熒光法測(cè)定油菜中的維生素E.

1、密 級(jí) 公 開 學(xué) 號(hào) 201240600133 衡水學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 熒光法測(cè)定油菜中的維生素E論文作者：程青青指導(dǎo)教師：周曉霞系別：應(yīng)用化學(xué)系專業(yè)應(yīng)用化學(xué)年級(jí)：2012級(jí)提交日期：2016年5月20日答辯日期：2016年6月1日畢業(yè)論文學(xué)術(shù)承諾本人鄭重承諾：所呈交的畢業(yè)論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不存在抄襲情況，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表的研究成果，也不包含他人或其他教學(xué)機(jī)構(gòu)取得的研究成果。作者簽名： 日 期： 畢業(yè)論文使用授權(quán)的說(shuō)明本人了解并遵守衡水學(xué)院有關(guān)保留、使用畢業(yè)論文的規(guī)定。即：學(xué)校有權(quán)保留或向有關(guān)部門送交畢

2、業(yè)論文的原件或復(fù)印件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公開論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文及相關(guān)資料。作者簽名： 指導(dǎo)教師簽名： 日 期： 日 期： 2012級(jí)應(yīng)用化學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文論文題目：熒光法測(cè)量油菜中的維生素E摘 要：本實(shí)驗(yàn)采用熒光法為測(cè)定方法，對(duì)油菜中的維生素E含量進(jìn)行測(cè)定。熒光光度法利用維生素E吸收較短波長(zhǎng)的光能后發(fā)射較長(zhǎng)波長(zhǎng)特征光譜的性質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行定性或定量分析。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)單一變量法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行控制，進(jìn)而探討對(duì)油菜的不同浸泡時(shí)間、萃取液的不同pH、不同溫度等實(shí)驗(yàn)條件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)油菜的浸泡時(shí)間為25min效果最好，超過(guò)此時(shí)間維生素E會(huì)受

3、到空氣的氧化；測(cè)量最佳pH為2.0；水浴的溫度應(yīng)為75，低于此溫度不利于維生素E的浸出。使用熒光法所得最佳參數(shù)為：激發(fā)波長(zhǎng)（ex）:293nm,發(fā)射波長(zhǎng)（em）:324nm。標(biāo)準(zhǔn)曲線方程I=16.488+1.1138，I為熒光強(qiáng)度，為質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)r為0.9986，檢出限為0.0030mgL-1。該方法選擇性好，靈敏度高。關(guān)鍵詞：熒光法；維生素E；油菜 IITitle：The Study About Vitamin E Content in Rape With the Method of Fluorescence Abstract: The vitamin E of rape in thi

4、s experiment is evaluated by fluorescence method. vitamin E is able to absorb the energy of light which change shorter wave length into longer waves and make an analysis of its quality and nature. This experiment is controlled by single variable method exploring factors such as different soaking tim

5、e of rape, pH and temperature influencing the results of experiment.It takes 25 minute to immerse rape, which is enough. Otherwise ,vitamin E could be oxidize by air if the time is a little longer than the regular time. The suitable pH is 6.5. It isnt good for vitamin Es leaching if it is below the

6、temperature of water bath.The best parameters are excitation wavelength equals 263nm and emission wavelength equals 324nm. The standard equation is I=16.488+1.1138，I is fluorescence , is mass concentration ,the correlation is 0.9986,detection is 0.0030mgL-1. The method has good selectivity and high

7、sensitivity.Keywords: Fluorescence method;Vitamin E;rapeII2012級(jí)應(yīng)用化學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文目 錄摘 要IAbstractII1 緒論1 1.1 維生素E的理化性質(zhì)和用途1 1.2 測(cè)定油菜中維生素E含量的方法1 1.2.1 熒光法2 1.3 本實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容32 實(shí)驗(yàn)部分4 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑4 2.1.1 主要儀器4 2.1.2 主要試劑4 2.1.3 樣品4 2.2 熒光法5 2.2.1 溶液的配制5 2.2.2 樣品的處理5 2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制5 2.2.4維生素的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜6 2.2.5最佳萃取時(shí)間的選擇8 2.2

