一次性使用衛(wèi)生用品鑒定試驗

1、一次性使用衛(wèi)生用品鑒定試驗次性使用衛(wèi)生用品鑒定試驗一次性使用衛(wèi)生用品是指使用一次后即丟棄的，與人體直接或間接接觸的，并為達到人體生理衛(wèi)生或衛(wèi)生保?。咕蛞志┠康亩褂玫母鞣N日常生活用品，產(chǎn)品性狀可以是固體也可以是液體。例如，一次性使用手套或指套（不包括醫(yī)用手套或指套）、紙巾、濕巾、衛(wèi)生濕巾、衛(wèi)生棉（棒、簽、球）、化妝棉（紙、巾）、紙質(zhì)餐飲具、電話膜、帽子、口罩、內(nèi)褲、婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品（包括衛(wèi)生護墊）、尿布等排泄物衛(wèi)生用品（不包括皺紋衛(wèi)生紙等廁所用紙）、避孕套等，以及衛(wèi)生部所發(fā)布的其他一次性使用衛(wèi)生用品。2.1.11.1樣品采集于同一批號的三個運輸包裝中至少抽取12個最小銷售包裝樣品，1/4

2、樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣，另2/4樣品（可就地封存）必要時用于復(fù)檢。抽樣的最小銷售包裝不應(yīng)有破裂，檢驗前不得啟開。2.1.11.2 樣品微生物污染鑒定2.1.11.2.1細菌菌落總數(shù)與初始污染菌檢測法（1）樣品的處理在100級凈化條件下用無菌方法打開用于檢測的至少3個包裝，從每個包裝中取樣，準確稱取10g1g樣品。剪碎后加入到200ml滅菌生理鹽水（如產(chǎn)品中含有抑菌或殺菌成份，須加入相應(yīng)的中和劑）中，充分混勻，得到一個生理鹽水樣液。液體產(chǎn)品用原液直接作樣液（如產(chǎn)品中含有抑菌或殺菌成份，須在樣液中加入相應(yīng)的中和劑）。如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導(dǎo)致不能吸出足夠樣液時，稀釋液量可按每次

3、50ml遞增，直至能吸出足夠測試用樣液。（2）活菌培養(yǎng)計數(shù)待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液接種5個平皿，參照2.1.1.3進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。(3) 結(jié)果報告當總菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實有數(shù)報告，大于100時采用二位有效數(shù)字。如果樣品菌落總數(shù)超過標準值，按下述方法進行復(fù)檢和結(jié)果報告。(4) 復(fù)檢方法取留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測2次，2次結(jié)果平均值都達到標準規(guī)定者，則判定被檢樣品合格；如其中仍有1次結(jié)果平均值超過標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。2.1.11.2.2大腸菌群檢測方法(1) 操作步驟取樣液5ml接種50ml乳糖膽鹽發(fā)酵管，置352培養(yǎng)24h，若不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報告為大腸菌群陰性。如

4、產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅亞甲藍瓊脂平板，置352培養(yǎng)18h24h，觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。取疑似菌落12個作革蘭染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管，置352培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)氣情況。(2) 結(jié)果報告乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅亞甲藍平板上有典型大腸菌落，革蘭染色為陰性無芽孢桿菌，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。2.1.11.2.3銅綠假單胞菌檢測方法(1) 操作步驟取樣液5 ml，加入到50 mlSCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置352培養(yǎng)18h24

5、h。如有銅綠假單胞菌生長，培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板，置352培養(yǎng)18h24h，觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其他菌不長。取可疑菌落涂片作革蘭染色，鏡檢為革蘭陰性菌者應(yīng)進行下列試驗：氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻棒挑取可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，30s內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗陽性，不變色者為陰性。綠膿菌素試驗：取2個3個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養(yǎng)基

6、斜面，352培養(yǎng)24h，加入三氯甲烷3ml5ml，充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯甲烷呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1ml，振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗：挑取被檢菌純培養(yǎng)物接種在硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中，置352培養(yǎng)24h，培養(yǎng)基小倒管中有氣者即為陽性。明膠液化試驗：取可疑菌落純培養(yǎng)物，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置352培養(yǎng)24h，取出放于410，如仍呈液態(tài)為陽性，凝固者為陰性。42生長試驗：取可疑培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置42培養(yǎng)24h48h，有銅綠假單胞菌生長為陽性。(2) 結(jié)果報告被檢

