高效液相色譜儀檢定規(guī)程

1、高效液相色譜儀檢定規(guī)程JJG 024-19961前言本規(guī)程參照國際法法制計量組織（ OIML ）技術(shù)工作導(dǎo)則第二部分： OIML國際建議和國際 文件起草與表述規(guī)則、JJG1002-84國家計量檢定規(guī)程編寫規(guī)則和 GB3100-93國際單位制及 其應(yīng)用編寫的。2范圍適用于新安裝、使用中和修理后的具有紫外-可見光、熒光和示差折光率檢測器的高效液相色譜儀（以下簡稱儀器）的檢定。2.1原理本儀器用于分離和測定有機混合物中的化學(xué)成分。樣品以溶液狀態(tài)進入色譜柱后，在流動相的推動下，逐步被分離成單個的組分。然后依次通過色譜檢測器進行檢測。 根據(jù)各組分的保 留時間和響應(yīng)峰值而進行組分的定性和定量分析。2. 2

2、構(gòu)成輸液做一進樣罪充 分離薇一-檢器疏器打F卩繪圖機記求儀或色諸埼圖1元素分析儀構(gòu)成方框圖3計量單位參見GB3100-93國際單位制及其應(yīng)用中的有關(guān)條文。4計量要求其計量特性和指標(biāo)應(yīng)符合表1中的規(guī)定。5技術(shù)要求5. 1外觀要求5. 1.1儀器應(yīng)有下列標(biāo)志：儀器名稱、型號、制造廠名、出廠儀器系列編號、產(chǎn)品合格證 書及操作使用說明書，儀器外表完好，面板字跡清晰。5. 1 . 2儀器整機部件：調(diào)節(jié)旋紐、按鍵、開關(guān)及指示燈應(yīng)能正常工作，電纜線插件應(yīng)接觸 良好。5. 2安裝條件5. 2 . 1儀器應(yīng)平穩(wěn)地安裝在牢固的操作臺上，電纜接插件緊密配合，接地良好。5. 2 . 2高壓氣瓶與儀器連接應(yīng)使用專用管道

3、和接頭。編號特性項目紫外可見光檢測器熒光檢測器折光率檢測器11泵流量設(shè)定值誤差Ssw（ 2 5） %2*泵流量穩(wěn)定性誤差SrW( 1 2) %3柱恒溫箱溫度 T 1039*定性重復(fù)性RSD w 1.5%10*定量重復(fù)性RSD w 3%*帶星號的項目為必須鑒定的項目5. 3檢定環(huán)境5. 3. 1室內(nèi)環(huán)境：應(yīng)清潔無塵，無易燃、易爆和腐蝕性氣體，室內(nèi)排風(fēng)良好，且不應(yīng)放置 與測定無關(guān)的其他雜物。5. 3. 2室內(nèi)溫度：10 C 30C（溫度波動應(yīng)不大于 出C /操作期間；使用折射率檢測器時應(yīng) 不大于2C）。5. 3. 3室內(nèi)相對濕度： 85%5. 3. 4 電源：電壓（220 2） V;頻率：（50

4、）.5） Hz。5. 4檢定設(shè)備和試劑5. 4. 1分析天平：最大稱量100g，最小分刻度O.lmg,或其它微量自動電子天平。經(jīng)檢定 合格。5. 4. 2秒表：分度值應(yīng)小于 0.1s，經(jīng)檢定合格。5. 4. 3容量瓶：50ml 10個，經(jīng)檢定合格。5. 4. 4玻璃水銀溫度計：0C 150 C,分刻度0.1C, 1支，經(jīng)檢定合格。5. 4. 5注射器：10 4, 50 d各兩支，經(jīng)校準(zhǔn)合格，10ml兩支。5. 4. 6標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑：萘、硫酸奎寧為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；丙三醇、異丙醇、丙醇試劑的等級和溶液的配制方法見附錄 B。5. 4. 7甲醇（HPLC純）、水（石英亞沸重蒸去離子水），及其它分析純的無機

