預(yù)防獸醫(yī)學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文[精品論文]一株高致病性雞傳染性貧血病毒的生物學(xué)及基因組特性

1、預(yù)防獸醫(yī)學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文 精品論文 一株高致病性雞傳染性貧血病毒的生物學(xué)及基因組特性關(guān)鍵詞：雞傳染性貧血病毒 致病性 斑點(diǎn)雜交 全基因組序列 同源性分析摘要：雞傳染性貧血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一

2、對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)cav的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日

3、齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞94份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；20-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1

4、-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx08株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sdly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含

5、有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)cav分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p&

6、gt;0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p>0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組比，差異不顯著(p>0.05)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p<0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p&l

7、t;0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p<0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p<0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染

8、三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。正文內(nèi)容 雞傳染性貧血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從c

9、av的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)cav的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的

10、靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞94份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；2

11、0-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx08株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sd

12、ly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)cav分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重

13、增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p>0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p>0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組比，差異不顯著(p>0.05)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p&a

14、mp;lt;0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p<0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p<0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p<0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和

15、注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。雞傳染性貧血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)

16、致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸

17、孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)cav的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞94份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)

18、果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；20-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)

19、斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx08株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sdly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)cav分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性

20、。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p>0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p>0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組比，差異不顯著(p>0.0

21、5)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p<0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p<0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p<0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p&

22、amp;lt;0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。雞傳染性貧血病毒(chicken anernia

23、virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探

24、針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)cav的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞94份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻

25、雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；20-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交

26、檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx08株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sdly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)cav分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp

27、1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p>0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p>0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口

28、服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組比，差異不顯著(p>0.05)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p<0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p<0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p<0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p

29、<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p<0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組

30、的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。雞傳染性貧血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地

31、高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)cav的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞9

32、4份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；20-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山

33、東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx08株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sdly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)ca

34、v分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p>0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p&

35、gt;0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組比，差異不顯著(p>0.05)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p<0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p<0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p&l

36、t;0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p<0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、

37、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。雞傳染性貧血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genban

38、k中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)cav的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收

39、集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞94份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；20-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/

40、70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx08株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sdly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。

41、結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)cav分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05

42、)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p>0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p>0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組比，差異不顯著(p>0.05)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p<0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染

43、的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p<0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p<0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p<0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.

44、05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。雞傳染性貧血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此

45、對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)ca

46、v的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞94份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日

47、齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；20-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx0

48、8株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sdly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)cav分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重

49、、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p>0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p>0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組比，差異不顯著(p>0.05)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式

50、的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p<0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p<0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p<0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p<0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<

51、0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。雞傳染性貧血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染

52、可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜交，而與對(duì)照的spf雞、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒(

53、rev)、馬立克氏病病毒(mdv)、呼腸孤病毒(reov)核酸雜交反應(yīng)為陰性，具有較強(qiáng)的特異性。敏感性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針對(duì)cav的最低檢出量為1 pg核酸，具有較高的靈敏度，顯示所制備的核酸探針用于臨床病料組織dna中cav感染的檢測(cè)是可行的。 本實(shí)驗(yàn)收集山東泰安、臨沂、萊蕪、煙臺(tái)等8市3個(gè)品系、不同日齡發(fā)病雞群的384只病、死雞的脾臟樣品，其中麻雞105份、肉雞185份、蛋雞94份，通過斑點(diǎn)雜交方法檢測(cè)樣品中的cav核酸，檢測(cè)結(jié)果為，cav總檢出率為27.9(107/384)。3個(gè)品系的雞的檢測(cè)結(jié)果：麻雞樣品的檢出率為37.1(39/105)；肉雞樣品的檢出率為31.3(58/185)；蛋

54、雞樣品的檢出率11.7(11/94)。結(jié)果顯示，麻雞和肉雞中cav感染的檢出率顯著高于蛋雞。3個(gè)不同日齡段的檢測(cè)結(jié)果：1-20日齡的樣品檢出率為6.4(7/110)；20-60日齡的樣品檢出率為45.6(9304)；60日齡以上的樣品檢出率為10.0(7/70)。結(jié)果顯示，20-60日齡的檢出率顯著高于1-20日齡和60日齡以上的，而20-60日齡段是疾病的高發(fā)階段。 其中，從自山東某商品代肉雞場(chǎng)20日齡病雞群表現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，疑似雞傳染性貧血病病毒(cav)感染的脾臟、胸腺、骨髓樣品提取dna，分別經(jīng)斑點(diǎn)雜交檢測(cè)為cav陽性后，其余病料研磨上清經(jīng)處理后接種7日齡spf雞胚和1日齡spf雞，提取接

