高一生物微生物實驗室培養(yǎng)

1、高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 專題專題2 :2 :微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 微生物包括哪五類：微生物包括哪五類： 真菌真菌 原生動物原生動物 特點：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單特點：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單, ,個體多數(shù)十分微小個體多數(shù)十分微小. .通通 常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有 的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu). .且體內(nèi)一般不含有葉綠且體內(nèi)一般不含有葉綠 素素. .不能進(jìn)行光合作用不能進(jìn)行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界 真菌界真菌界 病毒界病毒界微生物基礎(chǔ)知識 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 細(xì)菌的

2、外形與大小 細(xì)菌：細(xì)菌：單細(xì)胞不分枝的原核微生物單細(xì)胞不分枝的原核微生物。 細(xì)菌細(xì)胞細(xì)菌細(xì)胞，通常用適當(dāng)染料，通常用適當(dāng)染料 后顯微鏡觀察后顯微鏡觀察 圖圖1-1 常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見的三種細(xì)菌典型形態(tài) A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 細(xì)菌細(xì)胞由外向里 依次有、菌菌 （、 、 ， 。 細(xì)菌的構(gòu)造 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) *細(xì)胞壁 細(xì)胞壁有哪些功能？細(xì)胞壁有哪些功能？ 傷傷 寒寒 桿桿 菌菌 細(xì)細(xì) 胞胞 壁壁 中中 含含 毒毒 素素 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢

3、圓形的休眠 體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán) 境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才 死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水 分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌. . 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 菌落： 單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖 時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定時，

4、就會形成一個肉眼可見的，具有一定 形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。 菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 菌落 細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征 因種而異因種而異 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1 1、結(jié)構(gòu)：、結(jié)構(gòu)： 單細(xì)胞原核單細(xì)胞原核 分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲） 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、 氯霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/32/3是是 由放線菌產(chǎn)生的由放

5、線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: : 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 病毒病毒 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 朊病毒（蛋白質(zhì)病毒） 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 2、病毒的增殖：、病毒的增殖： 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 真菌真菌 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電子顯微 鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu) 酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌 青霉青霉 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 生殖生殖 直立菌絲直立菌絲 營養(yǎng)菌絲營養(yǎng)菌絲腐生生活腐生生活 孢子生殖孢子生殖 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 細(xì)菌的營養(yǎng)

6、類型 根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同， 將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。 自養(yǎng)菌（自養(yǎng)菌（autotrophautotroph） 異養(yǎng)菌（異養(yǎng)菌（heterotrophheterotroph） 腐生菌腐生菌 寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無 菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和掌握培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌和 平板劃線法等基本操作

7、技術(shù)，熟練、規(guī)范平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范 地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。 無菌技術(shù)的操作。無菌技術(shù)的操作。 二、課題重點和難點：二、課題重點和難點： 三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)： 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 一、基礎(chǔ)知識：一、基礎(chǔ)知識： （一）培養(yǎng)基（一）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成 的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。 （1 1）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為）按物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為固體培固體培 養(yǎng)基養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基。其中固體培養(yǎng)基用

8、于菌。其中固體培養(yǎng)基用于菌 種分離、鑒定菌落等。種分離、鑒定菌落等。 （2 2）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別）按功能來分，可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別 培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 （3 3）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成）按成分來分，可分為天然培養(yǎng)基和合成 培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。 1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 2. 2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同 的培養(yǎng)基配方的培養(yǎng)基配方 (參考教材附錄內(nèi)容參考教材附錄內(nèi)容) 3.3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、 碳源、和氮源、碳源、和氮源、 無機(jī)鹽、等營養(yǎng)物質(zhì)，無機(jī)鹽

9、、等營養(yǎng)物質(zhì)， 另外還需要滿足微生物生長對另外還需要滿足微生物生長對pHpH、特殊、特殊 營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì), ,例如例如: :生長因子生長因子(即細(xì)菌生長必即細(xì)菌生長必 需，而自身不能合成的化合物需，而自身不能合成的化合物,如維生素、如維生素、 某些氨基酸、嘌呤、嘧啶某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) )以及氧氣、二以及氧氣、二 氧化碳、滲透壓等的要求。氧化碳、滲透壓等的要求。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 選擇培養(yǎng)基 加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的