5、試劑，在使 用前需過濾，脫氣。5.5檢定項目和檢定方法5. 5. 1泵流量的檢定：連接好色譜柱和檢測器，以甲醇為流動相，流量為10ml/min，待流速（或壓力）穩(wěn)定后，在流動相排出口用已稱量過的容量瓶按表2的設(shè)定流量分別準(zhǔn)確收集流動相，再稱量。按式（1）和式（2）分別計算泵流量設(shè)定值誤差Ss和泵流量穩(wěn)定性誤差Sr。Ss= ( Fm-Fs) / Fs (1)Sr= ( Fmax-Fmin ) / (2)式中：Ss -流量設(shè)定值誤差Fm （m2-m1）xpi溝,流量實測值m2容量瓶+流動相的質(zhì)量m1容量瓶的質(zhì)量Fs -流量設(shè)定值pi-實驗溫度下流動相的密度t -流動相的收集時間Sr -流量穩(wěn)定性誤

6、差Fmax -測量列中的流量最大值Fmin -測量列中的流量最小值-測量列的算術(shù)平均值表2 Ss及Sr的檢定流量設(shè)疋值 Fs/ (ml/mi n )0.51.02.0測量次數(shù)333流動相收集時間（t/min）251510允許誤差Ss5%3%2%Sr3%2%2%注：可以根據(jù)實際要求設(shè)定泵的檢定流量。 每當(dāng)變換流量設(shè)定值后， 應(yīng)等待流量穩(wěn)定后方可 收集測量流量。測定順序可隨意選擇，但對同一流量的測定應(yīng) 3次設(shè)定和測量，取其平均值。5. 5. 2柱恒溫箱溫度的檢定按儀器說明書選擇最低和最高可控溫度點，將水銀溫度計插入柱箱內(nèi)，待溫度指示穩(wěn)定后，記錄儀器溫度指示值及水銀溫度計指示值，每隔10分鐘記錄一次

7、，共計 7次，取其算術(shù)平均值，計算設(shè)定值與平均值之差及測量最大值與最小值之差。5. 5. 3定性和定量重復(fù)性的檢定：在儀器處于穩(wěn)定的運行狀態(tài)下用微量注射器或定體積進樣管注入適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液（紫外可見光檢測器用萘；熒光檢測器用硫酸奎寧；折光檢測器用丙三醇等），記錄峰保留時間和峰面積，連續(xù)測量8次，分別以峰保留時間和峰面積按式（3）計算定性和定量重復(fù)性（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD）。式中：Xi-第次測得的保留時間或峰面積-次測量結(jié)果的算術(shù)平均值i-測量序號 n-測量次數(shù)5. 5. 4紫外-可見光檢測器性能的檢定基線噪聲和基線漂移：按儀器說明書聯(lián)接好儀器各組件。用甲醇為流動相，流量1.0ml/min ;吸收波

8、長254nm ,范圍最靈敏檔；記錄紙速度5mm/min10mm/min。待基線穩(wěn)定后，運行基線性30min40min，測量并計算基線噪聲和基線漂移。最小檢測濃度：經(jīng)基線檢測后，拆除色譜柱。在靜態(tài)條件下，用注射器直接注入2ml5ml、4X 10-8g/ml萘的甲醇溶液于樣品池中，其響應(yīng)峰高應(yīng)大于或等于兩倍基線噪聲峰峰高。按 式（4）計算其最小檢測量濃度。pi=2 X Hn X p/H （4）式中：Pi最小檢測濃度Hn-噪聲峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y高度）P樣品濃度H樣品峰高（記錄儀格數(shù)或?qū)崪y高度）線性范圍：經(jīng)最小檢測濃度檢測后，以2%異丙醇的水溶液為甲溶液；系列丙酮 -2%異丙醇的水溶液為乙溶液；