7、樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，證實為革蘭陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。2.1.11.2.4金黃色葡萄球菌檢測方法(1) 操作步驟取樣液5ml，加入到50ml SCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置352培養(yǎng)24h。自上述增菌液中取1或2接種環(huán)，劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，置352培養(yǎng)24h48h。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革蘭染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭陽性球菌，排列成葡萄狀，無

8、芽孢與莢膜。鏡檢符合上列情況應(yīng)進行下列試驗：甘露醇發(fā)酵試驗：取上述菌落接種甘露醇培養(yǎng)液，置352培養(yǎng)24h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。血漿凝固酶試驗：玻片法：取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5min如血漿內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性，如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進行試管凝固酶試驗。試管法：吸取1：4新鮮血漿0.5ml，放滅菌小試管中，加入等量待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5ml?；靹颍?52溫箱或水浴中，每半小時觀察一次，24h 之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和

9、陰性菌株肉湯培養(yǎng)物各0.5 ml作為陽性與陰性對照。(2) 結(jié)果報告凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。2.1.11.2.5溶血性鏈球菌檢測方法(1) 操作步驟取樣液5ml加入到50ml葡萄糖肉湯，352培養(yǎng)24h。將培養(yǎng)物劃線接種血瓊脂平板，352培養(yǎng)24h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰白色，半透明或不透明，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無色透明溶血圈。挑取典型菌落作涂片革蘭染色鏡檢，應(yīng)為革蘭陽性，呈鏈狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況，應(yīng)進行下列試驗：鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿0.2

10、 ml（0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液），加入0.8ml滅菌生理鹽水，混勻后再加入待檢菌24 h肉湯培養(yǎng)物0.5 ml和0.25 % 氯化鈣0.25 ml，混勻，放352水浴中，2min觀察一次（一般10 min內(nèi)可凝固），待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時間。如2 h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置24h觀察，如凝塊全部溶化為陽性，24 h仍不溶化為陰性。桿菌肽敏感試驗：將被檢菌菌液涂于血平板上，用滅菌鑷子取每片含0.04單位桿菌肽的紙片放在平板表面上，同時以已知陽性菌株作對照，在352下放置18h24h，有抑菌帶者為陽性。(2) 結(jié)果報告鏡檢革蘭陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶

11、血圈，鏈激酶和桿菌肽試驗陽性，可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。2.1.11.2.6真菌菌落總數(shù)檢測方法(1) 操作步驟待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作真菌計數(shù)。共接種5個平皿 ，每個平皿中加入1ml樣液，然后用冷卻至45左右的熔化的沙氏瓊脂培養(yǎng)基15ml25ml倒入每個平皿內(nèi)混合均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置252培養(yǎng)7d，分別于3d、5d、7d觀察，計算平板上的菌落數(shù)，如果發(fā)現(xiàn)菌落蔓延，以前一次的菌落計數(shù)為準。(2) 結(jié)果報告菌落呈片狀生長的平板不宜采用；計數(shù)符合要求的平板上的菌落，按下式計算結(jié)果：式中：XF為樣品真菌菌落總數(shù)，cfu/g 或cfu/ml；Nt為5塊沙氏瓊脂培養(yǎng)基平板上的真

12、菌菌落總數(shù)；K為稀釋度。當菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實有數(shù)報告，大于100時采用二位有效數(shù)字。如果樣品菌落總數(shù)超過本標準的規(guī)定，按下述方法進行復(fù)檢和結(jié)果報告。(3)復(fù)檢方法將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測2次，2次結(jié)果平均值都達到標準的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何1次結(jié)果平均值超過標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。2.1.11.2.7真菌定性檢測方法(1) 操作步驟取樣液5ml加入到50ml沙氏培養(yǎng)基中，252培養(yǎng)7d，逐日觀察有無真菌生長。(2) 結(jié)果報告培養(yǎng)管混濁應(yīng)轉(zhuǎn)種沙氏瓊脂培養(yǎng)基，證實有真菌生長，可報告被檢樣品檢出真菌。2.1.11.3 產(chǎn)品殺菌性能、抑菌性能及其穩(wěn)定性鑒定殺菌性能與抑菌性

13、能試驗取樣部位，根據(jù)被試產(chǎn)品生產(chǎn)者的說明而確定。2.1.11.3.1殺菌性能測試方法（1）試驗菌與菌液制備1）試驗菌：細菌：金黃色葡萄球菌（ATCC 6538），大腸桿菌（8099或ATCC 25922）；酵母菌：白色念珠菌(ATCC10231)。2）染菌樣片制備：取菌株第3代14代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物(18h24h)，用5 mL 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（以下簡稱PBS）洗下菌苔，后用上述PBS稀釋至所需濃度，取100l滴于樣片（2.0cm3.0cm）上，使回收菌數(shù)達1104cfu/片）9104cfu/片。3）菌液制備：取菌株第3代14代的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物(18h