8、.6維生素E熒光測(cè)定最佳酸度的測(cè)定8 2.2.7最佳水浴溫度的測(cè)定9 2.2.8樣品中維生素E含量的測(cè)定103 結(jié)果與討論11 3.1 熒光法測(cè)定結(jié)果11 3.1.1 熒光法法測(cè)定油菜中維生素E含量的結(jié)果11 3.1.2 熒光法測(cè)定油菜中維生素E加標(biāo)回收率的結(jié)果11結(jié) 語(yǔ)12參考文獻(xiàn)13致 謝141 緒論1.1 維生素E的理化性質(zhì)和用途 維生素E是一種粘稠狀液體，呈微黃色或黃色透明，是一種脂溶性維生素，根據(jù)相似相溶原理，維生素E易溶于有機(jī)溶劑中，例如無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚、正己烷中，在水中則不易溶。天然的維生素E（又稱生育酚）多存在于綠色植物的油脂中，是一種組成較為復(fù)雜的混和物。維生素E

9、作為一種抗氧化劑及營(yíng)養(yǎng)劑其性能十分優(yōu)良，同時(shí)又具有食用安全、生物活性高的特點(diǎn)1，在醫(yī)藥、保健品、食品、化妝品等領(lǐng)域有著極為廣泛的應(yīng)用，近年來(lái)成為倍受關(guān)注的熱點(diǎn)產(chǎn)品。維生素E是到目前為止科學(xué)家所發(fā)現(xiàn)的唯一一種對(duì)身體無(wú)毒害的油脂類食品的天然抗氧化劑，它由8種異構(gòu)體（、生育酚和三烯生育酚等）構(gòu)成，不溶于水，易溶于多種有機(jī)溶劑2。維生素E在隔絕氧氣的條件下對(duì)熱相對(duì)是穩(wěn)定的，加熱溫度達(dá)到200 也不發(fā)生結(jié)構(gòu)上的破壞，但對(duì)氧十分敏感，在和空氣接觸的條件下可以被氧化。維生素E是高效的抗氧化劑，在食品、醫(yī)療、化妝品方面有著重要應(yīng)用3。維生素E在身體內(nèi)可以保護(hù)組織細(xì)胞免受自由基損害，具有很好的抗氧化作用；因此，

10、維生素E可以起到預(yù)防衰老，促進(jìn)身體內(nèi)蛋白質(zhì)更新及合成的作用4；此外，進(jìn)一步的研究表明維生素E還與動(dòng)物的精子生成和生殖功能有關(guān)，并具有調(diào)節(jié)血小板粘附力和聚集的作用；維生素E有時(shí)候能起到代替微量元素硒，提高人體免疫力，抑制腫瘤細(xì)胞的作用。近年來(lái)，維生素E的研究逐漸為人們所關(guān)注，對(duì)其檢驗(yàn)方法、定量分析方法也逐漸成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。1.2 測(cè)定油菜中維生素E含量的方法維生素E作為一種在多個(gè)領(lǐng)域用途廣泛的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和藥用物質(zhì)，常被用于改善人體內(nèi)分泌、血管疾病和美容等方面并取得了較為滿意的效果。油菜是我國(guó)人民較常食用的一種蔬菜。油菜中維生素E含量的測(cè)定和研究，對(duì)病理學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和人民的膳食生活水平的

11、改善都有著重要的意義。進(jìn)入20世紀(jì)以來(lái)，維生素E的研究方法日益增多，越來(lái)越受到研究學(xué)者的重視。其分析方法和技術(shù)也日趨完善、成熟。李英麗等5-7論述測(cè)定維生素E 常用的分析方法有紫外分光光度法、熒光光度法、高效液相色譜法、生物測(cè)定法、比色法、鈰量法、近紅外光譜法、氣相色譜法等。國(guó)外Mehboall8等已經(jīng)使用比色法測(cè)定了維生素E在血液中的含量，其使用聯(lián)苯菲啰啉為顯色劑，F(xiàn)eCl5做氧化劑，該方法不但成本低，且簡(jiǎn)單實(shí)用，測(cè)定20份樣本只需要不到2h。國(guó)外Tutem等9則以新亞銅試劑為顯色劑，CuCl2為氧化劑在450nm處測(cè)定藥用試劑中維生素E的含量，測(cè)定的結(jié)果表明CuCl2做氧化劑時(shí)反應(yīng)條件比較

