自身抗體風濕病中的應用

1、自身抗體風濕病中的應用狼瘡細胞（狼瘡細胞（19481948，Hargrave)Hargrave)一、概述v自身抗體的定義：自身抗體的定義： 以自身組織成分為靶抗原而出現(xiàn)的相應以自身組織成分為靶抗原而出現(xiàn)的相應抗體抗體風濕免疫病自身抗體v抗核抗體譜v抗磷脂抗體v類風濕關節(jié)炎抗體v肌炎抗體v血管炎抗體v自身免疫性肝病抗體自身抗體在自身免疫病中的意義自身抗體在自身免疫病中的意義 1、是自身免疫病的標記、是自身免疫病的標記 2、有助于彌漫性結締組織?。?、有助于彌漫性結締組織?。–TD）的診的診 斷和鑒別診斷斷和鑒別診斷 3、判斷疾病的活動性判斷疾病的活動性 4、預測疾病的預后預測疾病的預后二、自身抗體

2、的檢測方法 1、間接免疫熒光法（IFT） 2 2、ELISAELISA 3 3、免疫印跡法、免疫印跡法 4 4、放射免疫法、放射免疫法 5 5、免疫雙擴散、免疫雙擴散抗核抗體（核仁型抗核抗體（核仁型, Mi-2, Mi-2、PM-SCLPM-SCL、RNA Polymerase IRNA Polymerase I）抗核抗體（核膜型抗核抗體（核膜型, dsDNA, dsDNA）抗核抗體（均質型抗核抗體（均質型, Histone-DNA, Histone-DNA）三、常見的自身免疫性疾病的抗體ANAANA譜及其臨床意義譜及其臨床意義v定義：是一種對細胞內脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA),

3、蛋白或這些物質的分子復合物的自身抗體，因此ANA應稱為抗核抗體譜。間接免疫熒光法（IFT）: HEp-2細胞 靈長類肝 臟冰凍組織切片1、完整的抗原譜 (細胞核、細胞漿)2、ANA檢測的金標準，具有最高的敏感性和特 異性 3、質量控制容易 4、除ANA外，還可獲得一些對臨床醫(yī)生有用的 其他信息 (如ANCA)ANA 的檢測方法ANA 的檢測方法 ELISA:用高度純化的抗原來篩查ANAs 1、抗原譜比IIF窄 2、對所用的靶抗原具有很高的敏感性和特異性 3、操作簡便、快速ANA分類抗DNA抗體 抗DNA抗體： ssDNA / dsDNA 抗原：單鏈DNA，變性的DNA (嘌呤嘌呤和嘧啶堿基嘧啶

4、堿基) 雙鏈DNA，天然DNA (脫氧核糖核酸骨架) 相關疾病： ssDNA dsDNA SLE 80.8% 30% Sjgrens綜合征 40.0% 硬皮病 44.0% 類風濕性關節(jié)炎 12.3% 健康獻血員 6.8% ANA分類抗非組蛋白抗體 抗ENA抗體：此組抗體不含組蛋白，可以溶 于鹽水而被提取 檢測方法：免疫印跡法抗ENA抗體 抗Sm抗體 抗原: 與U1-、U2-、U4-、U5-或U6-nRNA相關的6種不同的蛋白分子(核心蛋白B、B、D、E、F、G) 相關疾病: SLE:5% - 30%抗ENA抗體 抗核糖體蛋白抗體 靶抗原:由3個蛋白質分子組成的核糖體60S亞單位： P0、P1、

5、P2 (38、16、15 kD) 在碳末端具有 相同的免疫反應性表位 相關疾病: SLE:5% - 15%抗ENA抗體抗SS-A抗體 靶抗原:與Y1、Y3、Y4或Y5型RNA相關 的 2種蛋白分子(52 kDa和60 kDa) 相關疾病: 干燥綜合征: 40% - 95% SLE: 34.7%抗ENA抗體抗SS-B抗體 靶抗原:與小分子RNA(U6-RNA、tRNA 前體)結合的磷蛋白磷蛋白(48 kDa) 相關疾病:干燥綜合征：40% - 95% SLE: 10% - 20% 抗ENA抗體抗U1-nRNP抗體 靶抗原:三種與U1-nRNA相關的蛋白(70KD、A和C蛋白) 相關疾病: MCT

