激反應情況。 1. 3試驗類型：分為單次給藥的眼刺激試驗和重復給藥的眼刺激試驗。 通常均需進行單次給藥的眼刺激試驗。 結(jié)合單次給藥的眼部刺激試驗結(jié)果考慮是否進行重復給藥的眼刺激試驗。通常臨床用藥超過1周的藥物需考慮進行重復給藥眼刺激試驗。 14試驗方法： 1.4.1單次給藥：首選健康成年家兔，每一劑量組至少4只動物（4只眼），體重23g，單籠飼養(yǎng)。家兔的動物房溫度為20（3），相對濕度3070。如為人工光線，則應有12小時日光，12小時黑暗。不限食水。受試物濃度一般用原液或原膏劑，不必稀釋，每只眼滴入0.1m

5、l或涂0.1g以內(nèi)。對于固體和顆粒狀物質(zhì)，應將其粉碎成微細的粉末，給藥體積應是敲打壓實的體積。受試物滴入或涂于動物一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)作為空白對照。給藥后輕合眼瞼約1秒鐘，以保證藥液與局部有充分的接觸。記錄給藥后1、24、48、72小時角膜、虹膜、結(jié)膜以及其它所觀察到的損傷情況，以Draize眼部刺激試驗評分表示。觀察時應用熒光素鈉檢查角膜損害，用裂隙燈檢查角膜透明度和虹膜紋理改變。 若在72小時內(nèi)未見任何刺激癥狀，該試驗即可結(jié)束。 若在72小時內(nèi)出現(xiàn)刺激癥狀，應進行眼部清洗試驗：試驗設3組，每組3只動物，受試藥物的給藥方法同上。第1組不予清洗，第2組在眼部給受試藥2秒鐘后用20ml溫水或生

6、理鹽水清洗受試眼，第3組在給受試藥4秒鐘后用20ml溫水或生理鹽水清洗受試眼。觀察滴眼后24、48、72小時，4天，7天的眼部反應情況，直至眼部恢復正常。（該試驗的意義在于評價溫水或生理鹽水清洗可否改善藥物所致的眼部刺激，亦即反映該受試藥物的眼部刺激性是否可逆。） 1.4.2重復給藥：連續(xù)給藥1周以上后，繼續(xù)觀察714天。觀察時尚應用熒光素鈉檢查角膜損害，用裂隙燈檢查角膜透明度和虹膜紋理改變 1.5結(jié)果判定：按表1的評分方法，將每只動物的角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應分值相加，即是全部受試動物眼刺激反應的總積分。將總積分除以動物數(shù)，即為該受試物對眼刺激性的最后分值。按表2的標準判定受試物的刺激程度

7、。 表1Draize眼部刺激試驗評分表 眼刺激反應 分值 角膜混濁（以最致密部分為準） 無混濁 散在或彌漫性混濁，虹膜清晰可見 半透明區(qū)易分辨，虹膜模糊不清 出現(xiàn)灰白色半透明區(qū)，虹膜細節(jié)不清，瞳孔大小勉強可辨 角膜不透明，由于混濁，虹膜無法辨認 0 1 2 3 4 虹膜 正常 皺褶明顯加深，充血，腫脹，角膜周圍輕度充血，瞳孔對光仍有反應 肉眼可見壞死，出血，對光無反應（其中任何一種或全部的反應） 0 1 2 結(jié)膜 充血（指瞼結(jié)膜和球結(jié)膜） 血管正常 血管充血呈鮮紅色 血管充血呈深紅色，血管不易分辨 彌漫性充血呈紫紅色 0 1 2 3 水腫 無水腫 輕微水腫（包含瞬膜） 明顯水腫，伴有部分眼瞼外

