感染性疾病及免疫學(xué)檢測(cè)

1、 傳染?。簜魅静。菏遣≡w以某種方式進(jìn)入到是病原體以某種方式進(jìn)入到 人體后，并在人體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，釋放人體后，并在人體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖，釋放 毒素或?qū)е聶C(jī)體內(nèi)微生態(tài)平衡失調(diào)，毒素或?qū)е聶C(jī)體內(nèi)微生態(tài)平衡失調(diào)， 給人體的組織和器官造成一定的損傷給人體的組織和器官造成一定的損傷 而引起的疾病。而引起的疾病。 病原體病原體易感人群易感人群 輔助診斷及鑒別診斷輔助診斷及鑒別診斷 判斷療效及預(yù)后判斷療效及預(yù)后 流行病學(xué)調(diào)查流行病學(xué)調(diào)查 是由一組嗜是由一組嗜 肝病毒肝病毒引起的，以肝臟炎癥和壞死引起的，以肝臟炎癥和壞死 病變病變?yōu)橹鞯臑橹鞯囊环N傳染病。主要表現(xiàn)一種傳染病。主要表現(xiàn) 為明顯的消化道癥狀、全身疲乏無(wú)為明

2、顯的消化道癥狀、全身疲乏無(wú) 力，肝臟腫大。肝功能異常，部分力，肝臟腫大。肝功能異常，部分 病例出現(xiàn)黃疸。病例出現(xiàn)黃疸。 IgM：近期感染：近期感染HAV,發(fā)病發(fā)病2周后陽(yáng)性周后陽(yáng)性 率為率為100%，3個(gè)月后轉(zhuǎn)陰。個(gè)月后轉(zhuǎn)陰。 IgG： 既往既往 感染感染HAV RNA：早期診斷的特異性指標(biāo)：早期診斷的特異性指標(biāo) 現(xiàn)有現(xiàn)有HBV感染者約感染者約1.6億億 l管型管型 l小球型小球型 l大球型大球型 HBsAg與與HBsAb HBeAg與與HBeAb HBcAg與與HBcAb 有包膜雙股有包膜雙股DNA病毒病毒 三組三組Ag-Ab系統(tǒng)：系統(tǒng)： 是感染的標(biāo)志是感染的標(biāo)志 見于體液和分泌物見于體液和

3、分泌物 中，也可見于唾中，也可見于唾 液、精液、乳汁中液、精液、乳汁中 介導(dǎo)病毒結(jié)合肝細(xì)胞介導(dǎo)病毒結(jié)合肝細(xì)胞 3-6個(gè)月產(chǎn)生個(gè)月產(chǎn)生 有抵抗力的標(biāo)志有抵抗力的標(biāo)志 阻斷病毒結(jié)合肝細(xì)胞阻斷病毒結(jié)合肝細(xì)胞 病毒復(fù)制的標(biāo)志，傳病毒復(fù)制的標(biāo)志，傳 染性強(qiáng)染性強(qiáng) 病毒合成后釋放到血液病毒合成后釋放到血液 中中 治療的參考指標(biāo)治療的參考指標(biāo) 病毒復(fù)制減少的標(biāo)志，病毒復(fù)制減少的標(biāo)志， 傳染性弱傳染性弱 要先于要先于HBsAb出現(xiàn)出現(xiàn) 存在于病毒核心，不存在于病毒核心，不 釋放至血液釋放至血液 抗原性強(qiáng)抗原性強(qiáng) 出現(xiàn)早，消退晚出現(xiàn)早，消退晚 IgM: 近期感染近期感染HBV IgG: 既往感染既往感染HBV

4、乙肝五項(xiàng)少見模式分析乙肝五項(xiàng)少見模式分析 呈世界性分布呈世界性分布 極易慢性化，與肝硬化、原發(fā)性肝癌極易慢性化，與肝硬化、原發(fā)性肝癌 關(guān)系密切關(guān)系密切 有包膜的單股正鏈有包膜的單股正鏈RNA病毒病毒 抗抗HCV抗體非保護(hù)性抗體抗體非保護(hù)性抗體 輸血和非腸道途徑傳播輸血和非腸道途徑傳播 主要檢測(cè)主要檢測(cè)IgG 檢測(cè)方法：檢測(cè)方法： ELISA 化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光 0 20000 40000 60000 年 份 AIDS 53523295238126136230233714 1028 6120 12652 7550 7909 8539 HIV/AIDS 492216261274531 1567 26