6、D: 95% - 100% SLE: 15% - 40%抗ENA抗體抗Scl-70抗體 靶抗原: DNA 拓撲異構酶I(100 kDa) 相關疾病:硬皮病: 79.7% (25% - 75%)抗ENA抗體 抗J0-1抗體 靶抗原:組氨酰-tRNA合成酶(50 kDa)，細胞漿磷蛋白 相關疾病: 多肌炎/皮肌炎: 25% - 35% 伴有肺間質纖維化的多肌炎: 70%ANA分類抗非組蛋白抗體2、抗著絲點抗體 靶抗原: 著絲點中的4種蛋白分子：A- (17 kDa)、 B- (80 kDa)、C- (140 B- (80 kDa)、C- (140 kDa)、 D-蛋白 (50 kDa) 主要的靶抗

7、原是著絲點蛋白B 相關疾病: 硬皮病: 18% 局限型 (CREST綜合征): 80% - 95% ANA分類抗組蛋白抗體 抗原: 組蛋白H1, H2A, H2B, H3, H4 (主要的靶抗原為H1和H2B) 相關疾病: 藥物誘導性 LE: 100% （標志性抗體） SLE: 40% - 80% 在其他風濕病中很少見ANA分類抗核仁抗體 靶抗原:核仁內的RNA多聚酶、原纖維 和To/Th抗原 相關疾?。?SSc 4%SLE患者特異性自身抗體 靶抗原 陽性率 (%) ssDNA 70-95dsDNA 30-90組蛋白 40-80U1-nRNP 15-40Sm 5-30SS-A 20-60SS-

8、B 10-20核糖體P蛋白 5-15增殖性細胞核抗原I (PCNA) 3心磷脂，2-糖蛋白1 20-40Ku 5-10抗核小體抗體 90多肌炎和皮肌炎抗體譜 靶抗原 陽性率(%)ssDNA40-50Jo-125-35PM-Scl (重疊綜合征) 8Mi-2 5Ku (與硬皮病的重疊綜合征) 1-7PL-7、PL-12、OJ、EJ、KJ 2-3原發(fā)性干燥綜合征抗體譜 靶抗原 陽性率(%)SS-A 40-95SS-B 40-95ssDNA 40-95進行性系統(tǒng)性硬化癥抗體譜 靶抗原 陽性率 (%)著絲點 80-95Scl-70 25-75ssDNA 30-60原纖維蛋白 5-10RNA 多聚酶 4

9、PM-Scl (重疊綜合征) 3NOR-90 (核仁形成區(qū)) 少見Ku (與多肌炎的重疊綜合征) 1-7可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的感染、藥物的感染、藥物v瘧疾v血吸蟲v結核v麻風v沙門氏菌v克雷伯菌vEB病毒vHIVv肯定的藥物肼苯噠嗪普魯卡因酰胺異煙肼v可能的藥物(近80種）米諾環(huán)素SASPEtanercept, Infliximabv可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的肝病的肝病慢性活動性肝炎原發(fā)性膽汁性肝硬化自身免疫肝炎自身免疫膽管炎v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的肺病的肺病特發(fā)性肺纖維化石棉導致的纖維化原發(fā)性肺動脈高壓v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的腫瘤的腫瘤白血病黑色素瘤實體瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、

