藥物分析與生物藥物分析

1、藥物分析與生物藥物分析藥物分析與生物藥物分析 主講老師: 肖玉秀2004年2月9日-7月3日v兩門課合起來(lái)安排學(xué)時(shí)，分別考試。授課兩門課合起來(lái)安排學(xué)時(shí)，分別考試。授課17-18周，周，5學(xué)時(shí)學(xué)時(shí)/周周v講授內(nèi)容講授內(nèi)容: 遵循教學(xué)大綱，以課本內(nèi)容為主，盡量全面講解。v授課方式授課方式： 講授-自學(xué)相結(jié)合v成績(jī)?cè)u(píng)定成績(jī)?cè)u(píng)定： 平時(shí)20% (作業(yè)及paper)，期末80%v實(shí)驗(yàn)課安排實(shí)驗(yàn)課安排: 兩門課同時(shí)開兩門課同時(shí)開緒緒 論論一藥物分析的性質(zhì)一藥物分析的性質(zhì) 藥物分析是以藥品質(zhì)量控制為研究目的一門學(xué)科。主要運(yùn)用化學(xué)、物理學(xué)或生物學(xué)等學(xué)科的方法和技術(shù)研究各種藥物及其制劑（合成藥物、天然藥物、生物

2、藥物及其制劑，中藥制劑）的質(zhì)量控制方法。1綜合性綜合性 常規(guī)化學(xué)分析； 儀器分析； 計(jì)算藥物分析； x-射線衍射，熱分析； dna、蛋白質(zhì)、基因分析， 免疫分析，細(xì)胞分析，體內(nèi)藥物分析。2指導(dǎo)性指導(dǎo)性 眼睛學(xué)科，先峰學(xué)科 我國(guó)中藥制劑目前存在的問(wèn)題：缺乏明確的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，不能很好地打入國(guó)際市場(chǎng)。二藥物分析的主要任務(wù)二藥物分析的主要任務(wù)1常規(guī)藥品檢驗(yàn) 藥物分析的主體、核心。 分析對(duì)象主要是各藥廠生產(chǎn)的常規(guī)制劑（已用于臨床）及原料藥、醫(yī)院制劑 。2為新藥研究服務(wù) 如新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定 藥物動(dòng)力學(xué)研究 新原料藥的合成，天然產(chǎn)物的研究：結(jié)構(gòu)鑒定，藥物與雜質(zhì)的分離3研究藥物分析新方法、新技術(shù)分析手段的

3、發(fā)展分析手段的發(fā)展：化學(xué)分析 紙色譜、tlc gc（填充柱、毛細(xì)管柱）hplc ce、cec 各種聯(lián)用技術(shù)分析狀態(tài)的發(fā)展：分析狀態(tài)的發(fā)展：靜態(tài)分析 實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)分析分析對(duì)象的發(fā)展分析對(duì)象的發(fā)展：血漿 多細(xì)胞 單細(xì)胞、單分子手性藥物分析的發(fā)展手性藥物分析的發(fā)展：外消旋體 左、右旋體分別分析研究目的：以新方法、新技術(shù)本身為主要目的 -基礎(chǔ)理論研究 以分析對(duì)象為主要目的-應(yīng)用研究4與藥物分析有關(guān)的其它工作三藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)三藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是國(guó)家對(duì)藥品質(zhì)量規(guī)格及檢驗(yàn)方法所作的技術(shù)規(guī)定，是藥品生產(chǎn)、供應(yīng)、使用、檢驗(yàn)和管理部門共同遵循的法定依據(jù)。包括：國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)：藥典、中國(guó)生物制品規(guī)程等部頒標(biāo)準(zhǔn)：如中國(guó)醫(yī)院制劑規(guī)