9、用甲溶液沖洗樣品池若干次， 待基線穩(wěn)定后，將其調(diào)至零點位置， 然后依次注入 0.1%、0.2%1.0% 的乙溶液于樣品池中， 記錄各溶液的響應(yīng)峰值。 各重復(fù)測定 3次，取其算術(shù)平均值。對丙醇含量與峰值作圖，找出曲線拐點（比理論值低5%處），此為線性范圍的上限值并按式（4）計算其最小檢測濃度值pi，再求出ph/pi比值，即為檢測器（丙酮）的線性范圍。5.5.5熒光檢測器性能的檢定基線噪聲和基線漂移：連接好檢測器與記錄儀，吸收范圍最靈敏檔， 激發(fā)波長345nm,發(fā)射波長455nm，記錄紙速10mm/min。待檢測器溫度穩(wěn)定后，在靜態(tài)條件下，用注射器向樣品 池注入丙酮水溶液沖洗數(shù)次。然后,再注入 5

10、ml 的丙酮,堵住樣品池的出口, 5min 后,再 注入5ml 0.05mol/L的H2SO4水溶液（不應(yīng)有氣泡），然后運行基線30min40min，測量并計 算機基線噪聲和基線漂移值。最小檢測濃度和靈敏度：經(jīng)基線檢測后，用注射器慢慢注入約3ml 0.05mol/L的H2SO4水溶液于樣品池中, 待基線穩(wěn)定后, 將其調(diào)至零點位置。然后用注射器將 10-8g/ml 硫酸奎寧的硫 酸（ 0.05mol/L ）水溶液注入樣品池中,其響應(yīng)值應(yīng)達到滿量程的70%以上,重復(fù)測定 3 次,測量峰值,取其算術(shù)平均值,按式（ 4）計算最小檢測濃度,并計算靈敏度。線性范圍：經(jīng)最小檢測濃度檢測后,吸收范圍改為中間位

11、置,用注射器向樣品池注入5ml0.05mol/L的H2SO4水溶液以沖洗樣品池。然后用注射器依次將1 x 10-5g/ml、2X 10-5g/ml、3X 10-5g/ml.1 10-4Xml的硫酸奎寧硫酸（0.05mol/L ）水溶液注入樣品池中，分別記錄其 響應(yīng)峰值, 各重復(fù)測定 3 次,取其算術(shù)平均值。然后對硫酸奎寧濃度與響應(yīng)峰值作圖,找出曲線拐點（比理論值低 5%處）,此為線性上線值ph。并按式（4）計算其最小檢測濃度值 ci, 再求出ph/pi比值，即為其線性范圍。556 折光率檢測器性能的檢定基線噪聲和漂移： 連接好色譜柱、 檢測器及儀器的其它部分, 以純水為流動相, 流量 1ml/

12、min , 參比池亦為純水,范圍選擇最靈敏檔。待儀器穩(wěn)定后,運行基線30min40min ,測量并計算基線噪聲和基線漂移值。最小檢測濃度和靈敏度： 拆除色譜柱,用蒸餾水沖洗樣品池, 范圍選擇最靈敏檔, 待基線穩(wěn) 定后, 將其調(diào)至零點位置。用注射器將 10-4g/ml 的丙三醇水溶液注入樣品池中,其響應(yīng)峰值 應(yīng)達到滿量程的 70%以上,重復(fù)測定 3 次,測量峰值,取其算術(shù)平均值,按式（ 4）計算最 小檢測濃度,并計算靈敏度。線性范圍：用蒸餾水反復(fù)沖洗樣品池和參比池,然后依次向樣品池注入10-6g/ml, 10-5g/ml,10-4g/ml, 2x 10-3g/ml, 3x 10-3g/ml , 4x10-3g/ml, 5x 10-3g/ml 的丙三醇水溶液,分別記錄響 應(yīng)峰值,對丙三醇濃度與峰值作圖,求出曲線拐點（比理論值低5%處） ,此點為線性上限ph。