12、溫和，而且還能夠克服樣品中所含有的某些還原劑如維生素C的干擾，測(cè)定結(jié)果與FeCl5-聯(lián)苯菲啰啉比色法及HPLC法相比并無(wú)顯著性的差異，以此證明此比色法可以作為實(shí)驗(yàn)室對(duì)維生素E分析的常規(guī)方法。氣相色譜法是一種對(duì)多組分混合物適用的定性定量分析方法10。此法具有不但高度的選擇性，且集分離和測(cè)定于一體?？梢跃哂羞x擇性的對(duì)維生素E及其異構(gòu)體進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)多采用內(nèi)標(biāo)法，測(cè)定結(jié)果不受操作條件和進(jìn)樣量的影響。中國(guó)藥典多采用氣相色譜法。劉悍11等闡述了電化學(xué)測(cè)定的原理：在碳和電極上維生素E分子上的酚羥基會(huì)發(fā)生會(huì)被不可逆的氧化，其氧化還原電勢(shì)可測(cè)。維生素E分子所具有的這種電化學(xué)特性是電化學(xué)法測(cè)定待測(cè)物質(zhì)中維生素

13、E含量的原理。這種檢測(cè)方法比高效液相色譜法還要快速。本實(shí)驗(yàn)對(duì)油菜中維生素E的測(cè)定所采用的方法是熒光法。一般情況下熒光法的檢測(cè)下限可以達(dá)到0.10.001gmL-1 。因此，熒光法具有較高的靈敏度，是目前最靈敏的分析檢測(cè)技術(shù)之一。此外，熒光法具有較好的選擇性和物質(zhì)鑒定能力，因?yàn)闊晒夥治龇軌蛲瑫r(shí)兼顧熒光發(fā)射光譜和激發(fā)光譜。但是，由于待測(cè)物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)需要滿足熒光分析方法的特殊要求使得熒光分析法的通用性不如紫外可見(jiàn)分光光度法。測(cè)定維生素E的其他方法中使用色譜法裝置比較復(fù)雜，步驟繁瑣，不適合用于大量樣品的測(cè)定，分光光度法干擾因素較多，準(zhǔn)確性相對(duì)較差12。程功等13紅外光譜法吸收強(qiáng)度較弱，譜帶較寬用于

14、維生素E的測(cè)定具有低成本、快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，但主要用于成分單一、干擾少的植物油中維生素E的測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用熒光光度法利用維生素E吸收較短波長(zhǎng)的光能后發(fā)射較長(zhǎng)波長(zhǎng)特征光譜的性質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行定性或定量分析?？梢詮陌l(fā)射光譜或激發(fā)光譜進(jìn)行分析。該法靈敏度高，選擇性好且簡(jiǎn)便、快捷。1.2.1 熒光法熒光法是測(cè)定維生素E含量的一種常見(jiàn)方法。到目前為止熒光法是最靈敏的分析技術(shù)之一，具有較高的靈敏度。近年來(lái)，熒光分析技術(shù)的方法和理論不斷完善，熒光分析儀器持續(xù)發(fā)展已經(jīng)使得熒光分析法成為一種重要的光譜分析方法。熒光現(xiàn)象是一種由光導(dǎo)致的發(fā)電發(fā)光現(xiàn)象，由于維生素E分子對(duì)光具有選擇性吸收，使不同波長(zhǎng)的激發(fā)光具有不同的激發(fā)