4、范地方標(biāo)準(zhǔn)四藥典四藥典pharmacopoeia是記載藥品標(biāo)準(zhǔn)的法典。凡是藥典收錄的藥品，其質(zhì)量不符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)的均不得出廠，不得銷不得出廠，不得銷售，不得使用售，不得使用。（一）中國(guó)藥典（一）中國(guó)藥典1沿革沿革：已出版：1953，1963，1977，1985，1990，1995，2000年版2基本結(jié)構(gòu)和主要內(nèi)容基本結(jié)構(gòu)和主要內(nèi)容chp由凡例、正文、附錄和索引四部分組成。（1） 凡例凡例 1）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定）標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：對(duì)有關(guān)規(guī)定、要求和含義等所作的說(shuō)明。如避光是指用不透光的容器包裝；陰涼處系指不超過(guò)20 oc等 2）檢驗(yàn)方法和限度）檢驗(yàn)方法和限度 chp收載的原料藥及制劑均應(yīng)按規(guī)定方法進(jìn)行檢驗(yàn)；或?qū)⑵?/p>

5、他方法與規(guī)定方法對(duì)照。 限度不是真實(shí)含量。若未規(guī)定上限，系指不超過(guò)101.0%。 3）標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品）標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品指用于鑒別、檢查和含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。不包括色譜用的內(nèi)標(biāo)。標(biāo)準(zhǔn)品：是指用于生物檢定、抗生素或生化藥品中含量或效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按效價(jià)單位或g計(jì)。對(duì)照品：除另有規(guī)定外，均按干燥品或無(wú)水物計(jì)算后使用。 4）計(jì)量）計(jì)量：法定計(jì)量單位5）精確度）精確度精密稱定精密稱定：準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。稱定稱定：準(zhǔn)確至所取重量的百分之一。取用量約若干取用量約若干：指該量不得超過(guò)規(guī)定量的10%。精密量取精密量?。褐噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合該體積移液管的精密度要求。稱取、量取稱取、量?。浩渚_度可根

6、據(jù)數(shù)值的有效數(shù)位來(lái)確定。如稱取0.1g，指稱取重量可在0.06-0.14g范圍內(nèi)；2g-1.5-2.5g；2.0g-1.95-2.05g; 2.00g-1.995g-2.005g恒重恒重：小于0.3mg按干燥品（或無(wú)水物，或無(wú)溶劑）計(jì)算按干燥品（或無(wú)水物，或無(wú)溶劑）計(jì)算：除另有規(guī)定外，應(yīng)取未經(jīng)干燥（或未去水或未去溶劑）的供試品進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)得干燥失重后，再在計(jì)算時(shí)從取用量中扣除空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)：不加供試品或以等量溶劑替代供試液，同法操作所得結(jié)果。試驗(yàn)溫度試驗(yàn)溫度：如不說(shuō)明，系指室溫，通常以252 為準(zhǔn)。 6）包裝、標(biāo)簽）包裝、標(biāo)簽（2）正文）正文 收載不同藥品、制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 藥品名稱包括：中

7、文名（中國(guó)藥品通用名稱），漢語(yǔ)拼音名稱和英文名稱。 *中藥材不使用英文名稱，而采用拉丁名稱。（3）附錄）附錄 主要內(nèi)容：制劑通則，生物制品通則，通用檢測(cè)方法，生物檢定法，試藥與試液，溶液配制，原子量表等（4）索引：）索引：中（按漢語(yǔ)拼音順序排列）、英文（二）常用外國(guó)藥典（二）常用外國(guó)藥典美國(guó)藥典美國(guó)藥典usp 與美國(guó)國(guó)家處方集nf (national formulation) 合并出版；從2002年起，usp-nf將原來(lái)的每5年一版改為每年出一版，最新版為usp 26-nf 21 。 同時(shí)還發(fā)行了亞洲版。英國(guó)藥典英國(guó)藥典bp也有英國(guó)國(guó)家處方集配套出版。日本藥局方日本藥局方j(luò)p歐洲藥典歐洲藥典p

8、h. eur. 有英文和法文兩種文本。五藥品檢驗(yàn)工作的基本程序五藥品檢驗(yàn)工作的基本程序1取樣取樣從大量樣品中取出少量樣品，應(yīng)考慮取樣的科學(xué)性、真實(shí)性和代表性。取樣基本原則：均勻、合理。2藥物的鑒別藥物的鑒別：判斷藥品的真?zhèn)胃鶕?jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)進(jìn)行某些化學(xué)反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)現(xiàn)象判斷；或測(cè)定理化常數(shù)或光譜特征，來(lái)判斷。其它包括藥品的外觀、顏色、氣味等的鑒別。應(yīng)結(jié)合多個(gè)鑒別試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判斷，而不能以單個(gè)鑒別試應(yīng)結(jié)合多個(gè)鑒別試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行判斷，而不能以單個(gè)鑒別試驗(yàn)判斷驗(yàn)判斷，否則會(huì)誤判。3藥物的檢查藥物的檢查 主要指純度檢查：是限度檢查4藥物的含量測(cè)定藥物的含量測(cè)定測(cè)定主要有效成分的含量。 * 第3