10、腎癌）淋巴瘤v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的血液病的血液病特發(fā)性血小板減少性紫癜自身免疫性溶血性貧血v可出現(xiàn)可出現(xiàn)ANAANA的內分泌的內分泌病病1型糖尿病Grave病Hashimoto甲狀腺炎RARA自身抗體譜及臨床意義自身抗體譜及臨床意義 RF 60RA中出現(xiàn)，量與中出現(xiàn)，量與RA活動性及活動性及 嚴重性呈正相關。亦在其它嚴重性呈正相關。亦在其它CTD出現(xiàn)出現(xiàn) 抗抗CCP 在在50RA中出現(xiàn)中出現(xiàn)（聚角蛋白微絲聚角蛋白微絲 蛋白）蛋白）特異性較高特異性較高AKA（抗角蛋白抗體）抗角蛋白抗體） 在在40RA陽性陽性APF（抗核周因子）抗核周因子）在在52RA陽性陽性抗抗RA33RA陽性率為陽性率

11、為35抗抗Sa在部分在部分RA陽性陽性類風濕因子（類風濕因子（RF)RF)v抗原：變性的IgG Fc段v意義RA陽性率70%，陽性預測值24%。滴度與疾病活動平行其他風濕病可陽性感染、非感染疾病、正常人可陽性非風濕病中的RF抗核周因子抗核周因子-(-(APF)靶抗原位于人頰粘膜細胞的核周顆粒中靶抗原位于人頰粘膜細胞的核周顆粒中間接免疫熒光法檢測間接免疫熒光法檢測對對RARA診斷的特異性高達診斷的特異性高達90%90%以上以上APFAPF陽性與病情相關，往往提示預后欠佳（尤陽性與病情相關，往往提示預后欠佳（尤其對其對RFRF陰性的患者）陰性的患者）抗角蛋白抗體抗角蛋白抗體- -（AKAAKA）v

12、取取6 6周齡雄性周齡雄性WistarWistar大鼠的中大鼠的中1/31/3食道切片為食道切片為底物底物v間接免疫熒光法間接免疫熒光法v以典型的角質層板層狀、線狀沉積的熒光為以典型的角質層板層狀、線狀沉積的熒光為陽性陽性v對對RARA診斷的敏感性診斷的敏感性44.13%44.13%、特異性、特異性89%89%v與與RARA的病情嚴重程度相關的病情嚴重程度相關, ,提示預后不良提示預后不良抗抗 Sa Sa 抗抗 體體 v新鮮胎盤提取新鮮胎盤提取v免疫印跡法免疫印跡法v分子量為分子量為5050和和/ /或或55KD55KD部位出現(xiàn)條帶者為部位出現(xiàn)條帶者為陽性陽性v敏感性敏感性 36.7%36.7

13、%、 特異性特異性 91.6%91.6%vHLA-DR4HLA-DR4相關是慢性、嚴重相關是慢性、嚴重RARA的早期標記的早期標記vRARA的滑液中也有高濃度的抗的滑液中也有高濃度的抗SaSa抗檢出，抗檢出，提示在滑膜可能發(fā)生原位免疫反應提示在滑膜可能發(fā)生原位免疫反應抗抗RA33/36RA33/36抗體抗體 v從從HelaHela細胞或細胞或EhrilichEhrilich瘤細胞核中提取瘤細胞核中提取v免疫印跡法免疫印跡法v分子量分子量3333或或36KD36KD區(qū)帶出現(xiàn)陽性者為陽性區(qū)帶出現(xiàn)陽性者為陽性v敏感性敏感性 35.8%35.8%、特異性、特異性 99.6%99.6%抗環(huán)瓜氨酸多肽抗環(huán)

14、瓜氨酸多肽(CCP)(CCP)抗體抗體 v19981998年年 證實抗證實抗filaggrinfilaggrin相關抗體識別相關抗體識別的主要抗原決定簇成分是瓜氨酸的主要抗原決定簇成分是瓜氨酸v20002000年年 合成環(huán)瓜氨酸肽（合成環(huán)瓜氨酸肽（CCPCCP），并將），并將抗抗CCPCCP抗體用于抗體用于RARA檢測檢測vELISAELISA法檢測法檢測v對對RARA診斷高度敏感和特異診斷高度敏感和特異v陽性者骨破壞較陰性者嚴重陽性者骨破壞較陰性者嚴重v對對RARA的早期診斷和預后評估都很有意義的早期診斷和預后評估都很有意義抗肽?；彼崦搧啺泵鸽孽；彼崦搧啺泵? (PADI4)抗體vR

