維生素類藥物分析講義教學(xué)文案

1、維生素類藥物分析講義第一節(jié)維生素A的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)CH3 CH3 CH3 i,、8、6、4、2(CH3C ”彳具有共覘多烯醇側(cè)鏈的環(huán)己烯R :維生素A醇 -COCH3維生素A醋酸酯-COC15H31維生素A棕櫚酸酯.5性質(zhì)具有UV吸收存在多種立體異構(gòu)化合物 易發(fā)生脫氫、脫水、聚合反應(yīng)易被氧化VitA紫外線、8氧化劑環(huán)氧化物|OVitA醛或酸結(jié)構(gòu)相對生物效價維生素A全反式325.5100%新維生素Aa2-cis32875%新維生素Ab4- cis320.524%新維生素Ac2,4-dicis310.515%異維生素Aa6-cis32321%異維生素Ab2,6-dicis32424%ch3I

2、J/CH3JCH3ch3去氫脫水VitACH2OHVitA2VitA3xCH2OHK/CH2OHCH3鯨醇ch2oh環(huán)氧化物刁o、HVitA 醛VitA 酸二、鑒別試驗()三氯化舖反應(yīng)VitASbCl3怙山CHCI3藍(lán)色紫紅色條件 無水、無醇(二)UV法 BPVitA無水乙殍卑去水VitA入 max 為326nm入 max 為350390nm一個吸收峰三個吸收峰4000ch3ch3ch3/CH3VitA去水VitA ( VitA3 ) 000000 80(g 胃)y2010300400波長(nm)圖9-1維生素A和去水維生素A的紫外吸收光譜1維生素A 2去水維生素A（三）TLC法BP、USP

3、對照品法顯色劑三、含量測定()UV法三點校正法立體異構(gòu)體 氧化產(chǎn)物及光照產(chǎn)物 合成中間體去氫維生素A ( VitA2 )去水維生素A ( VitA3 )VitA的含量表示生物效價(IU/Q! International Unit1l_1IU = 0.344ug全反式VitA醋酸酯二 0.300ugVitAWVitA醋酸酯VitA 醇1IU0.344ug0.300ug效價(HU/g )2.907 X 1063.33 X 106TP 1%Hem 328nm1530cm 325m 1820效價E驚（換算因子）19001830結(jié)果計算公式為:(E品(E：c加標(biāo)X效價效價x (Eicm)g|=換算因子X

4、 (Em)三點校正法波長的選擇等波長差法測定對象VitA醋酸酯入328 入316 =入340 -入328等吸收度法（皂化法）測定對象VitA6/7Au = Au = Au三點校正法第一法等波長差法人2入1入3 nm316328 340圖9-2維生素A等波長差校正法圖解圖9-3維生素A幾何校正法圖解A 入 2=A&=6/7A入1測定方法1、第一法維生素A醋酸酯按表中各波長分別測定吸收度，計算AI/A328規(guī)定吸收度比值X (nm)300316328340360Ai/A3280.555 0.9071.000 0.8110.299判斷方法(1)若入 max=32600329nm, |(Ai/A328

5、)M-規(guī)定值| W0 02 貝!|用A328處的測得值計算。供試品中效價(iu/g) = (E豊加X1900(2)若入 max=326s329nm, W|(Ai/A328)w-規(guī)定伺0. 02 則用校正公式校正后計算f值再判斷：A328 (校正)=3.52 ( 2A328-A316 - A340)A328 （校正） A328A328X100%若f值在土 3%以內(nèi)，仍以未校正的A328計算。若f值在-15%s_3%以內(nèi)，用校正后的A328 （校正）計算。供試品中效價（IU/g）二E驚（校正）X1900若f值3%或-15%,采用第二法測定。第二法第二法-15%3%03%例：Vi HAD膠丸中Vi