10、無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌 不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、 次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細(xì)胞分離雜交瘤細(xì)胞 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和 數(shù)量，用人工方法模擬合成的。數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、 維

11、生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它 一些輔助物質(zhì)。一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相優(yōu)點：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相 對固定對固定; ;成本低成本低 缺點：缺點： 缺少某些成分，不能完全滿缺少某些成分，不能完全滿 足體外細(xì)胞生長需要。足體外細(xì)胞生長需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: : 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組 織提取液（如雞胚和牛胚浸液）?？椞崛∫海ㄈ珉u胚和牛胚浸液）。 優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好 缺點：來源受限缺點：來源受限; ;成分復(fù)雜，影響對某成分復(fù)雜，影響對某

12、 些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析; ; 易發(fā)生支原體污染易發(fā)生支原體污染; ; 天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基： 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 血清中含有：血清中含有： 多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋 白、鐵蛋白等）白、鐵蛋白等） 多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素； 促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、 冷析球蛋白、膠原等。冷析球蛋白、膠原等。 各種生長因子各種生長因子 轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移蛋白 不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì) 胞生長和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如胞生

13、長和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如 血清）。血清）。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基： 表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長 沉淀生長沉淀生長 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基： 無動力無動力 有動力有動力( (彌散彌散) ) ( (是否運(yùn)動是否運(yùn)動) ) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 4.4.培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途 液體培養(yǎng)基：增菌液體培養(yǎng)基：增菌 固體培養(yǎng)基：純化，增菌固體培養(yǎng)基：純化，增菌 半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種 高一生物微生物實驗室培養(yǎng)

14、 1.1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中， 所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后所有防止雜菌污染的方法。無論是隨后 將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還將要學(xué)到的倒平板、平板劃線操作，還 是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步是平板稀釋涂布法，其操作中的每一步 都需要做到都需要做到“無菌無菌”，即防止雜菌污染。，即防止雜菌污染。 只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，才可只有熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，才可 能成功地培養(yǎng)微生物。能成功地培養(yǎng)微生物。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) （）消毒定義：（）消毒定義： 利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份利用化學(xué)或物

15、理方法，殺死大部份 致病微生物的過程。區(qū)分為高程度消毒致病微生物的過程。區(qū)分為高程度消毒 （High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、中程度）、中程度 消毒（消毒（Intermediate-level Intermediate-level DisinfectionDisinfection）、低程度消毒（）、低程度消毒（Low-Low- level Disinfectionlevel Disinfection）三種方式。）三種方式。 2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) （2 2）滅菌的定

16、義：）滅菌的定義： 以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微 生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、 霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。 滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工 作中最普通也是最重要的技術(shù)。作中最普通也是最重要的技術(shù)。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min 2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min 或或 80 80 下煮下煮15min15min 3 3、化學(xué)藥劑消毒法、化學(xué)

17、藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔 爾滅等進(jìn)行皮膚消毒爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源 4 4、紫外線消毒、紫外線消毒 (1)消毒的方法：消毒的方法： 3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1 1、灼燒滅菌、灼燒滅菌 2 2、干熱滅菌：、干熱滅菌： 160-170 160-170 下加下加 熱熱1-2h1-2h。 3 3、高壓蒸氣滅菌：、高壓蒸氣滅菌： 100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min.15-30min. (2)滅菌的方法：滅菌的方法： 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 最常用的滅菌方法是

18、高壓蒸汽滅菌，它可以最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以 殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休 眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被 破壞。破壞。 有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了 防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻 璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花 塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只 可讓空氣通過，而空

19、氣中的其他微生物不能通過可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過 。 而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器 具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 分類分類定義定義方法方法 滅菌法滅菌法 殺滅一切微生物殺滅一切微生物 物理法：熱力、輻射、微物理法：熱力、輻射、微 波、等離子體波、等離子體 化學(xué)法：醛類、烷化劑化學(xué)法：醛類、烷化劑 高效消高效消 毒法毒法 殺滅一切致病微殺滅一切致病微 生物生物 紫外線、含氯劑、臭氧、紫外線、含氯劑、臭氧、 復(fù)配劑等復(fù)配劑等 中效消中效消 毒法毒法 殺滅除