15、效率。當(dāng)維生素E分子受到不同波長(zhǎng)的入射光的激發(fā)，并且在固定的波長(zhǎng)處測(cè)量激發(fā)出來(lái)的熒光強(qiáng)度，在繪制光譜曲線時(shí)，以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，以激發(fā)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)所繪制出的光譜為維生素E的熒光激發(fā)光譜。當(dāng)繪制維生素E熒光發(fā)射光譜時(shí)，保持激發(fā)光的強(qiáng)度和波長(zhǎng)不變，測(cè)量維生素E在不同波長(zhǎng)處發(fā)射的熒光強(qiáng)度，再繪制熒光強(qiáng)度隨發(fā)射波長(zhǎng)變化的關(guān)系曲線。在激發(fā)光譜中最大激發(fā)波長(zhǎng)所對(duì)應(yīng)的點(diǎn)是光譜中曲線的最高點(diǎn)。該波長(zhǎng)所對(duì)應(yīng)的光具有最強(qiáng)的激發(fā)能力。在激發(fā)光譜中最大發(fā)射波長(zhǎng)所對(duì)應(yīng)的點(diǎn)是激發(fā)光譜中的最高點(diǎn)。1.3 本實(shí)驗(yàn)研究?jī)?nèi)容本實(shí)驗(yàn)主要內(nèi)容為測(cè)定油菜中的維生素E，所用的方法是熒光法。熒光法具有選擇性好，靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)單

16、一變量法對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行控制，進(jìn)而探討對(duì)油菜的不同浸泡時(shí)間、萃取液的不同pH、不同浸泡溫度等實(shí)驗(yàn)條件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。通過(guò)對(duì)得出的熒光譜圖和數(shù)據(jù)進(jìn)行分析進(jìn)而確定出最佳的反應(yīng)溫度、萃取液的pH和對(duì)油菜的浸泡時(shí)間。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的過(guò)程中，使用經(jīng)過(guò)洗滌、干燥的油菜做樣品，經(jīng)過(guò)萃取得到萃取液后，對(duì)萃取液進(jìn)行熒光測(cè)定，根據(jù)熒光測(cè)定得到的數(shù)據(jù)，探討對(duì)油菜的不同浸泡時(shí)間、萃取液的不同pH、不同浸泡溫度等實(shí)驗(yàn)條件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。并依次繪制出油菜浸泡時(shí)間和維生素E熒光強(qiáng)度關(guān)系圖、不同pH萃取液同維生素E熒光強(qiáng)度關(guān)系圖、不同提取溫度和維生素E熒光強(qiáng)度關(guān)系圖，分別得出了對(duì)油菜進(jìn)行浸泡的最佳時(shí)間、熒光測(cè)定的最佳pH和對(duì)油

17、菜的最佳提取溫度，同時(shí)通過(guò)測(cè)定不同濃度系列維生素E的無(wú)水乙醇溶液繪制出維生素E的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)對(duì)維生素E標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合，得出了回歸方程和相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明維生素E溶液濃度小于10mgL-1時(shí)與熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)較好的關(guān)系。2 實(shí)驗(yàn)部分2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑2.1.1 主要儀器 表2-1 實(shí)驗(yàn)主要儀器儀器名稱型號(hào)生產(chǎn)廠家日立熒光分光光度計(jì)F-4500722上海光譜儀器有限公司電子天平FA2004N上海精科儀器有限公司容量瓶50mL廣東順德美的電器有限公司分析天平UW4200S上海精科儀器生產(chǎn)有限公司移液管1mL蘇州柏科儀器有限公司電恒溫水浴鍋HH-2重慶四達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司2.1.2 主要試劑實(shí)驗(yàn)藥品

18、規(guī)格生產(chǎn)廠家抗壞血酸溶液AR.天津天大化學(xué)試劑有限公司氫氧化鈉溶液AR.西安化學(xué)試劑廠鹽酸溶液AR.西安化學(xué)試劑廠無(wú)水乙醇AR.濟(jì)南試劑總廠無(wú)水乙醇AR.石家莊化工廠無(wú)水乙醇 AR.北京化工廠無(wú)水硫酸鈉 AR.廣西百合化工廠重蒸水 AR.濟(jì)南清岸化工廠維生素E標(biāo)準(zhǔn)液 AR.北京科華新技術(shù)有限公司表2-2 實(shí)驗(yàn)主要試劑2.1.3 樣品油菜（購(gòu)自衡水學(xué)院東家園超市）2.2 熒光法 2.2.1 溶液的配制(1)抗壞血酸溶液（2.5）：用吸量管準(zhǔn)確量取抗壞血酸2.50mL于100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至100mL，避光保存?zhèn)溆谩?2) 氫氧化鈉溶液（50）：準(zhǔn)確稱取藥品氫氧化鈉50g于燒杯中，用5