9、和第4項(xiàng)可用來(lái)判斷藥品質(zhì)量的優(yōu)劣。5檢驗(yàn)報(bào)告的書寫檢驗(yàn)報(bào)告的書寫完整、清楚地記錄原始資料，并寫出檢驗(yàn)報(bào)告（給出結(jié)論）。六全面控制藥品質(zhì)量的科學(xué)管理六全面控制藥品質(zhì)量的科學(xué)管理良好藥品實(shí)驗(yàn)研究規(guī)范良好藥品實(shí)驗(yàn)研究規(guī)范（good laboratory practice, glp）即藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范。科學(xué)、可靠的研究方法才能得出有效、可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，故需對(duì)新藥研究條件作嚴(yán)格規(guī)定。良好藥品臨床試驗(yàn)規(guī)范良好藥品臨床試驗(yàn)規(guī)范（good clinical practice, gcp）gcp可保護(hù)受試者的安全和權(quán)利，有助于保證提供有價(jià)值的臨床研究資料。良好藥品生產(chǎn)規(guī)范良好藥品生產(chǎn)規(guī)范（good ma

10、nufacture practice, gmp）即藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范良好藥品供應(yīng)規(guī)范良好藥品供應(yīng)規(guī)范（good supply practice, gsp） 保證藥品在運(yùn)輸、貯存和銷售過(guò)程中的質(zhì)量some j or http:/ 電子資源 elsvier sdosjournal of pharmaceutical and biomedical analysisjournal of chromatography ajournal of chromatography banalytical chimica actatalantatrends in analytical chemistryjourn

11、al of electroanalytical chemistryanalytical chemistryjournal of medicinal chemistrymolecular pharmaceuticsbiomacromoleculesbiochemistry analysthttp:/ electrophoresisjournal of pharmaceutical sciencejournal of separation sciencechiralityjournal of microcolumn separa

12、tionjournal of mass spectrosmetryluminescencebiomedical chromatographybiopharmaceutics and drug dispositiondrug development researchelectroanalysisjournal of bioluminescence and chemiluminescencesingle molecules藥學(xué)學(xué)報(bào)中國(guó)藥學(xué)雜志藥物分析雜志藥學(xué)通報(bào)國(guó)外醫(yī)學(xué)-藥學(xué)分冊(cè)藥學(xué)進(jìn)展化學(xué)學(xué)報(bào)分析化學(xué)高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)色譜化學(xué)進(jìn)展各主要大學(xué)學(xué)報(bào)第一章藥物的鑒別試驗(yàn)第一章藥物的鑒別試驗(yàn)（identi

13、fication test）第一節(jié)概第一節(jié)概 述述chp和其它各國(guó)藥典所收載的藥物項(xiàng)下的鑒別試驗(yàn)方法，僅適用于貯臧在有標(biāo)簽容器中的藥物，用以證實(shí)是否為所標(biāo)示的藥物。這些方法不能用于鑒別未知物。一鑒別項(xiàng)目一鑒別項(xiàng)目（一）性狀：（一）性狀：包括外觀、色澤、臭、味、溶解度及一些物理常數(shù)。（二）一般鑒別試驗(yàn)（二）一般鑒別試驗(yàn)（general identification test, git）git僅適用于確認(rèn)單一的化學(xué)藥物，對(duì)多種化學(xué)藥物的混合物或有干擾物質(zhì)存在時(shí)，除另有規(guī)定外，不適用。git只能證實(shí)藥物的類別，將藥物與其它類別的藥物區(qū)分開，不能證實(shí)是哪一種藥物。（三）專屬鑒別試驗(yàn)（三）專屬鑒別試驗(yàn)（

