促腎上腺皮質(zhì)激素作業(yè)指導書

1、XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導書Elecsys E 170/E 411促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTHf牛編號：LAB OP- MY020 1頁，共4頁版本：A/0生效日期：1. 分析原理采用雙抗體夾心法原理，整個過程 18分鐘完成。第1步：50標本、生物素抗ACT特異性單克隆抗體和釘（Ru）標記ACT特異性單克隆抗體混勻，形成夾心復合物。第2步：加入鏈霉親和素包被的微粒，讓上述形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。第3步：將反應(yīng)液吸入檢測池中，檢測池中的微粒通過電磁作用吸附在電極表面。未結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell除去。在電極上加以一定的電壓，使復合體化學發(fā)光，用

2、光電倍增器檢測發(fā)光的強度。通過檢測儀的定標曲線得到最后的檢測結(jié)果，定標曲線 是通過2點定標點和試劑條形碼上獲得的主曲線生成的。2. 標本要求只有按如下方法收集的標本才適合用本試劑盒檢測。 K3-EDTA K2-EDTA血漿；收集于硅化管或塑料管，非硅化管將導致測量值減低；只能使用預先冷凍的標本小瓶。注入血液標本后，立即將小瓶放置在冰上。使用冷卻離心機分離血漿。立即測定標本或冷 凍在-20 C下保存；穩(wěn)定性：22 C可保存2小時；在-20C可保存4周，只可凍溶一次14;不是所有能獲得的廠商的試管均可用于檢測。不同廠商標本收集系統(tǒng)可能含有不同材料，某些情況下會影響檢測結(jié)果。在使用原始試管處理標本時

3、，應(yīng)遵循試管生產(chǎn)商所提供的指導。如標本中有沉淀出現(xiàn)，必須先作離心處理再進行分析。已經(jīng)加熱失活的標本無法分析。使用疊氮化物作為穩(wěn)定劑的標本或 質(zhì)控液無法分析。檢測前，請確保患者標本、定標液及質(zhì)控液放置在20 -25C的環(huán)境中。由于蒸發(fā)因素的影響，標本、定標液及質(zhì)控液在放入分析儀后請在 2小時內(nèi)完成測定。3. 試劑、校準品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M鏈酶親和素包被的微粒（透明瓶蓋）每瓶 6.5ml。鏈酶親和素包被的微粒：0.72mg/ml ；結(jié)合力：470ng生物素/mg微粒; 微粒經(jīng)過防腐處理。R1:生物素化抗ACT抗體（灰色瓶蓋）每瓶8 ml；生物素化單克隆抗ACTI抗

4、體（鼠）：0.3 mg/L； MES緩沖液：50 mmol/L，PH值6.2 ;經(jīng)過防腐處理。R2 :釘復合物標記的抗ACT抗體（黑色瓶蓋）每瓶8ml;釘復合物標記的抗ACTI單克隆抗體（鼠）：0.3 mg/L； ME緩沖液:50 mmol/L，PH值6.2 ;經(jīng)過防腐處理。b）MES=2-嗎啉乙磺酸校準品:貨號 03255760, Elecsys ACTH CalSet, for 4 x 1 mL質(zhì)控品:貨號 04655346, Elecsys PreciControl ACTH 2 x 3 mL，各含 PreciCo ntrol Uni versal 1 和 2其他所需材料:Elecsys

5、2010，e411分析儀所需材料：貨號 11662988, Elecsys ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液 貨號 11662970, Elecsys CleanCell, 6 x 380 mL,檢測池洗液 貨號 11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL附加洗液 貨號 11933159, SysClean 適配器 貨號 11706802, Elecsys 2010 分析杯,60 x 60反應(yīng)管Elecsys E 170/E 411文件編號：LAB OP- MY020 第2頁，共4頁版本：A/0生效日期：XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目