19、0mL蒸餾水溶解，轉(zhuǎn)移至容量瓶中 ，定容，留待使用。(3)鹽酸溶液（0.1molL-1）：準(zhǔn)確移取分析純濃鹽酸8.5mL，用二次蒸餾水稀釋至1000mL14。(4)維生素E標(biāo)準(zhǔn)溶液： 吸取0.50mL母液，用無(wú)水乙醇定容至10.00 mL,避光保存。2.2.2 樣品的處理1、樣品的處理：準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)洗滌、干燥、粉碎的油菜樣品大約1.5000g，放入50mL棕色容量瓶中，加入2.00mL的2%抗壞血酸溶液，5mL的2molL-1鹽酸，20mL無(wú)水乙醇，在65水浴中恒溫振蕩25min，取出在流水下冷卻至室溫。2、皂化：在上述容量瓶中加人1.0mL55%氫氧化鉀溶液，在65水浴中恒溫振蕩20min，

20、取出在流水下冷卻至室溫，加入5.0mL蒸餾水，搖勻，用無(wú)水乙醇定容至50mL。3、提?。阂迫∩鲜鋈萘科吭砘?.00mL于20mL棕色帶塞試管中，加入5.0mL無(wú)水乙醇(30一60)振蕩1min，靜置，待分層后(如有乳化現(xiàn)象，加少許無(wú)水乙醇)，用注射器移去下層，上層無(wú)水乙醇液分別用蒸餾水洗滌2-3次，即可用于測(cè)定。2.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確移取維生素E標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00、12.00mL至100mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容，編號(hào)1、2、3、4、5、6、7，濃度分別為0.000、2.000、4.000、6.000、8.000、10.00、12.0

21、0gmL-1各取 10.00mL，置比色管（編號(hào)1、2、3、4、5、6、7）中，立刻進(jìn)行測(cè)量。測(cè)量結(jié)果如圖：熒 光 強(qiáng) 度濃度（mgL-1）維生素E標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)測(cè)定不同質(zhì)量濃度的維生素E溶液，得出回歸方程I=16.488+1.1138，I為熒光強(qiáng)度，為質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)r為0.9986，檢出限為0.0030mgL-1。2.2.4維生素的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜 準(zhǔn)確量取維生素E的標(biāo)準(zhǔn)液1mL于10mL比色管中，使用無(wú)水乙醇定容 。然后，將比色管中的溶液倒入熒光比色皿中，用擦鏡紙擦去比色皿外側(cè)溶液，打開儀器蓋，將比色皿放入儀器，蓋好蓋子。開始測(cè)量。測(cè)量時(shí)，固定其他實(shí)驗(yàn)條件及發(fā)射波長(zhǎng)，只改變激發(fā)波長(zhǎng)，測(cè)量

22、得到維生素E的激發(fā)光譜。然后，固定激發(fā)波長(zhǎng)在維生素E最強(qiáng)激發(fā)波長(zhǎng)295nm處，固定其他實(shí)驗(yàn)條件，改變發(fā)射波長(zhǎng)，測(cè)量維生素E的熒光發(fā)射光譜15。實(shí)驗(yàn)測(cè)得最佳激發(fā)波長(zhǎng)（ex）:293nm,最佳發(fā)射波長(zhǎng)（em）:324nm。熒 光 強(qiáng) 度/nm圖2-1維生素E激發(fā)光譜熒 光 強(qiáng) 度/nm圖2-2維生素E發(fā)射光譜2.2.5最佳萃取時(shí)間的選擇 準(zhǔn)確稱取經(jīng)過(guò)洗凈、烘干的油菜五等份，按照2.2.2的處理方法，保持其他實(shí)驗(yàn)條件不變，水浴時(shí)間分別控制在10min、15min、20min、25min、30min,得出的維生素E提取液分別進(jìn)行熒光測(cè)定，根據(jù)所得到的熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)繪制油菜水浴處理時(shí)間和熒光強(qiáng)度的關(guān)系。實(shí)