6、tA的含量測定精密稱取本品（規(guī)格lOOOOVitAIU/丸）裝量差異項下（平均裝量008262g/丸）的內(nèi)容物0.2399g 至250ml量瓶中,用環(huán)己烷稀釋至刻度搖勻；精 密量取20ml ,置另_20 ml量瓶中,用環(huán)已烷稀釋至刻度,搖勻。以環(huán)己烷為空白,測定最大吸收波長為328nm ,并在下列波長處測得吸收度為0.354 0.5610.628A340A3600.5230.216求本品中維生素A的標(biāo)示百分含量? o + o1o o +IIIIIIo oI1IIII3 s o E6 QO 1ooI E E Q o 寸 o wgE00 z E wz E韻爲(wèi)111?11|舊快 I66ZOEo 00

7、0I卜 060sssowiQOZEy09ElQOZElTrElooZElZEl gzElIE-Qozcly 00E!2計算A328 （校正）3計算f值鼻一叫 %)4計算標(biāo)示百分含量（校正）A328 (校正)c(C : g/100ml)VitA效價(IU/g)=(校正)X1900VitA效價X平均丸重標(biāo)小量X1OO%2、第二法（等吸收度法、皂化法）適用于維生素A醇,第_法無法消除雜質(zhì)干擾時用此判斷方法(1 )若 =323s 327nm , BA3Oo /A325 W 0.73 , 則用公式校正后判斷。 若f值在3%以內(nèi)，仍以未校正的A325計算。 若f值超過了3% ,貝!用A325 (校正)計算

8、。(2 )若不在323s 327nm范圍內(nèi) bRA3oo /A325 0.73 ,則用色譜法測定。ss p可簡1迪靠(ST S ) 假綏氐卸咄Juiuoz91 EUQ0I9 XUIYist 1蚤WHKm (u)晉 4 山 1(sdnsooEUCM6c4).Eu!8 MS:dnvsCMoEuoee).Eul8 o.ECU/-ECML 日耀 簾，懺4 “*v 44 奄點乂欣屋占晅 udHCL&udH (川)第二節(jié)維生素E的分析、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)ch3co苯并一二氫毗喃環(huán)，帶有脂肪側(cè)鏈R1、R2和乙?；虞p基，又稱生育酚醋酸酯。1!血生育酚ch3卩生育酚ch3Y 生育酚H生育酚H名稱Rir2相對活性CH3

9、1.0H0.5ch30.2H01性質(zhì):1、苯環(huán)UV法2、酉旨鍵易水解,水解產(chǎn)物生育酚易被氧化。3、有手性碳原子有立體異構(gòu)體。天然產(chǎn)品一般是d型（右旋）合成品是消旋體（dl型）Vit E (dl-a-Tocopheryl Acetate)二鑒別試驗(-)硝酸反應(yīng)HNO3Ve 75C15生育紅橙紅色ch3 h3c0HOCH3g h a hno3P16H33ch30C16H330ch3生育酚生育紅(橙紅色)Fe3+（二）三氯化鐵-聯(lián)毗D定反應(yīng)VE生育酚衛(wèi)二對生育醞Fe2+ 2,21聯(lián)卩比腱 血紅色CH3H3C00H0X0ch3對生育醞（三）UV法001%無水乙醇中加ox = 284nmXmin =

10、254nm=41.0 45.5（四）TLC法圖1維生素E的紫外吸收圖譜薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷乙醛（4 :1）顯色劑硫酸（105 CI159VitE Rf = 0-7CHsH+ 2Ce3+33滴定劑:硫酸缽滴定液I1Ce(SO4)2 ( O.OlmoVL )三、雜質(zhì)檢查VitE醋酸酯中生育酚的檢查：鋪量法(-)康綏利用生育酚的易氧化性CHs 2Ce4+ CH?C16H33無水乙醇&終點指示:二苯胺(亮黃一灰紫) 二氫毗睫類藥物:鄰二氮菲亞鐵 吩塞嗪類藥物:自身指示法取本品010名,加無水乙醇5ml溶解后,加二苯胺試液1滴,用硫酸缽液(O.OlmoVL )滴定,消耗硫酸肺液(O.Olmol/L