5、49 3343 3306 4677 5201 8219 9732 2169147606407114407039866 85- 90 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 1-10 我國(guó)歷年艾滋病病毒感染者和病人數(shù)我國(guó)歷年艾滋病病毒感染者和病人數(shù) HIV-1和和HIV-2 逆轉(zhuǎn)錄病毒逆轉(zhuǎn)錄病毒 兩股相同的正鏈兩股相同的正鏈RNA CD4 抗原抗原 輔助受體輔助受體 CD4+ 細(xì)胞細(xì)胞 HIV gp120 結(jié)合結(jié)合CD4 / 輔助受體輔助受體 篩選試驗(yàn)：敏感性高，如篩

6、選試驗(yàn)：敏感性高，如ELISA，膠體金標(biāo)記層析法。，膠體金標(biāo)記層析法。 確診試驗(yàn)：特異性高，如蛋白印跡試驗(yàn)和確診試驗(yàn)：特異性高，如蛋白印跡試驗(yàn)和IFA 抗體最早在感染后二周，最晚三個(gè)月會(huì)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性抗體最早在感染后二周，最晚三個(gè)月會(huì)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性 初篩試驗(yàn)初篩試驗(yàn)2次陽(yáng)性，再進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)次陽(yáng)性，再進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn) 樣品 初篩檢測(cè)初篩檢測(cè) 陽(yáng)性反應(yīng)陰性反應(yīng) 篩查試劑 復(fù)查復(fù)查 原有試劑加另一種篩選試劑 均陽(yáng)性反應(yīng)一陰一陽(yáng)均陰性反應(yīng) 送確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)報(bào)告陰性 確診試驗(yàn)陽(yáng)性，有臨床癥狀，診斷為確診試驗(yàn)陽(yáng)性，有臨床癥狀，診斷為AIDS 確診試驗(yàn)陽(yáng)性，無(wú)臨床癥狀，診斷為確診試驗(yàn)陽(yáng)性，無(wú)臨床癥狀，診斷為HIV感染者感染

7、者 確診試驗(yàn)陰性，但初篩試驗(yàn)陽(yáng)性或有臨床癥狀，確診試驗(yàn)陰性，但初篩試驗(yàn)陽(yáng)性或有臨床癥狀， 3個(gè)月后復(fù)查個(gè)月后復(fù)查 是梅毒螺旋體引起的 一種慢性傳染病，本病的 特點(diǎn)是病程的長(zhǎng)期性和潛 匿性，病原體可侵犯任何 器官，臨床表現(xiàn)出各種不 同的癥狀。 p 一期梅毒：硬性下疳； p 二期梅毒：梅毒疹； p 三期梅毒：累及心、肝、神經(jīng)系統(tǒng)、骨等。 后天性梅毒（獲得性）： 95%性交 傳播，少數(shù)因輸血、接吻、醫(yī)務(wù)人員不慎 受染等直接接觸傳播。 先天性梅毒（胎傳梅毒）： 梅毒螺旋 體可自患病母體的血液經(jīng)胎盤傳給胎兒 傳播方式傳播方式 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：是以心磷脂、卵磷脂及膽：是以

8、心磷脂、卵磷脂及膽 固醇作為抗原檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗(yàn)及療固醇作為抗原檢查血清中的反應(yīng)素，用于初篩試驗(yàn)及療 效觀察?？梢苑譃橐韵滤姆N試驗(yàn)，原理基本相同：效觀察。可以分為以下四種試驗(yàn)，原理基本相同： 1、性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（、性病研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)（VDRL) ：由于試劑需現(xiàn)配由于試劑需現(xiàn)配 現(xiàn)用，故而國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室很少采用。但現(xiàn)用，故而國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室很少采用。但VDRL是唯一可用是唯一可用 于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學(xué)方法于神經(jīng)性梅毒診斷的血清學(xué)方法 2、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)、快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn) (RPR)：在特制的紙片在特制的紙片 上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出