23、驗(yàn)發(fā)現(xiàn)對(duì)油菜進(jìn)行萃取的最佳時(shí)間為25min。熒 光 強(qiáng) 度/nm圖2-3浸泡時(shí)間與熒光強(qiáng)度關(guān)系圖2.2.6維生素E熒光測(cè)定最佳酸度的測(cè)定取七只比色管編號(hào)，在七只比色管中各移取1mL維生素E標(biāo)準(zhǔn)液，使用0.1molL-1鹽酸調(diào)節(jié)pH分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，調(diào)節(jié)完成后，放入熒光測(cè)量池進(jìn)行熒光測(cè)定。根據(jù)熒光測(cè)定的數(shù)據(jù)，繪制出熒光強(qiáng)度與萃取液pH的關(guān)系曲線。測(cè)定結(jié)果表明最佳pH=2.0。熒 光 強(qiáng) 度pH圖2-4pH與維生素E熒光強(qiáng)度關(guān)系圖2.2.7最佳水浴溫度的測(cè)定 按照2.2.2的樣品處理方法，保持其他實(shí)驗(yàn)條件固定，水浴溫度分別控制為65、70、75、80、8

24、5，將得出的維生素E萃取液放入熒光測(cè)量池進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)測(cè)量數(shù)據(jù)繪制水浴溫度和維生素?zé)晒鈴?qiáng)度關(guān)系曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明最佳水浴溫度為75。熒 光 強(qiáng) 度溫度（）圖2-5溫度與維生素E熒光強(qiáng)度關(guān)系圖2.2.8樣品中維生素E含量的測(cè)定 在按照2.2.2的樣品處理方法，控制實(shí)驗(yàn)水浴時(shí)間25min，水浴溫度保持在75，熒光測(cè)定時(shí)pH調(diào)節(jié)為2.0。提取出維生素E萃取液后，在295nm處進(jìn)行熒光測(cè)定。記錄樣品重量m1熒光強(qiáng)度I1。對(duì)上述樣品液完成熒光測(cè)定后，再按照2.2.2的樣品處理方法準(zhǔn)備空白液（不加油菜，控制實(shí)驗(yàn)水浴時(shí)間25min，水浴溫度保持在75，熒光測(cè)定時(shí)pH調(diào)節(jié)為2.0），在295nm處進(jìn)行熒光測(cè)定

25、。記錄空白液的熒光強(qiáng)度I0。最后，記錄維生素E標(biāo)準(zhǔn)品用量m2，在295nm處對(duì)標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行熒光測(cè)定，記錄標(biāo)準(zhǔn)液的熒光強(qiáng)度I2。根據(jù)所得數(shù)據(jù)計(jì)算油菜中維生素E的含量。計(jì)算公式采用陰季悌16：維生素E含量（mgg-1）：I0-空白試劑的熒光強(qiáng)度I1-樣品液的熒光強(qiáng)度I2-標(biāo)準(zhǔn)維生素E溶液的熒光強(qiáng)度m1-樣品重量m2-標(biāo)準(zhǔn)維生素E重量3 結(jié)果與討論3.1 熒光法測(cè)定結(jié)果3.1.1 熒光法法測(cè)定油菜中維生素E含量的結(jié)果 采用熒光法對(duì)油菜中維生素E 含量進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得100g油菜中含有12.46mg維生素E。表3-1 熒光法測(cè)定油菜樣品中維生素E的含量序號(hào)123樣品重量m1/g1.50001.50041.