14、24h)，用5 ml 0.03mol/L磷酸鹽緩沖液（以下簡稱PBS）洗下菌苔，使菌懸浮均勻后用上述PBS稀釋至所需濃度.(2)中和劑鑒定試驗：參照2.1.1.5中和劑載體定量鑒定試驗方法進行。(3) 殺菌試驗參照2.1.1.7.5載體浸泡定量殺菌試驗方法進行。1) 操作步驟將試驗菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液（要求的濃度為：用100l滴于對照樣片上，回收菌數(shù)為1104cfu/片）9104cfu/片）。取被試樣片（2.0cm3.0cm）和對照樣片（與試樣同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理）各4片，分成4組置于4個滅菌平皿內(nèi)。取上述菌懸液，分別在每個被試樣片和對照樣片上

15、滴加100l，均勻涂布，開始計時，作用2min、5min、10min、20min，用無菌鑷分別將樣片投入含5ml相應(yīng)中和劑的試管內(nèi)，充分混勻，作適當稀釋，然后取其中2個3個稀釋度，分別吸取0.5ml，置于兩個平皿，用涼至4045的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌）15ml作傾注，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，352培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），作活菌菌落計數(shù)。試驗重復(fù)3次，按下式計算殺菌率：式中：X為殺菌率，% ；NC為對照樣品平均菌落數(shù)，cfu/片；NS為被試樣品平均菌落數(shù)，cfu/片。（4）評價標準殺菌率90%，產(chǎn)品有殺菌作用。2.1.11.3.2溶出性

16、抗（抑）菌產(chǎn)品抑菌性能測試方法(1)操作步驟將試驗菌24h斜面培養(yǎng)物用PBS洗下，制成菌懸液（要求的濃度為：用100l滴于對照樣片上或5ml樣液內(nèi)，回收菌數(shù)為1104cfu/片或ml9104cfu/片或ml）。取被試樣片（2.0cm3.0cm）或樣液（5ml）和對照樣片或樣液（與樣片同質(zhì)材料，同等大小，但不含抗菌材料，且經(jīng)滅菌處理）各4片（置于滅菌平皿內(nèi)）或4管。取上述菌懸液，分別在每個被試樣片或樣液和對照樣片或樣液上或內(nèi)滴加100l，均勻涂布/混合，開始計時，作用2min、5min、10min、20min，用無菌鑷分別將樣片或樣液（0.5ml）投入含5mlPBS的試管內(nèi)，充分混勻，作適當稀釋

17、，然后取其中2個3個稀釋度，分別吸取0.5ml，置于2個平皿，用涼至4045的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（細菌）或沙氏瓊脂培養(yǎng)基（酵母菌）15ml作傾注，轉(zhuǎn)動平皿，使其充分均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板，352培養(yǎng)48h（細菌）或72h（酵母菌），作活菌菌落計數(shù)。試驗重復(fù)3次，按下式計算抑菌率:式中：X為抑菌率，% ；NC為對照樣品平均菌落數(shù)，cfu/片；NS為被試樣品平均菌落數(shù)，cfu/片。（2）評價標準抑菌率50%90%，產(chǎn)品有抑菌作用，抑菌率90%，產(chǎn)品有較強抑菌作用。2.1.11.3.3非溶出性抗（抑）菌產(chǎn)品抑菌性能測試方法參照2.1.7.6振蕩燒瓶試驗方法進行2.1.11.3.4穩(wěn)定性測試方法(1)測

18、試條件1)自然留樣：將原包裝樣品置室溫下按使用說明書規(guī)定的時間抽樣進行抑菌或殺菌性能測試。2)加速試驗：將原包裝樣品置5456恒溫箱內(nèi)14d或3740恒溫箱內(nèi)3個月，保持相對濕度 75%，抽樣進行抑菌或殺菌性能測試。(2)評價標準1)自然留樣，其殺菌率或抑菌率達到規(guī)定的標準值，產(chǎn)品的殺菌或抑菌作用有效期為自然留樣時間。2)54加速試驗，其殺菌率或抑菌率達到規(guī)定的標準值，產(chǎn)品的殺菌或抑菌作用有效期為室溫保存至少1年。3)37加速試驗，其殺菌率或抑菌率達到規(guī)定的標準值，產(chǎn)品的殺菌或抑菌作用有效期為室溫下至少保持2年。2.1.11.4產(chǎn)品環(huán)氧乙烷殘留量測試方法(可參見GB15979-2002)2.1