9、現(xiàn)上進(jìn)行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗體出現(xiàn) 凝集，用肉眼可觀察結(jié)果。凝集，用肉眼可觀察結(jié)果。 3、甲苯胺紅試驗(yàn)（、甲苯胺紅試驗(yàn)（TRUST)：在試劑中加入甲苯胺紅代替在試劑中加入甲苯胺紅代替 炭粉炭粉 顆粒，使結(jié)果更易于觀察。顆粒，使結(jié)果更易于觀察。 4、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（、不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR) 梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（一）梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（一） RPR TRUST VDRL 滴度：出現(xiàn)凝集 反應(yīng)的血清最高 稀釋倍數(shù)。 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的缺陷：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的缺陷： 1、特異性：由于在多種疾病，如急性病毒性感染、自身免疫、特異性：由于在多種疾病，如急性病毒性感染

10、、自身免疫 性疾病、性疾病、 結(jié)締組織病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以結(jié)締組織病、靜脈吸毒者以及懷孕婦女中均可出現(xiàn)反應(yīng)素，所以 此類試驗(yàn)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)此類試驗(yàn)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng). 2、敏感性：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)有時(shí)出現(xiàn)弱陽(yáng)性或陰性結(jié)果，、敏感性：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)有時(shí)出現(xiàn)弱陽(yáng)性或陰性結(jié)果， 而臨床上又像二期梅毒，此時(shí)應(yīng)將此血清稀釋后做定量試驗(yàn)，如而臨床上又像二期梅毒，此時(shí)應(yīng)將此血清稀釋后做定量試驗(yàn)，如 出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，則為抗體過(guò)量引起的前帶現(xiàn)象。出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果，則為抗體過(guò)量引起的前帶現(xiàn)象。12二期梅毒二期梅毒 病人可出現(xiàn)此現(xiàn)象而發(fā)生梅毒血清假陰性反應(yīng)。此外，由于

11、感染病人可出現(xiàn)此現(xiàn)象而發(fā)生梅毒血清假陰性反應(yīng)。此外，由于感染 梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應(yīng)梅毒后反應(yīng)素的出現(xiàn)晚于特異性梅毒螺旋體抗體，晚期梅毒反應(yīng) 素又可能轉(zhuǎn)陰，因此這類試驗(yàn)不適于一、三期梅毒，對(duì)隱性梅毒素又可能轉(zhuǎn)陰，因此這類試驗(yàn)不適于一、三期梅毒，對(duì)隱性梅毒 和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此此類試驗(yàn)做梅毒初篩時(shí)，存在一定數(shù)和神經(jīng)梅毒也不敏感。因此此類試驗(yàn)做梅毒初篩時(shí)，存在一定數(shù) 量的漏檢量的漏檢. 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)： 1、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)表現(xiàn)為滴度隨療程逐漸下降，故可以、非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)表現(xiàn)為滴度隨療程逐漸下降

12、，故可以 作為療效觀察的指標(biāo)作為療效觀察的指標(biāo) 2、此類方法價(jià)格低廉、此類方法價(jià)格低廉 梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（二）梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（二） 梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)：用梅毒螺旋體作為抗：用梅毒螺旋體作為抗 原檢測(cè)血清中的抗螺旋體原檢測(cè)血清中的抗螺旋體IgMIgM和和/ /或或IgGIgG抗體，其敏抗體，其敏 感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法：感性和特異性均較高。常用的有以下五種方法： 1 1、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS)FTA-ABS) 2 2、梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)（TPHATPHA） 3 3、梅毒螺

