培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求

1、 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求 GB 4789.282013 GB 4789.282013 食品室：趙文食品室：趙文 目 錄 一一 貯存 貯存 二二 培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基的制備 三三 滅菌 滅菌 四四 培養(yǎng)基的使用 培養(yǎng)基的使用 五五 培養(yǎng)基質(zhì)量要求培養(yǎng)基質(zhì)量要求 貯存貯存 脫水合成培養(yǎng)基及其添加成分的質(zhì)量管理和質(zhì)量控 制 脫水合成培養(yǎng)基一般為粉狀或顆粒狀形式包裝于密 閉的容器中。用于微生物選擇或鑒定的添加成分通常 為凍干物或液體。培養(yǎng)基的購(gòu)買應(yīng)有計(jì)劃，以利于存 貨的周轉(zhuǎn)（即掌握先購(gòu)先用的原則）。 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保存有效的培養(yǎng)基目錄清單，清單應(yīng)包括 以下內(nèi)容：容器密閉性檢查； 記錄首

2、次開(kāi) 封日期；內(nèi)容物的感官檢查 貯存貯存 實(shí)驗(yàn)室自制的培養(yǎng)基 在保證其成分不會(huì)改變條件下保存，即避光、干燥保存，必要時(shí)在5 3 冰箱中保存: 通常建議平板不超過(guò)2周4周 瓶裝及試管裝培養(yǎng)基不超過(guò)3個(gè)月6個(gè)月 除非某些標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明保質(zhì)期比上述的更長(zhǎng)。 建議需在培養(yǎng)基中添加的不穩(wěn)定的添加劑應(yīng)即配即用，除非某些標(biāo)準(zhǔn)或 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明保質(zhì)期更長(zhǎng)； 含有活性化學(xué)物質(zhì)或不穩(wěn)定性成分的固體培養(yǎng)基也應(yīng)即配即用，不可二 次融化。 二二 培養(yǎng)基的配置培養(yǎng)基的配置 一般要求一般要求 實(shí)驗(yàn)室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時(shí)， 應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制，并記錄相關(guān)信息， 如：培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級(jí)別、每 個(gè)成分物質(zhì)含量、制

3、造商、批號(hào)、pH、 培養(yǎng)基體積（分裝體積）、無(wú)菌措施 （包括實(shí)施的方式、溫度及時(shí)間）、配 置日期、人員等，以便溯源。 二二 培養(yǎng)基的配置培養(yǎng)基的配置 實(shí)驗(yàn)用水的電導(dǎo)率在25時(shí)不應(yīng)超過(guò)25S/cm(相當(dāng)于電阻率0.4 cm)，除非另有規(guī)定要求。 水的微生物污染不應(yīng)超過(guò)103CFU/mL。應(yīng)按GB 4789.2，采用平板計(jì)數(shù)瓊脂 培養(yǎng)基，在36 1 培養(yǎng)48h2 h進(jìn)行定期檢查微生物污染。 小心稱量所需要的脫水合成培養(yǎng)基（必要時(shí)佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作， 以防吸收含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末），先加入適量的水充分混合（注意避 免培養(yǎng)基結(jié)塊），然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其 快速分散

4、，必要時(shí)應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前浸泡幾分鐘。 二二 培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備 pH pH的測(cè)定和調(diào)整的測(cè)定和調(diào)整 用用pHpH測(cè)測(cè)pHpH，必要時(shí)在滅菌前進(jìn)行調(diào)整，除特，必要時(shí)在滅菌前進(jìn)行調(diào)整，除特 殊說(shuō)明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至殊說(shuō)明外，培養(yǎng)基滅菌后冷卻至2525時(shí)，時(shí)，pHpH 應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)pHpH0.20.2范圍內(nèi)。一般使用濃度約范圍內(nèi)。一般使用濃度約 為為40g/L(40g/L(約約1mol/L)1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度的氫氧化鈉溶液或濃度 約為約為36.5g/L(36.5g/L(約約1mol/L)1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)整培的鹽酸溶液調(diào)整培 養(yǎng)基的養(yǎng)基的pHp

5、H。如需滅菌后進(jìn)行調(diào)整，則使用滅。如需滅菌后進(jìn)行調(diào)整，則使用滅 菌或除菌的溶液。菌或除菌的溶液。 分裝分裝 將配好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦校瑢⑴浜玫呐囵B(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦校?容器的體積應(yīng)比培養(yǎng)基體積最少大容器的體積應(yīng)比培養(yǎng)基體積最少大20%20%。 濕熱滅菌濕熱滅菌 濕熱滅菌在高壓鍋濕熱滅菌在高壓鍋 中進(jìn)行，一般采用中進(jìn)行，一般采用 1211213 3滅菌滅菌 15min15min，滅菌效果的，滅菌效果的 控制是關(guān)鍵問(wèn)題，控制是關(guān)鍵問(wèn)題， 加熱后采用適當(dāng)?shù)募訜岷蟛捎眠m當(dāng)?shù)?方式冷卻，以防加方式冷卻，以防加 熱過(guò)度。熱過(guò)度。 過(guò)濾除菌可在真空過(guò)濾除菌可在真空 或加壓條件下進(jìn)行?；蚣訅簵l件下進(jìn)