19、.11.5產(chǎn)品毒理學鑒定2.1.11.5.1鑒定指標當原材料、生產(chǎn)工藝等發(fā)生變化可能影響產(chǎn)品毒性時，應(yīng)按下表2-7根據(jù)不同產(chǎn)品種類提供有效的(經(jīng)政府認定的第三方) 成品毒理學測試報告。表 2-7產(chǎn)品毒理學試驗選項產(chǎn)品種類皮膚刺激試驗*粘膜刺激試驗皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗手套或指套、內(nèi)褲抗菌（或抑菌）液體產(chǎn)品根據(jù)用途選擇*濕巾、衛(wèi)生濕巾根據(jù)用途選擇*根據(jù)材料選擇口罩婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品尿布等排泄物衛(wèi)生用品避孕套*用于陰道粘膜的產(chǎn)品須做陰道粘膜刺激試驗，但無須做皮膚刺激試驗。2.1.11.5.2試驗方法皮膚刺激試驗、*粘膜刺激試驗和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗方法按2.3的方法測試。固體產(chǎn)品的樣品制備方法按照2.1.11

20、.5.3樣品制備進行。注：1）用于皮膚刺激試驗中的空白對照應(yīng)為：生理鹽水和斑貼紙。2）在皮膚變態(tài)反應(yīng)中，致敏處理和激發(fā)處理所用的劑量保持一致。2.1.11.5.3樣品制備(1)皮膚刺激試驗和皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗以橫斷方式剪一塊斑貼大小的產(chǎn)品。對于干的產(chǎn)品，如尿布、婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品，用生理鹽水潤濕后貼到皮膚上，再用斑貼紙覆蓋。濕的產(chǎn)品，如濕巾，則可以按要求裁剪合適的面積，直接貼到皮膚上，再用斑貼紙覆蓋。(2)*粘膜刺激試驗1)干的產(chǎn)品（如婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品）：以橫斷方式剪取足夠重量的產(chǎn)品，按1g/10ml的比例加入滅菌生理鹽水，密封于萃取容器中攪拌后置于371下24 h。冷卻到室溫，攪拌后析取樣液備檢

21、。2)濕的產(chǎn)品（如衛(wèi)生濕巾）：在進行陰道粘膜刺激試驗的當天，擠出濕巾里的添加液作為樣片。2.1.11.5.4判定標準按2.3中的相應(yīng)部分作為試驗結(jié)果判定原則。2.1.11.6消毒效果生物監(jiān)測評價方法2.1.11.6.1環(huán)氧乙烷滅菌或消毒參照2.1.5.6環(huán)氧乙烷滅菌器滅菌效果鑒定試驗進行。(1)環(huán)氧乙烷消毒效果評價用生物指示菌為枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372）。在菌量為5105cfu/個5106cfu/個、環(huán)氧乙烷濃度為600mg/L30mg/L、作用溫度為542、相對濕度為60%10%條件下，其殺滅90% 微生物所需時間D值應(yīng)為2.5min5.8min，存活時間7.5min，殺滅時間

22、58min。(2)每次測試至少布放10片生物指示劑，放于最難殺滅處。消毒完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測，將未處理陽性對照菌片作相同接種，兩者均置352培養(yǎng)。陽性對照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7d全部無菌生長，可報告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比殺滅對數(shù)值達到3.0也可報告消毒合格。2.1.11.6.2電離輻射滅菌或消毒(1)生物指示菌短小桿菌芽孢E 601（ATCC27142），在菌量為5105cfu/個5106cfu/個時，其D10值應(yīng)為1.7kGy。(2)檢測方法每次測試至少選5箱，每箱產(chǎn)品布放3片生物指示劑，將待檢箱置最小劑量處。消毒完畢，取出指示菌片接種營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液作定性檢測或接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基作定量檢測，將未處理陽性對照菌片作相同接種，兩者均置352培養(yǎng)。（3）結(jié)果判定陽性對照應(yīng)在24h內(nèi)有菌生長。定性培養(yǎng)樣品如連續(xù)觀察7d全部無菌生長，可報告生物指示劑培養(yǎng)陰性，消毒合格。定量培養(yǎng)樣品與陽性對照相比殺滅對數(shù)值達到3.0也可報告消毒合格。2.1.11.6.3壓力蒸汽滅菌或消毒參照GB15981-1995消毒與滅菌效果的評價方法與標準第一篇：壓力