8、翻 水腫至眼瞼半閉合 水腫至眼瞼超過半閉合 0 1 2 3 4 分泌物 無分泌物 少量分泌物 分泌物使眼瞼和睫毛潮濕和粘著 分泌物使整個眼區(qū)潮濕和粘著 0 1 2 3 總積分 16 表2 眼刺激性評價標準 刺激程度積分 刺激程度積分 無刺激性 03 輕度刺激性 48 中度刺激性 912 重度刺激性 1316 2.眼部長期給藥的眼毒性試驗 受試藥應與擬臨床用藥的制劑基本相同，即應使用制劑的溶劑或賦形劑稀釋藥物，給藥途徑盡量模擬臨床給藥途徑以保證藥物與眼部的接觸。每次用藥保留時間盡量模擬臨床，通常每日給藥共4周。除觀察全身指標外，還應重點觀察給藥局部和可能累及的周圍組織（包括角膜、虹膜、結(jié)膜、晶狀

9、體、視網(wǎng)膜、脈絡膜）的反應和病理改變。 3.試驗的注意事項 從保護動物的角度，在已經(jīng)觀察到嚴重不良反應且繼續(xù)進行試驗預期不能提供本質(zhì)的風險評價結(jié)果時，應終止試驗，以期使刺激對受試動物所致的疼痛降至最小。 4.說明 4.1眼部重復給藥試驗與眼部長期給藥的毒性試驗的意義各有側(cè)重，二者不能相互替代；但如可能，可同時觀察給藥局部的刺激性： ? 前者在于觀察和評價受試藥物對眼前段（包括角膜、虹膜、結(jié)膜）的刺激性，后者在于觀察和評價受試藥物對眼本身即眼前段（包括角膜、虹膜、結(jié)膜）和眼后段（晶狀體、視網(wǎng)膜、脈絡膜）的毒性。 ?前者主要通過熒光素鈉和裂隙燈進行檢查，后者主要進行組織病理學檢查。 ?前者的試驗時

10、間較短（714天），后者的試驗時間稍長（4周）。 4.2 Draize眼部刺激試驗可得到的信息： 4.2.1通過判斷標準可得到的信息 ? 角膜混濁膜實質(zhì)（膠原）自身變性 膠原浸潤（依賴于上皮或間質(zhì)的損害程度） 上皮細胞剝離（由細胞毒性產(chǎn)生） ? 虹膜角膜吸收程度與虹膜的損傷程度 對光反射性 ? 結(jié)膜充血提示炎癥性血管擴張 水腫提示炎癥性水腫 分泌物提示淚液分泌過多及炎癥性浸潤反應 4.2.2通過不同觀察時間得到的信息 ? 速發(fā)性反應 ? 遲發(fā)性反應 ? 組織恢復性 4.2.3其它 ? 角膜潰瘍、上皮損傷、缺失脫落 ? 角膜表面凹凸不平、干燥性 ? 清洗使損傷減輕或惡化 ? 受試物與淚液的相容性

11、 ? 由動物的行為判斷有無疼痛 ? 由物理刺激監(jiān)測損傷 （三）致敏性 眼部用藥可導致過敏反應，多見于有免疫原性的藥物，如抗生素、局麻藥、消毒藥等。這些具有免疫原性的藥物眼部給藥時需考察其是否會引起過敏反應。目前認為，可以用豚鼠皮膚過敏試驗來反映藥物眼部給藥時有無致敏性。 （四）其它試驗 如有必要，尚無進行眼部給藥后對瞳孔大小的影響以及對角膜敏感性影響的試驗。 （五）動物藥代動力學 評價臨床前安全性需結(jié)合動物藥代動力學研究資料。眼用藥物的動物藥代動力學研究包括兩方面的試驗：眼部給藥全身吸收試驗和眼部給藥局部PK試驗。 1. 眼部給藥全身吸收試驗： 因眼部給藥后藥物可經(jīng)淚道吸收，不經(jīng)首過代謝，故對