26、5002標(biāo)準(zhǔn)維生素E重量m2/mg0.16690.16810.1679I0121212I1123.6123.9123.7I2111.9120.1120.0維生素E含量12.4212.5412.50維生素E平均含量mg/100g12.46RSD %0.623.1.2 熒光法測(cè)定油菜中維生素E加標(biāo)回收率的結(jié)果 表3-2 熒光法測(cè)定油菜中維生素E的加標(biāo)回收率編號(hào)樣品維生素E含量（mg/100g）加標(biāo)量（mg）測(cè)定量（mg/100g）回收率（%）平均回收率（%）112.42100108.596.1195.53212.54100107.895.28312.50100107.795.20由上表可知，使用熒

27、光法測(cè)定油菜中維生素E的含量，平均加標(biāo)回收率為95.53%。熒光法測(cè)定維生素E的RSD 大于1，說(shuō)明其方法可行，且儀器簡(jiǎn)便。結(jié) 語(yǔ) 維生素E是一種用途廣泛的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。其被廣泛用于改善人體內(nèi)分泌，血管疾病和美容等方面。油菜是我國(guó)人們較常食用的一種蔬菜。油菜中維生素E含量的檢測(cè)和研究，對(duì)營(yíng)養(yǎng)學(xué)、病理學(xué)、臨床診斷和人民的膳食生活都有著重要的意義。 在熒光法測(cè)定油菜中的維生素E含量的試驗(yàn)中，容易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確度的主要因素包括對(duì)油菜的浸泡時(shí)間、進(jìn)行熒光測(cè)量的維生素E提取液pH以及水浴的溫度。熒光法測(cè)定油菜中的維生素E時(shí)，在對(duì)油菜的提取過(guò)程中要均勻的搖晃，否則會(huì)影響維生素E的提取效果，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低1

28、7。由于維生素E和空氣接觸會(huì)被氧氣氧化，因此，在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中加入一些還原劑是必要的，本實(shí)驗(yàn)采用抗壞血酸溶液做還原劑。能夠很有效的避免維生素E被氧化。在對(duì)油菜的處理過(guò)程中，皂化時(shí)容易產(chǎn)生渾濁，靜置處理就會(huì)分層，能得到澄清的維生素E提取液。從而得到正確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。經(jīng)測(cè)定不同質(zhì)量濃度的維生素E溶液，得出當(dāng)維生素標(biāo)準(zhǔn)液濃度在0-10mgL-1范圍內(nèi)，濃度和熒光強(qiáng)度成交好的線性關(guān)系，回歸方程為I=16.488+1.1138，I為熒光強(qiáng)度，為質(zhì)量濃度，相關(guān)系數(shù)r為0.9986，檢出限為0.0030mgL-1。本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在75，對(duì)油菜提取25min，將所得提取液pH控制為2.0，能得出油菜中維生素

29、E的含量為12.46mg100g-1。熒光法該法靈敏度高，選擇性好且簡(jiǎn)便、快捷。參考文獻(xiàn)1 朱圣東,吳迎.天然維生素E的制備及應(yīng)用J.精細(xì)石油化工進(jìn)展，2011,2,(1):30-34.2 向慧敏,代志凱,吳陽(yáng)豐,等.維生素E檢測(cè)技術(shù)的研究進(jìn)展J.中國(guó)食品添加劑，2011,（3）:180-181.3 王豐玲,張英鋒,鄭向美,等.天然維生素E的制備、抗氧化機(jī)理及應(yīng)用前景J.化學(xué)教育,2007,（12）:10-12.4 郭健,李敏,孟巖.測(cè)定食品中維生素E熒光分光光度法的探討J.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2013,（13）:348-349.5 李英麗,鄧連琴,果秀敏,等.同步熒光法測(cè)定蔬菜中維生素E含量J.河北大學(xué)學(xué)報(bào)，2009,24(29):412-414.6 李書國(guó),薛文通,陳輝,等.食用油維生素E分析檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展J.糧食與油脂，2006.（10）:26-27.7 黃旭.食品中維生素E的檢測(cè)方法綜述J.分析與檢測(cè)，2015.（2）:83-84.8 MehbooaliN Perwaiz Iqbalm. Asimple micro method for determination of plasma levels oftocopherol (vitamin E) in pakistan inorma