11、)不得過1.0mlo規(guī)定限量(Ci2Hi7ClN4OS)2-SiO2*(OH)2*12WO3*4H2O 白色(+ HC1+ 4H2O2VitBi硅鴿酸I2 X 337.27(VitBi)2硅鉤酸 I3479.22換算因數(shù)二2MvitBiM沉淀2 X 337.27=0-19393479.22VitBi% =W沉淀 X 0.1939X100%2、測定方法I1取本品約50mg ,精密稱定,加水50ml溶解后, 加鹽酸2ml ,煮沸,立即滴加硅鋸酸試液4ml ,繼 續(xù)煮沸2分鐘,用80C恒重的垂熔玻璃則濾過, 沉淀先用煮沸的鹽酸溶液（1-20 ） 20ml分次洗滌. 再用水10ml洗滌1次.最后用丙酮

12、洗滌2次.每次 5ml ,在80C干燥至恒重,精密稱定,所得重量與0.1939相乘,即得實驗條件:(1) 硅磚酸用量：過量 VBi :硅磚酸=1:8(2)沉淀反應(yīng)在HC1中進(jìn)行,增大沉淀顆粒(3) 煮沸：2-3分鐘。太長，沉淀易附著于器壁 而損失。(4) 洗滌：熱的稀HC1、水、丙酮洗。(5) 干燥：80 C保持4個禺0（四）硫色素?zé)晒夥ㄔ?.方法對照液+ NaOH +鐵鼠化鉀+異丁醇1!+ NaOH + 異丁醇d （空白）供試液+ NaOH +鐵鼠化鉀+異丁醇+ NaOH + 異丁醇X1b （空白）A-bS-dAb= (2!樣=C對 XS-d幣農(nóng)賓2(H)n(0 .s Hd smt&)轉(zhuǎn)映

13、耳智常釵懿 TUIS000(v)-思矗詣蟻鬲卓&密I工舞薦備喊信frfr廉命憑一工舞掘減骨fr_ as(六)流窈注射化學(xué)發(fā)光法1.羅丹明B-CTMAB化學(xué)發(fā)光法被鐵氟化鉀氧化,產(chǎn)生微弱化學(xué)發(fā)光，羅丹明B 可快速吸收反應(yīng)釋放的能量而除遷至A 樣品 + CTMABB羅丹明B澈發(fā)態(tài)，以光輻射的形式返化欽(CTMAB)可敏化其發(fā)C鐵JU化鉀+ NaOHF流通池光強度，使光強度大大増強。V進(jìn)樣閥PMT光電倍增管可用于測定維生素B1片和注射液2、町化學(xué)發(fā)光法間接測定VB1和KIO4在酸性介質(zhì)中的反應(yīng)為常規(guī)的氧化還原反應(yīng)， 不產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。反應(yīng)剩余的KIO4注入到Luminol流路 中，KIO4與Lumin

14、ol在混合管中發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，但因 反應(yīng)靈 敏，在耒到達(dá)檢測器之前反應(yīng)已經(jīng)憲成，故此發(fā)光強度未被檢測， 然后刑余的Luminol繼續(xù)與Na2 SO3發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)而在發(fā)光流通池中被檢測，其發(fā)光強度與維生素B1的濃度在一定的范內(nèi)3L Ut好的線性關(guān)系。（七）分光光度法1、差示分光光度法2生素B1在pH 2的鹽酸溶液中以分子狀態(tài)存在，穩(wěn)定性 更好，但pH大于5時，將會分解。在pH 7時維生素Bl兜全分解。 利用光譜差異測定。測定波長：249nm2、動力學(xué)光度法在氫氧化鈉介質(zhì)中，維生素B1能靈敏催化高碘酸鉀氧化苯生素B1濃度成正比內(nèi)，苯并紅紫4B褪色程度與維利用維生素B1與酸性染料滇麝香草酚藍(lán)成

15、鹽，在420 nm波長 處測定吸收度Fe ( 11)-2聯(lián)毗嚏分光光度法電位滴定法y.：、用 銀電極為指示電極，甘汞電極為參比電極，AgNO3標(biāo)準(zhǔn)、;、第五節(jié)維生素C的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)L -抗壞血酸性質(zhì):多徑基化合物:具糖的性質(zhì)2. 2, 3-烯二醇結(jié)構(gòu)：強還原性氧化還原滴定法(O)IIo3、C3-OH :酸性，一元酸，可與Na2CO3成鹽4、手性C原子(C4 C5):具旋光性，L(+)抗壞血酸活性最強5、水解反應(yīng):與堿反應(yīng)二、鑒別試驗(-)與氧化劑的反應(yīng)AgNOaAgl (黑色)2,6二氯靛酚鈉_二色消失VitCXKMn4 紫紅色褪去Felling CuzO I （紅色）（二）糖類的反應(yīng)

