反相高效液相色譜法測(cè)定迷迭香中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的含量

1、反相高效液相色譜法測(cè)定迷迭香中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的含量 中圖分類號(hào)：r282.71文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：b文章編號(hào)：10061533(2009)10046902 迷迭香(rosmarinus officinalis l.)系唇形科迷迭香屬多年生草本植物，原產(chǎn)于歐洲及北非地中海沿岸，現(xiàn)在我國(guó)云南、湖南、四川、貴州等地也有種植。迷迭香是一種多用途的經(jīng)濟(jì)作物，從中可提取抗氧化劑、迷迭香精油和醫(yī)藥中間體?？寡趸瘎┦菑拿缘阒参镏刑崛〉玫降姆勰钗镔|(zhì)，主要成分是具有抗氧化功能的酚、酸、黃酮類成分，結(jié)構(gòu)明確的活性成分有鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚等；迷迭香提取物具有高效、無毒的抗氧化效果，可廣泛應(yīng)用于食品、

2、功能食品、香料、調(diào)味品和日用化工等行業(yè)中。筆者以反相高效液相色譜法(hplc)測(cè)定迷迭香中鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的含量，重現(xiàn)性好，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，適用于迷迭香的質(zhì)量控制。 1儀器與試藥 agilent 1100高效液相色譜儀(美國(guó))；ae 240電子天平(metrler toledo，上海)；re 5286a旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮)。8批樣品經(jīng)中南大學(xué)藥學(xué)院鑒定，均為唇形科迷迭香屬植物迷迭香。甲醇為hplc級(jí)，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。鼠尾草酚和鼠尾草酸對(duì)照品購(gòu)自sic-ma公司；熊果酸購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。 2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果 2.1色譜條件 色譜柱：kromasil 100

3、-5c18(4.6 mm250 mm,5m)；流動(dòng)相：甲醇-0.2磷酸溶液(82：18)；流速為1 ml/min；紫外檢測(cè)器測(cè)定鼠尾草酚和鼠尾草酸檢測(cè)波長(zhǎng)：284 mm，測(cè)定熊果酸檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm。進(jìn)樣量10l。 2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鼠尾草酚、鼠尾草酸對(duì)照品適量，加乙醇溶解，定容至25 ml量瓶中，其濃度分別為0.1和0.3 mg/ml，作為對(duì)照品混合貯備液。精密稱取熊果酸對(duì)照品適量，加乙醇溶解，制成每1 ml含0.3 mg的溶液，作為熊果酸對(duì)照品溶液。 2.3供試品溶液的制備 稱取樣品粉末0.5 g，精密稱定，精密加入乙醇50 ml，稱定重量，加熱回流提取1 h，冷卻，再稱

4、定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45m)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 2.4供試品溶液系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 按“2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液。在上述色譜條件下測(cè)定，分別測(cè)得鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸的相對(duì)保留時(shí)間分別為6.4、15.8和47.7 min，理論塔板數(shù)分別為11186、14350和15329，分離度均大于1.8，符合定量要求。 2.5線性關(guān)系考察 分別精密吸取上述已配制的3種對(duì)照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0 ml，加乙醇定容成10 ml，各進(jìn)樣10l，記錄色譜圖，以濃度c(mg/ml)對(duì)峰面積a進(jìn)行回歸，得回歸方程。 2.6精密度試驗(yàn) 精密

5、吸取同一份供試品溶液，在上述色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算rsd，鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸rsd分別為0.44、0.31和0.60。 2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10l，每6 h左右進(jìn)樣1次，測(cè)定、記錄峰面積，以峰面積計(jì)算rsd，鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸rsd分別為1.38、1.10和1.94(n=6)。結(jié)果表明供試品溶液在室溫條件下放置30 h比較穩(wěn)定。 2.8重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品粉末0.5 g，共6份，精密稱定，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，進(jìn)樣10l，按外標(biāo)法計(jì)算。測(cè)得迷迭香鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸平均含量分別為0.60、2.41和1.98，

6、rsd分別為1.26、1.43和1.77(n=6)，該方法的重復(fù)性較好。 2.9加樣回收率試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取已鋇4定含量的迷迭香粉末0.25 g，共9份，精密稱定，分別置于50 ml量瓶中，每3份為1組，分別準(zhǔn)確加入鼠尾草酚、鼠尾草酸和熊果酸對(duì)照品混合貯備液5.0、10.0、15.0 ml，按照“2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液。按上述色譜條件進(jìn)行分析。3種濃度(高、中、低)的加樣回收率結(jié)果見表2。 2.10樣品測(cè)定 按照“2.3”項(xiàng)下方法制備不同產(chǎn)地的供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果列于表3。 3討論 1)根據(jù)所測(cè)成分的溶解性，本實(shí)驗(yàn)考察了用甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯等溶媒和超聲、回流等提取方法。結(jié)果表明，以乙醇回流1 h的提取方式，提取出來的雜質(zhì)較少，通過加樣回收率試驗(yàn)驗(yàn)證該方法提取充分。 2)試驗(yàn)中，鼠尾草酚、鼠尾草酸含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)根據(jù)其各自的紫外最大吸收確定。熊果酸中無共軛體系，紫外吸收波長(zhǎng)較短，熊果酸吸收峰在210 nm附近靈敏度較高，其他色譜峰干擾較小，分離最為理想，故試驗(yàn)選用210m作為熊果酸含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。 3)試驗(yàn)用的高效液相色譜條件是在參考有關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，經(jīng)過優(yōu)化、篩選而確定的。采用2磷酸溶液一甲醇系統(tǒng)，基線平穩(wěn)，峰形、分離效果