20、芽孢外的殺滅除芽孢外的 致病微生物致病微生物 超聲波、碘類、醇類、酚超聲波、碘類、醇類、酚 類類 低效消低效消 毒法毒法 殺滅細(xì)菌繁殖體、殺滅細(xì)菌繁殖體、 親脂病毒親脂病毒 單鏈季胺鹽、雙胍類、中單鏈季胺鹽、雙胍類、中 草藥、金屬離子草藥、金屬離子 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1 1、器具的滅菌、器具的滅菌 2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制 3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌 4 4、倒平板、倒平板 5 5、微生物接種、微生物接種 6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng) 7 7、菌種的保存、菌種的保存 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1.1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的

21、培養(yǎng)物 被其他外來微生物污染外，還有什么目的？被其他外來微生物污染外，還有什么目的？ 2.2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅 菌。如果需要，請選擇合適的方法。菌。如果需要，請選擇合適的方法。 （1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 （2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管 （3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自 身被微生物感染。身被微生物感染。 答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。 高一生物微

22、生物實驗室培養(yǎng) 三、實驗操作三、實驗操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌） 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1 1計算、稱量計算、稱量 2 2溶化溶化 3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 6 4 4過濾：這一步可以省去。過濾：這一步可以省去。 5 5分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng) 基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而 引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過 三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。 6 6加塞加塞 7 7包扎包扎 操作步驟操作步驟 高一生

23、物微生物實驗室培養(yǎng) 8 8滅菌滅菌: : 將將50ml50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中， 塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌 鍋，在壓力為鍋，在壓力為100kPa100kPa、溫度為、溫度為121121，滅菌，滅菌 151530min30min。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干 熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2h2h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50 50 左右時，在酒精燈附左右時，在酒精燈附 近倒平板。（倒平板操作見課

24、本）近倒平板。（倒平板操作見課本）2d2d后觀察平后觀察平 板，無雜菌污染才可用來接種板，無雜菌污染才可用來接種. . 10 10無菌檢查：無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培 養(yǎng)養(yǎng)24482448小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右時，左右時， 才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的 溫度？溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形 瓶，

25、感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手 時，就可以進(jìn)行倒平板了。時，就可以進(jìn)行倒平板了。 2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生 物污染培養(yǎng)基。物污染培養(yǎng)基。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺 在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來 培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為

26、什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固 后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置， 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以 防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之 間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板 培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌 接種方法有：接種方法

27、有： 平板劃線法和稀釋涂布平板法平板劃線法和稀釋涂布平板法 平板劃線法平板劃線法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體通過接種環(huán)在瓊脂固體 培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的將聚集的 菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到由一個細(xì)可以分離到由一個細(xì) 胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體, , 這就是菌落這就是菌落. . 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前 都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束

28、時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需 要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接 種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線 前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種 環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的 菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線 次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)

29、目逐漸減少， 以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時 殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和 感染操作者。感染操作者。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻 后再進(jìn)行劃線？后再進(jìn)行劃線？ 答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什在作第二次以及其后的劃線操作時，為什 么總是從上一次劃線的末端開始劃線么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線

30、條起答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起 始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，始處要少，每次從上一次劃線的末端開始， 能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步 減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌 落。落。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近 進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌 操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無步應(yīng)如何進(jìn)行無 菌操作？菌操作？ 應(yīng)從

31、操作的各個細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌無菌”。 例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、 吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要 在酒精燈火焰周圍等等。在酒精燈火焰周圍等等。 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 1 1、臨時保藏：、臨時保藏： 接種到固體斜面培接種到固體斜面培 養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后 置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長期保存：、長期保存： 甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法 高一生物微生物實驗室培養(yǎng) 四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合

32、格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 d2 d后無菌后無菌 落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制 備。備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本 一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是 符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接 種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再 次練習(xí)。次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h