6、作業(yè)指導書.貨號11706799, Elecsys 2010 分吸吸頭，30 x 120移液管吸頭Modular Analytics E170免疫分析儀所需材料：.貨號 04880340, ProCell M, 1 x 2 L系統(tǒng)緩沖液.貨號 04880293, CleanCell M, 1 x 2 L檢測池洗液貨號03023141, PC/CC杯，50杯用于在測定前預熱Procell M 及Cleancell M。貨號03005712,ProbeWash M, 12 x 70 mL清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗系統(tǒng)。貨號12102137,分析杯/分析吸頭 組合裝M, 48分析杯x

7、84反應(yīng)管或加液器吸頭，廢物袋貨號 03023150, WasteL in er, 廢物袋貨號 03027651, SysClean 適配器 M所有分析儀均需要的材料：貨號 11298500, Elecsys SysClea n, 5 x 100 mL系統(tǒng)清洗液4. 儀器和校準使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Elecsys 2010/E 170/E 411 全自動電化學發(fā)光免疫自動分析儀儀器校準：溯源性：本測定方法已按照標準人造 ACT產(chǎn)品標準化。每批Elecsys ACTH試劑盒上都有條形碼記錄各批號試劑特定的定標信息。預先確定的主曲線適用于用Elecsys ACTHCalSet試劑盒進行測定

8、的分析儀。定校間隔：每批不同試劑須重新進行定標（例如在試劑盒被分析儀識別后的24小時內(nèi)）。除此之外，以下情況必須重新進行定標：Elecsys 2010、E170和 cobas e 分析儀：4同一批號的試劑盒在分析儀上使用超過1個月（28天）。同一試劑盒在分析儀上使用超過 7天對于所有分析儀上均需定標：根據(jù)需要：如質(zhì)控數(shù)據(jù)超過額定的限度。5. 操作步驟（以E 170為例）5.1校準操作步驟：在編緝各項目的參數(shù)時，已經(jīng)在Application Calib菜單中定義好了定標類型和幾點定標。因此在對各項目進行定標時，只需在定標菜單Calibration中進行即可。3.2進入Calibration St

9、atus菜單，用鼠標選擇需定標的項目，再根據(jù)需要點單點定標（BLANK建）或兩點定標（TWGPOINT鍵）、跨距定標（SPAN建）、多點定標（FULL鍵），再選擇其它項目進行相應(yīng)選擇，最 后點SAVE將定標物放入在 Calibration Calibrator中定義好的位置，點 Start，再點Start，儀器開始定標。在Calibration Status菜單中看定標結(jié)果，點 Calibration Result鍵看定標結(jié)果，點 Reaction Monitor 鍵看每個定標物的反應(yīng)曲線。5.2樣本檢測程序：單個樣本輸入，在主菜單下選擇 Workplace- Testslection，在Se

10、quenee No欄輸入標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目點 SAVE建，樣本號自動累加。批量常規(guī)標本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection ，在Sequenee No欄輸入起始標本號，然后選擇該標本所需做的單個項目或組合項目點REPEAT輸入該批標本的最后一個標本號，點OK即可。進樣分析，將標本按在 Workplace菜單中輸入的標本號順序在樣本架上排好，放入進樣盤內(nèi)，按START鍵，輸入該批上機標本的起始標本號，再點 START鍵，儀器自動開始推架檢測標本。6. 質(zhì)量控制XXXXXX 醫(yī)院檢驗科免疫室分析項目作業(yè)指導書Elecsys E 170/

11、E 411文件編號：LAB OP- MY020 第3頁，共4頁版本：A/0生效日期：ElecsysPreciControl ACTH1和2試劑和其它適合的試劑均可作為測定時的質(zhì)控液。在測定時，對于不同濃度范圍的標本，每24小時內(nèi)必須進行一次質(zhì)控測試。每次更換試劑盒或進行定標后也須進行質(zhì)控測試。每個實驗室須根據(jù)各自的情況確定合適 的質(zhì)控間隔和范圍。測定值必須處于規(guī)定的范圍內(nèi)。若測定值不在規(guī)定的范圍內(nèi)，則每個試驗室必須建立相應(yīng)的矯正方法。7. 計算方法分析儀自動計算得出每份標本的測定濃度（單位可為pg/mL, pmol/L 或pmol/L ）.換算公式pg/mL x 0.2202 = pmol/L