15、A抗PADI4抗體陽性率為47%,v抗PADI4抗體對RA診斷的敏 感性為43%,特異性為92%。vRF陰性患者PADI4抗體陽性 50%;AKA陰性的患者PADI4抗體陽性43%;抗CCP抗體陰性的患者抗PADI4抗體陽性60%。抗突變型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗體v136例RA患者抗MCV抗體敏感性和特異性分別為95.6%和80.8%。v抗MCV抗體與抗CCP抗體、AKA和RF的重疊陽性率分別為91.9%、52.8%和76.5%。血管炎相關抗體血管炎相關抗體vcANCA 靶抗原：靶抗原：PR-3 (蛋白酶蛋白酶3vpANCA 靶抗原：靶抗原：MPO(髓過氧化酶髓過氧化酶) 彈性蛋白酶彈性

16、蛋白酶 乳鐵蛋白乳鐵蛋白 vWegener肉芽腫肉芽腫 其量指示病情活動其量指示病情活動v其它血管炎及炎性其它血管炎及炎性 腸病腸病抗絲氨酸蛋白酶（PR3)抗體針對蛋白酶3的cANCA的意義疾病頻率（%）Wegeners 肉芽腫90顯微鏡下多動脈炎50結節(jié)性多動脈炎5-10變應性肉芽腫性血管炎10過敏性血管炎Rare光敏性紫癜RareIgA腎病Rare感染后腎小球腎炎Rare系統(tǒng)性紅斑狼瘡Rare川崎病+對照抗髓過氧化物酶（MPO）抗體v抗原：髓過氧化物酶（MPO）v意義可出現(xiàn)于多種血管炎性疾病。也可見于SLE、藥物等針對MPO的pANCA的意義疾病疾病頻率（頻率（% %）顯微鏡下多動脈炎50

17、-70特發(fā)性壞死性腎小球腎炎50-85變應性肉芽腫性血管炎70-85Goodpasture綜合征10-30Wegener肉芽腫5-10結節(jié)性多動脈炎+多血管炎重疊+系統(tǒng)性紅斑狼瘡+肼苯噠嗪誘導的腎炎+川崎病+cANCA(胞漿型, 絲氨酸蛋白酶)pANCA(核周型）1、髓過氧化物酶2、彈力酶3、組織蛋白酶G4、乳鐵蛋白5、溶酶體6、細菌增透蛋白7、Azurocidin8、原發(fā)性膽汁性肝硬化抗體譜 靶抗原靶抗原 陽性率陽性率(%) AMA M2 85-95 AMA M4 40-60 AMA M9 35 Sp-100 (核點) 30 肌動蛋白 10-20AMA M2 靶抗原靶抗原: :由由3 3種不

18、同的乙?；D移酶種不同的乙?；D移酶 組成的多酶復合物：組成的多酶復合物： - -丙酮酸脫氫酶丙酮酸脫氫酶(74 (74 kDa)kDa) -2- -2-酮酸脫氫酶酮酸脫氫酶 (50 (50 kDa)kDa) -2- -2-酮戊二酸脫氫酶酮戊二酸脫氫酶(50(50kDa)kDa) 與丙酮酸脫氫酶復合物相關與丙酮酸脫氫酶復合物相關 的蛋白的蛋白X(52 kDa)X(52 kDa) 相關疾病相關疾病: : PBC:PBC: 85% - 95% 85% - 95% 自身免疫性肝炎抗體譜 靶抗原 陽性率(%)肝特異性蛋白(LSP) 50-100肝細胞膜抗原 (LMA) 35-100唾液酸糖蛋白受體 80-90肌動蛋白 40-90ANA 30-40核膜 ?SLA/LP 15-30肝腎微粒體 (LKM-1) 7LC-1 ?抗磷脂抗體(APA)APA定義：