6、行。 使用孔徑為使用孔徑為0.20.2m m 的無(wú)菌設(shè)備和濾膜。的無(wú)菌設(shè)備和濾膜。 消毒過(guò)濾設(shè)備的各消毒過(guò)濾設(shè)備的各 個(gè)部分或使用預(yù)先個(gè)部分或使用預(yù)先 消毒的設(shè)備。消毒的設(shè)備。 應(yīng)對(duì)經(jīng)濕熱滅菌或應(yīng)對(duì)經(jīng)濕熱滅菌或 過(guò)濾除菌的培養(yǎng)基過(guò)濾除菌的培養(yǎng)基 進(jìn)行檢查，尤其要進(jìn)行檢查，尤其要 對(duì)對(duì)pHpH、色澤、滅菌、色澤、滅菌 效果或均勻度指標(biāo)效果或均勻度指標(biāo) 進(jìn)行檢查。有毒成進(jìn)行檢查。有毒成 分添加必要時(shí)應(yīng)在分添加必要時(shí)應(yīng)在 通風(fēng)柜中進(jìn)行。通風(fēng)柜中進(jìn)行。 過(guò)濾除菌過(guò)濾除菌 檢查檢查 三 滅菌 融化后的培養(yǎng)基放入4750的恒溫水浴鍋中冷卻保 溫直至使用，融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時(shí)間一般 不應(yīng)超過(guò)4

7、h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。 傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45左右。 將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長(zhǎng)儲(chǔ)存期 限。為了避免冷凝水的產(chǎn)生，平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。 儲(chǔ)存前不要對(duì)培養(yǎng)基表面進(jìn)行干燥處理。 四 培養(yǎng)基的使用 五五 培養(yǎng)基的質(zhì)量要求培養(yǎng)基的質(zhì)量要求 生長(zhǎng)特性 選擇下列方法對(duì)每批成品培養(yǎng)基或試劑進(jìn)行評(píng) 價(jià)： 定量方法； 半定量方法； 定性方法。 采用定量方法時(shí)，應(yīng)使用參考培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照； 采用半定量和定性方法時(shí)，使用參考培養(yǎng)基或能 得到“陽(yáng)性”結(jié)果的培養(yǎng)基進(jìn)行對(duì)照有助于結(jié)果 的解釋。參考培養(yǎng)基應(yīng)選擇近期批次中質(zhì)量良好 的培養(yǎng)基或是來(lái)自其他供應(yīng)商的具有長(zhǎng)期穩(wěn)

8、定性 的批次培養(yǎng)基或即用型培養(yǎng)基。 五五 培養(yǎng)基的質(zhì)量要求培養(yǎng)基的質(zhì)量要求 生長(zhǎng)率 按規(guī)定用適當(dāng)方法將適量測(cè)試菌株 的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固體和 液體培養(yǎng)基中。 每種培養(yǎng)基上菌株的生長(zhǎng)率應(yīng)達(dá)到 所規(guī)定的最低限值。 選擇性 為定量評(píng)估培養(yǎng)基的選擇性，應(yīng)按 照規(guī)定以適當(dāng)方法將適量測(cè)試菌株的 工作培養(yǎng)物接種至選擇性培養(yǎng)基和參 考培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的選擇性應(yīng)達(dá)到 規(guī)定值。 例如：XLD生長(zhǎng)率：定量測(cè)試 (TSA為參比培養(yǎng)基)PR0.5選擇性： 半定量大腸 G 5金葡 G1 五五 培養(yǎng)基的質(zhì)量要求培養(yǎng)基的質(zhì)量要求 性能評(píng)價(jià)和結(jié)果解釋性能評(píng)價(jià)和結(jié)果解釋 若按照規(guī)定的所有測(cè)試菌株的性能若按照規(guī)定的所有測(cè)試

9、菌株的性能 測(cè)試達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，則該批培養(yǎng)基或試劑測(cè)試達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，則該批培養(yǎng)基或試劑 的性能測(cè)試結(jié)果符合規(guī)定。若基本要的性能測(cè)試結(jié)果符合規(guī)定。若基本要 求和微生物學(xué)要求均符合規(guī)定，則該求和微生物學(xué)要求均符合規(guī)定，則該 批培養(yǎng)基或試劑可被接受。批培養(yǎng)基或試劑可被接受。 培養(yǎng)基不能凝固培養(yǎng)基不能凝固 制備過(guò)程中過(guò)度加熱制備過(guò)程中過(guò)度加熱 低低pHpH造成培養(yǎng)基酸解造成培養(yǎng)基酸解 稱量不正確稱量不正確 瓊脂未完全溶解瓊脂未完全溶解 培養(yǎng)基成分未充分混培養(yǎng)基成分未充分混 勻勻 pHpH不正確不正確 制備過(guò)程中過(guò)度加熱制備過(guò)程中過(guò)度加熱 水質(zhì)不佳水質(zhì)不佳 外部化學(xué)物質(zhì)污染外部化學(xué)物質(zhì)污染 測(cè)定測(cè)定pHpH時(shí)溫度不正確時(shí)溫度不正確 pHpH計(jì)未正確校準(zhǔn)計(jì)未正確校準(zhǔn) 脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差 顏色異常顏色異常 制備過(guò)程中過(guò)度加熱制備過(guò)程中過(guò)度加熱 水質(zhì)不佳水質(zhì)不佳 pHpH不正確不正確 外來(lái)污染外來(lái)污染 脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差 常見(jiàn)問(wèn)題 常見(jiàn)問(wèn)題 產(chǎn)生沉淀 制備過(guò)程中過(guò)度加熱 水質(zhì)不佳 脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差 pH未正確控制 原料中的雜質(zhì) 培養(yǎng)基出現(xiàn)抑制/低的生長(zhǎng)率 制備過(guò)程中過(guò)度加熱 脫水培養(yǎng)基質(zhì)量差 水質(zhì)不佳