12、pmol/L x 4.541 = pg/mL8. 參考范圍354 名健康人群用血漿測得的值范圍（5-95%）： 7.2-63.3 pg/mL （1.6-13.9 pmol/L） 。不同生理條件下ACTH濃度明顯不同，因此，ACTHM定結(jié)果必須結(jié)合同時測定的皮質(zhì)醇濃度進行評估。每個實驗室必須調(diào)查各自患者群體的參考范圍變異性，必要時根據(jù)具體情況制訂自己的參考范圍。9. 分析性能1.0-2000 pg/mL或0.220-440 pmol/L （由系統(tǒng)主曲線的最低限和最高限決定）。ACTH濃度低于檢測最低限則報告為 1.0 pg/mL或 0.220 pmol/L, 而高于檢測上限則報告為 2000 p

13、g/mL或 440 pmol/L 。由于檢測范圍寬，因此一般無須稀釋。10. 干擾因素測定結(jié)果不受黃疸（膽紅素 428mol/L或25 mg/dl ）,溶血（血紅蛋白0.25 mmol/L或 0.4g/dl ）,高脂血（癥）（脂 肪乳劑 1500 mg/dl ）和生物素（ 246 nmol/L或60 ng/ml ）的影響；標準：回收率90 110%;對于因某些疾病需要而接受高劑量生物素治療的患者（ 5mg/天），必須在末次生物素治療 8小時后采集標本；濃度達400U/ml的風濕因子對測定無影響；高達1*106 1 IU/mL （12,690 ng/mL）大劑量不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)；體外對17種常用藥

14、物進行試驗未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測結(jié)果；但是，若使用ACTH 1-24藥物治療，則不推薦進行 ACTHM定，因為其會影響“三明治”形成而產(chǎn)生干擾，使測定結(jié)果偏低。由于檢測試劑中含有單克隆抗體，因此某些接受單克隆鼠抗體治療或診斷的患者標本檢測結(jié)果可能有誤；試劑盒附帶有試劑添加劑以減少以上不良影響；少數(shù)病例中極高濃度的鏈霉抗生物素蛋白和釘抗體會影響測定結(jié)果；必須結(jié)合患者病史，各項實驗室檢查及其它臨床資料來綜合評估測定結(jié)果。11. 臨床意義促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH是一種由39個氨基酸組成的多肽激素，在大腦垂體前葉合成，其前體物是阿片促黑色素皮質(zhì)激 素原（POMC。POM經(jīng)組織特異性分解產(chǎn)生ACTI和其

15、他相關(guān)肽1,2。ACT通過腎上腺皮質(zhì)刺激糖皮質(zhì)激素（特別是皮質(zhì)醇）合成和 分泌。糖皮質(zhì)激素合成調(diào)節(jié)受多種因素調(diào)節(jié) 3,4,5,6。機體受到刺激（如物理刺激或機體內(nèi)部刺激）后，下丘腦分泌CRH促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素）。CRF作用于垂體，促使ACT合成和分泌。最后，ACT作用于腎上腺促使糖皮質(zhì)激素分泌。血液中高濃度糖皮質(zhì) 激素通過負反饋調(diào)節(jié)機制抑制 CRI和ACT分泌。日間不同時間ACT濃度不同，早晨濃度較高，晚間濃度較低。因此，如同皮質(zhì)醇，了解血漿標本收集時間對于結(jié)果解釋是非常重要的。血漿ACT測定有助于鑒別診斷下列疾?。捍贵w庫欣綜合征（ACTH分泌過多），ACT合成垂體瘤（如Nelson綜合征）， 伴ACT缺乏的垂體功能減退和異位ACT癥候群7,8。結(jié)合皮質(zhì)醇測定，ACTHM定聯(lián)合功能或刺激檢測還能診斷確定糖皮質(zhì)激素合成 過多的原因。同樣，ACT測定可用于鑒別診斷腎上腺皮質(zhì)功能減退癥（阿狄森氏?。?。非垂體合成的ACT稱為異位ACTH,通常認為與肺小細胞癌有關(guān)。極少情況下，異位ACTF由胸腺瘤、胰腺腺癌或支氣管類癌導