12、于改劑型的眼用藥，尤其是噻嗎洛爾等可能產(chǎn)生嚴重的全身不良反應的藥物應進行全身吸收試驗。其目的在于明確在擬定的眼部給藥方案時藥物的全身吸收速率（Cmax）和程度（AUC），是否由于藥物的全身吸收帶來明顯的甚至嚴重的系統(tǒng)性不良反應，如心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)不良反應等。 2. 眼部給藥局部PK試驗： 21眼部PK試驗的意義在于明確藥物在眼部吸收、分布、代謝、消除的特點，了解眼部給藥的毒性靶器官，為綜合評價臨床前安全性（也包括初步的有效性）提供依據(jù)。 人體可進行眼部給藥的全身吸收試驗（取血漿標本即可），而由于倫理的原因人的淚膜/淚液/角膜/房水通常均難以獲得，故對于眼用藥物而言，動物眼部PK試驗是獲得藥

13、物眼部PK參數(shù)的重要方法。 22可分為單次給藥和重復給藥PK試驗。 23該試驗需解決的問題如下： ? 藥物眼部給藥后是否可通過角膜屏障到達房水中（可通過測定房水中藥物濃度獲得）以及通過角膜后在房水中維持在有效濃度以上的時間（對于抗生素類藥物即為維持在致病菌MIC90以上的時間，為確定給藥間隔提供依據(jù)）； ?藥物在眼內(nèi)組織中的分布（可通過測定組織勻漿中的藥物含量獲得）； ? 藥物在眼內(nèi)是否有蓄積性，尤其是對眼后段（可通過重復給藥時測定房水中的藥物濃度和測定組織勻漿中的藥物含量獲得）。 24試驗中的注意事項： ? 對于作用于眼表的藥物，可測定淚膜/淚液中的藥物濃度；對作用于角膜的藥物可測定角膜中的

14、藥物含量；對作用于角膜之后眼部組織的藥物可測定房水中的藥物濃度。 ? 取淚膜/淚液/角膜/房水標本時，每只動物只能用于一個時間點。因為只有這樣才能較為準確地反映藥物在眼部的濃度，同時具有可操作性。 二、常見申報類型的評價要點 （一）改變給藥途徑的改劑型品種，如抗病毒類藥物新開發(fā)為滴眼液。 對這類品種對其已經(jīng)上市的使用途徑的（如口服、靜脈給藥或皮膚外用）的安全性認識是有一定基礎的，但改為眼部給藥后，研究工作除就眼部用藥的眼部刺激性研究外，還應對眼部長期毒性和動物眼部PK進行相應的研究。 （二）采用了新輔料的改劑型品種 對于處方中含有國內(nèi)外尚未使用過的新輔料的改劑型品種眼部用藥時，為明確新輔料是否

15、具有全身毒性，應進行新輔料的急性毒性、長期毒性、致突變、致癌、生殖毒性試驗。 為明確新輔料是否具有眼部刺激性和長期用藥的眼部毒性，需進行新輔料的眼部刺激性試驗和眼部長期給藥的眼毒性試驗。為明確新輔料的PK，需進行動物眼部給藥全身吸收試驗和眼部PK試驗。 此外，還需進行含有新輔料制劑的眼部刺激性試驗、眼部長期給藥的眼毒性試驗和動物PK試驗，以了解新輔料是否與主藥發(fā)生相互作用。 如果所申報的品種屬于變更輔料的品種，要根據(jù)變化的性質(zhì)進行相應的研究。 （三）具有緩釋特性的改劑型品種，如脂質(zhì)體滴眼液、眼用凝膠等。 因這類品種明顯改變了原劑型制劑的眼部PK，故需要提供動物的眼部PK。這是評價此類品種立題和臨床前安全性的基礎。 應提供新劑型制劑的眼部刺激性試驗。 根據(jù)動物眼部PK數(shù)據(jù)，結(jié)合主藥已有的人體PK資料，綜合分析是否需要進行眼部長期給藥的眼毒性試驗（是否有新的安全性擔憂）。 三、結(jié)語 以上為筆者在審評中的一點體會，歡迎大家共同探討。 四、參考文獻 1.EMEA. Non-clinical Local Tolerance Testing of Me