第二節(jié)質(zhì)量檢驗的基本程序與方法

1、第二節(jié) 質(zhì)量檢驗的基本程序與方法朱逢佳 01藥2 301190102n鑒別試驗n雜質(zhì)檢查n安全性檢查n含量（效價）測定一、鑒別試驗 鑒別：利用化學法、物理法及生物學方法來確證生化藥物和基因工程藥物的真?zhèn)?。通常需要用標準品或?qū)φ掌吩谕粭l件下進行對照試驗加以確證。 理化鑒別法 生化鑒別法 生物鑒別法（一）理化鑒別法1、化學鑒別法v呈色法 e.g. 溶菌酶分子中的四個肽鍵上的氮原子能與cu2+絡合，生成有顏色的配位化合物，肽鍵越多，顏色越深。v沉淀法 e.g.胃蛋白酶受酸、堿、重金屬或有機溶劑的作用，蛋白質(zhì)肽鏈的空間結構被破壞，引起變性而產(chǎn)生不溶性沉淀。 鞣酸、沒食子酸或多種重金屬鹽溶液（ch.p

2、2000) 2、紫外分光光度法 利用藥物中的共軛系統(tǒng)在紫外區(qū)有特征吸收用于鑒別。 3、高效液相色譜法 利用對照品溶液和供試品溶液色譜圖的保留時間和肽圖譜的一致性進行鑒別。 （二）、生化鑒別法1.酶法 e.g. 尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有相同作用的鏈激酶不能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區(qū)別，并用直接觀察溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判斷指標。2.電泳法 電泳：在電解質(zhì)溶液中，帶電粒子或離子在電場的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現(xiàn)象。 e.g.肝素糖凝膠電泳法3.樣品脫鹽后用等電點聚焦法測定 對于同一個產(chǎn)品來說不管有幾個等電點，但批與批之間必須一致，可表明其工藝穩(wěn)定（三）

3、、生物鑒別法 利用生物體進行試驗來鑒別藥物。 e.g.胰島素家兔驚厥試驗 二、雜質(zhì)檢查（一）一般雜質(zhì)檢查 包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的澄清度或溶液的顏色、水分及干燥失重、熾灼殘渣等。（二）特殊雜質(zhì)檢查 特殊雜質(zhì)主要是指從生產(chǎn)工藝中引入或原料中帶入的雜質(zhì)。許多生化藥物是從生物組織中提取或用微生物發(fā)酵法制得，藥物中易殘存一些雜質(zhì)或其他成分。 1.原料藥的純度分析 2.生產(chǎn)過程中雜質(zhì)的檢查基因工程藥物的質(zhì)量控制要比用傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的生物藥物有更高的要求。三、安全性檢查（一）熱原檢查法和細菌內(nèi)毒素檢查法（二）異常毒性試驗（三）過敏試驗（四）降壓物質(zhì)試驗（五）無菌試驗（六）

4、基因工程藥物中可能雜質(zhì)與污染物檢查（七）致突變試驗（八）生殖毒性試驗n熱原檢查法（家兔法） 本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，以其體溫升高的程度，判定該供試品中所含熱原是否符合規(guī)定，是一種限度試驗法。n細菌內(nèi)毒素檢查法 利用鱟試劑和細菌內(nèi)毒素的凝聚反應。 異常毒性試驗是用一定劑量的藥物按指定的操作方法和給藥途徑給予規(guī)定體重的某種試驗動物，觀察其急性毒性反應。反應的判斷以試驗動物死亡與否為終點。 中國藥典（1995年版）中規(guī)定了50多種藥物需做異常毒性檢查。 動物：小鼠 給藥途徑：尾靜脈注射法，皮下注射法，腹腔注射法，口服給藥 結果判斷：除另有規(guī)定外，全部5只小鼠在給藥后48小時內(nèi)不得

5、有死亡；如有死亡時，應另取體重1819g的小鼠10復試，全部小鼠在48小時內(nèi)不得有死亡。 （chp2000附錄c） 過敏試驗是檢查異性蛋白的試驗。藥物中若夾雜有異性蛋白，在臨床使用時易引起病人多種過敏反應，輕者皮膚出現(xiàn)紅斑或丘疹，嚴重者可出現(xiàn)窒息、發(fā)結、血管神經(jīng)性水腫、血壓下降，甚至休克和死亡。因此，有可能存在異性蛋白的藥物、應作過敏試驗。 動物：豚鼠n降壓物質(zhì)：指某些藥物中含有的能導致血壓降低的雜質(zhì)，包括組胺、類組胺或其他導致血壓降低的物質(zhì)。n危害：面部潮紅，脈搏加速，血壓下降n來源：在用動物臟器或組織為原料制備生化藥物的過程中，正常組織內(nèi)存在的組胺及部分氨基酸脫羧形成的組胺、酪胺等胺類物質(zhì)

6、。n方法：比較對照品和供試品引起麻醉貓（或狗）血壓下降的程度，以判斷供試品中所含降壓物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。 chp2000n無菌檢查法是檢查藥品及敷料是否染有活菌的一種方法，是藥典中較重要的檢查項目之一。n由于許多生化藥物是在無菌條件下制備的，且不能高溫滅菌。因此，無菌檢查就更有必要。n中國藥典中幾乎所有的注射用藥均做無菌檢查。n參照中國生物制品規(guī)程n基因工程藥物中可能的雜質(zhì)： 殘留dna、宿主細胞蛋白質(zhì)、內(nèi)毒素、蛋白質(zhì)突變體和蛋白質(zhì)裂解物等。n主要檢查項目： 外源性dna、宿主細胞蛋白質(zhì)、其他有關雜質(zhì)和細菌內(nèi)毒素。致突變試驗包括： 微生物回復突變試驗檢測基因突變 哺乳動物培養(yǎng)細胞染色體畸變

7、試驗檢測是否影響dna結構或改變信息 嚙齒動物微核試驗染色體畸變試驗的補充 微生物電極法的致突變試驗鼠傷寒沙門菌營養(yǎng)缺陷型回復突變試驗中國倉鼠肺細胞（chl)nih小鼠生殖毒性試驗包括：一般生殖毒性試驗 反映對生殖過程第一階段的影響（妊娠前和妊娠初期）致畸敏感期毒性試驗生殖過程第二階段的影響圍生期毒性試驗生殖過程第三階段（分娩前后和泌乳期） 四、含量（效價）測定含量表示方法百分含量結構明確的小分子藥物或經(jīng)水解后變成小分子的藥物生物效價或酶活力單位酶類和蛋白質(zhì)等藥物22n含量測定 1.hplc法 應用適當?shù)姆治鲋鶞y定產(chǎn)品的總體純度。達95以上。 2.十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法（sds-page法） 產(chǎn)品若存在聚合體，