16、USP三氮醋酸昨昱L糠醛鯉50 CI1VitC 或鹽酸藍(lán)色（三）UV BP0.01mol/L HC1入 max = 243 nm%Eicir = 545-585三、含量測定(-)碘量法ChP指示劑淀粉指示液2.討論(1)溶解：加新沸的冷HqO ,減少水中溶解氧對 測定的影響I1(2 )酸性環(huán)境：HAC ,減慢VitC被O2氧化速度(3 )立即滴定:減少。2的干擾(4 )附加劑干擾的排除片劑滑石粉71注射劑抗氧劑過濾Na2SO3 ,NaHSO3 Na2S2O3 ,Na2S2O5()2, 6-二氯靛酚鈉滴定法USP、JP原理CIN瑰色)HINOH以岀現(xiàn)玫瑰色為終點VitC+ hoTcr去氫Vite

17、 +自身指示終點法缺點：滴定液不穩(wěn)定,需經(jīng)常標(biāo)定干擾多氧化力較強71（三）HPLC法卩HPLC法測定制劑.生物樣品、果汁中維生素C方法離子交換色譜法離子對色譜法分配色譜法（正.反相）檢測器：紫外.安培檢測器例如：RP-HPLC測定多維軟咀嚼片中維生素C含量色譜柱:Hypersil C18柱;流動相:0005mol-L - 1磷酸二氫鉀溶液（用璘酸調(diào)pH 至36）; 檢測波長:246nmo(四)分光光度法1. 2，4二硝基苯臍比色法例如：不同產(chǎn)地枸杞子中維生素c含量測定2、膠束增溶分光光度法氮哩藍(lán)(NBT)為藍(lán)色化合物，藍(lán)色化合物被澳代十六 烷基11 比嚏(CPB)在水溶液 中形成的膠束增溶，使

18、顯色反 應(yīng)靈敏度顯著提高。a.力卩CRB:, b.未力卩衣茶腸（空）*費0逑葦翦41 梓宴弟濮6丸壬事曲傘仞拿甲y誓呂專栄協(xié)*6軸與夠宣卑重蛀幽缶褲曄呂（II ） 3止6（）嗣事葦4埔血幕軸97 = Hd辛畢欣羽密=-0141 （IH）%$（T0呂血町出堆由眩樂*水&龍準(zhǔn)=勰為樂水*蕩丫（六）電極法快速循環(huán)伏安法采用L賴氨酸修飾玻碳電極，以磷酸鹽緩沖溶液 為支持電解質(zhì)第五節(jié)維生素D的分析/溶解性/不穩(wěn)定性/旋光性/顯色反應(yīng) /紫外吸收維生素D3二、鑒別三、雜質(zhì)檢查1.麥角醇的檢查1!90%乙醇溶解后,加洋地黃皂苜溶液,放置18h ,不得發(fā)生渾濁。2.前維生素D的光照產(chǎn)物A = 280nm-320nm（一）NP-HPLCCh.P 2005定相：硅膠流動相:正己烷正戊醇(997 : 3 )檢測波長:254nm用于無維生素A轉(zhuǎn)及其他干擾的供試(1)皂化提?。?2)凈化用色譜杜糸統(tǒng)分禽 收集維生素D,得供試嫁液B;(3)按第一法進(jìn)行測 走O當(dāng)樣經(jīng)皂化提取及凈化用色譜糸統(tǒng)分 富收集后，前維生素D劭仍受干擾對，采用此出。（二）RP-HPLC例如：鈣加維生素D 膠丸中維生素D3的含量測定由 于膠丸 中 含有植物油，通 常 釆用 的 前處理方法為 皂化后提取測定，操作不但繁瑣，而且在皂化及提取中有部分損 失，因而影響結(jié)果。本法則采用正己烷2乙醇（6 ：3）混合溶劑