13、旋體明膠凝集試驗(yàn)（梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA)TPPA) 4 4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISATP-ELISA） 5 5、梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)（TP-RTTP-RT） 梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（三）梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（三） 梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA） 原理：原理： TPPA的原理與的原理與TPHA基本相同，它以人工合成的基本相同，它以人工合成的 惰性明膠顆粒代替惰性明膠顆粒代替TPHA試驗(yàn)的紅細(xì)胞作為載體，試驗(yàn)的紅細(xì)胞作為載體， 是是TPHA的升級(jí)產(chǎn)品的升級(jí)產(chǎn)品 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 1、試劑穩(wěn)定，批間差

14、小試劑穩(wěn)定，批間差小 2、結(jié)果判讀更為清晰明確結(jié)果判讀更為清晰明確 3、敏感性和特異性較敏感性和特異性較TPHA進(jìn)一步提高進(jìn)一步提高 4 4、通過(guò)了國(guó)家的批批檢、通過(guò)了國(guó)家的批批檢 不足：結(jié)果判定主觀，較難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化不足：結(jié)果判定主觀，較難實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（四）梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（四） 賽樂(lè)迪亞（賽樂(lè)迪亞（Serodia）TPPA 梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗(yàn)梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗(yàn) 梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)（TP-ELISA） 原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢原理：以梅毒螺旋體抗原包被聚丙乙烯板，再加入待檢 血清以及酶標(biāo)抗原，形成雙抗原

15、夾心，同時(shí)檢測(cè)血清以及酶標(biāo)抗原，形成雙抗原夾心，同時(shí)檢測(cè) IgG、IgM抗體。少數(shù)試劑采用間接法，檢測(cè)抗體。少數(shù)試劑采用間接法，檢測(cè)IgG 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：1、敏感性和特異性較高、敏感性和特異性較高 2、價(jià)格較低，適合于對(duì)大量樣品的篩查、價(jià)格較低，適合于對(duì)大量樣品的篩查 不足：各家不足：各家ELISA試劑盒采用的抗原和工藝不同，使測(cè)試劑盒采用的抗原和工藝不同，使測(cè) 定的敏感性和特異性產(chǎn)生較大的差異，臨床實(shí)驗(yàn)定的敏感性和特異性產(chǎn)生較大的差異，臨床實(shí)驗(yàn) 室在選用室在選用ELISA試劑前應(yīng)認(rèn)真進(jìn)行評(píng)估試劑前應(yīng)認(rèn)真進(jìn)行評(píng)估 梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（五）梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（五） 梅毒螺旋體快速診斷試驗(yàn)梅毒螺旋體快速

16、診斷試驗(yàn)（TP-RT） 原理：雙抗原夾心免疫層析試驗(yàn)或間接法免疫滲濾試驗(yàn)，原理：雙抗原夾心免疫層析試驗(yàn)或間接法免疫滲濾試驗(yàn)， 多采用膠體金進(jìn)行標(biāo)記，同時(shí)檢測(cè)多采用膠體金進(jìn)行標(biāo)記，同時(shí)檢測(cè)IgG、IgM抗體抗體 （雙抗原夾心法）或單測(cè)（雙抗原夾心法）或單測(cè)IgG抗體（間接法）抗體（間接法） 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：1、簡(jiǎn)便、快速，不需要特殊的儀器、簡(jiǎn)便、快速，不需要特殊的儀器 2、適合于單人份操作，可用于較緊急的場(chǎng)合、適合于單人份操作，可用于較緊急的場(chǎng)合 不足：不足：1、臨床評(píng)估資料不多，敏感性、特異性尚有待進(jìn)、臨床評(píng)估資料不多，敏感性、特異性尚有待進(jìn) 一步考查一步考查 2、無(wú)法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，結(jié)果判斷主觀、無(wú)法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，結(jié)果判斷主觀 3、測(cè)定結(jié)果受溫度和時(shí)間的影響較大、測(cè)定結(jié)果受溫度和時(shí)間的影響較大 4、未通過(guò)國(guó)家的批批檢、未通過(guò)國(guó)家的批批檢 梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（六）梅毒的血清學(xué)試驗(yàn)（六） 梅毒免疫層析快速檢測(cè)方法梅毒免疫層析快速檢測(cè)方法 非特異非特異 特異性特異性 意義意義 RPR TP 排除梅毒排