55、種后的雞胚和spf雞的脾臟組織dna，經(jīng)斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證為陽性，從而成功分離到了一株雞傳染性貧血病毒野毒株，命名為cav-sdlx08株。用pcr方法分段擴(kuò)增出cav-sdly08基因組的三條部分重疊片段，分別克隆于t載體并進(jìn)行測(cè)序，拼接后得到其全基因組序列。結(jié)果表明，sdly08株基因組全長(zhǎng)2298nt，含有三個(gè)互相重疊的開放閱讀框和一個(gè)調(diào)控區(qū)。將sdly08全基因與已發(fā)表的8個(gè)cav分離株基因組比較，同源性為96.6-99.0。cav的三個(gè)編碼基因vp1、vp2和vp3所編碼的氨基酸均有一定程度變異，以vp1基因編碼的氨基酸變異性最大，同源性為96.9-99.0 將cav-sdly08株接種感

56、染1、7、21日齡spf雞，研究其致病性。通過口服和肌肉注射兩種途徑分別感染1、7、21日齡spf雞，12天后對(duì)每組spf雞體重、免疫器官指數(shù)和血液指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。 體重增重方面：感染12天后，1、7日齡感染組的體重顯著低于對(duì)照組(p<0.05)，而兩不同途徑感染組間的差異不顯著(p>0.05)。21日齡感染組體增重也低于對(duì)照組，但差異不顯著(p>0.05)，兩種感染方式的差異也不顯著。 免疫器官指數(shù)方面：感染12天后，不同日齡的感染均能引起脾臟的腫大，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照組比差異顯著(p<0.05)。7日齡和21日齡的與對(duì)照組

57、比，差異不顯著(p>0.05)，且感染途徑影響不大。3個(gè)日齡感染都能引起胸腺的顯著萎縮，且不同的感染日齡和感染方式的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比差異都極顯著(p<0.01)。 血液指標(biāo)方面：感染12天后，可引起白細(xì)胞數(shù)量的減少，1日齡感染的口服組和注射組與對(duì)照比差異極顯著(p<0.01)。7日齡和21日齡，注射組顯著低于口服組和對(duì)照組(p<0.05)，口服組和對(duì)照組差異不顯著(p>0.05)。與對(duì)照組相比，cav感染都能引起紅細(xì)胞數(shù)量的顯著減少(p<0.01)，口服組和注射組與對(duì)照組相比差異極顯著(p<0.

58、01)，且兩種感染方式之間差異顯著(p<0.05)。與對(duì)照組相比，都能引起紅細(xì)胞壓積的顯著減少(p<0.01)，1日齡和7日齡感染的口服組和注射組差異極顯著(p<0.01)，21日齡差異顯著(p<0.05)。 綜合結(jié)果顯示，cav-sdly08株感染三個(gè)日齡spf雞12天后，均可導(dǎo)致增重減緩、胸腺顯著萎縮、脾臟腫大、白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)與紅細(xì)胞壓積的顯著減少。這表明該cav-sdly08分離株對(duì)1日齡和7日齡雞的致病性要強(qiáng)于21日齡，肌肉注射比口服感染組的致病性更強(qiáng)。而且結(jié)果同時(shí)表明，該毒株對(duì)21日齡的spf雞仍有明顯的致病作用。雞傳染性貧

59、血病毒(chicken anernia virus，cav)在世界主要養(yǎng)禽國(guó)家廣泛分布，是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原體之一。cav感染可以破壞造血系統(tǒng)，并可使淋巴器官萎縮，導(dǎo)致雞群免疫抑制，這又經(jīng)常使感染雞群并發(fā)或繼發(fā)其它病原體的多重感染，導(dǎo)致巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)cav的系統(tǒng)研究甚為重要，本研究是從cav的檢測(cè)方法、流行情況以及流行毒株的基因變異和致病性進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 根據(jù)genbank中已經(jīng)發(fā)表的cav vp1基因的序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，利用pcr技術(shù)擴(kuò)增cav vp1基因的的核酸片段，利用非放射性標(biāo)記物地高辛(dig)，通過pcr方法制備了cav核酸探針。通過斑點(diǎn)雜交檢測(cè)方法對(duì)此探針特異性及靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證，特異性檢測(cè)結(jié)果表明，該探針能與標(biāo)準(zhǔn)模式株cav核酸發(fā)生特異性雜