14、specific identification, sit)在git的基礎(chǔ)上進(jìn)行，可證實(shí)藥物屬于某類藥物的哪一種。sit根據(jù)每種藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的差異及其所引起的物理化學(xué)特性的差異，采用靈敏、選擇性強(qiáng)的定性反應(yīng)進(jìn)行。二鑒別試驗(yàn)條件二鑒別試驗(yàn)條件1溶液的濃度：溶液的濃度：主要指被鑒別藥物的濃度，但其他試劑的濃度也應(yīng)注意控制，特別是以化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的化學(xué)現(xiàn)象為依據(jù)進(jìn)行鑒別的情況。 藥物 + 試劑 產(chǎn)物 （顏色、沉淀等）2溶液的溫度溶液的溫度 影響化學(xué)反應(yīng)的快慢。一般溫度每升高10，可使反應(yīng)速度增加2-4倍。3溶液的酸堿度溶液的酸堿度溶液的酸堿度應(yīng)能使各反應(yīng)物有足夠的濃度處于反應(yīng)活化狀態(tài)，并使反應(yīng)生成物處于

15、穩(wěn)定、易于觀測(cè)的狀態(tài)。4干擾成分干擾成分 采用專屬性更高的鑒別反應(yīng)或?qū)⒏蓴_成分分離除去，以消除干擾。試驗(yàn)時(shí)間試驗(yàn)時(shí)間對(duì)有機(jī)化合物的化學(xué)反應(yīng)影響較大。因?yàn)橛袡C(jī)反應(yīng)能否進(jìn)行，取決于舊共價(jià)鍵斷裂和新共價(jià)鍵形成的難易，而這些共價(jià)鍵的更替需要一定時(shí)間。三鑒別試驗(yàn)的靈敏度三鑒別試驗(yàn)的靈敏度sensitivity反應(yīng)靈敏度反應(yīng)靈敏度最低檢出量最低檢出量（minimum detectable quantity, mmin） ：應(yīng)用某一反應(yīng)，在一定反應(yīng)條件下，能觀測(cè)出反應(yīng)結(jié)果所需的供試品的最小量。最低檢出濃度最低檢出濃度（minimum detectable concentration, cmin）：應(yīng)用某一反

16、應(yīng)，在一定反應(yīng)條件下，能觀測(cè)出反應(yīng)結(jié)果所需的供試品的最小濃度。*檢測(cè)限檢測(cè)限（limit of detection, lod）zeptomole: 10-21 zmol；attomole: 10-18 amolfemtomole: 10-15 fmol；picomole: 10-12 pmolnanomole: 10-9 nmol2. 空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)blank test消除試劑和器皿可能帶來(lái)的影響。在與供試品鑒別試驗(yàn)完全相同的條件下，除不加供試品外（或以等量溶劑替代供試液），其他試劑同樣加入進(jìn)行的試驗(yàn)。3提高反應(yīng)靈敏度的方法提高反應(yīng)靈敏度的方法1）消除干擾：如熒光法需濾出天然光和激發(fā)光的干擾

17、。2）改進(jìn)觀測(cè)方法：如將目視觀測(cè)溶液的顏色改為可見分光光度法。3）加入與水互不相溶的有機(jī)溶劑：濃集有色生成物（脂溶性）于有機(jī)溶劑中顏色加深，易觀察。第二節(jié)第二節(jié) 藥物的一般鑒別試驗(yàn)藥物的一般鑒別試驗(yàn)一鑒別方法一鑒別方法（一）化學(xué)鑒別法（一）化學(xué)鑒別法1干法干法：無(wú)溶劑參與反應(yīng) 焰色試驗(yàn)：鑒別鹽的類型 氣體產(chǎn)生法：在適當(dāng)溫度條件下，加熱使供試品分解，生成有特殊氣味的氣體。濕法濕法：鑒別反應(yīng)在適當(dāng)溶劑中進(jìn)行，發(fā)生易于觀測(cè)的化學(xué)變化，如顏色、沉淀、氣體、熒光等。 ）呈色反應(yīng)鑒別法）呈色反應(yīng)鑒別法： 常用反應(yīng)有： 三氯化鐵呈色反應(yīng)：適用于含ar-oh或可產(chǎn)生ar-oh的藥物。異羥肟酸鐵反應(yīng)：多適用于芳

18、酸及其酯類、酰胺類。印三酮呈色反應(yīng)：多適用于含脂肪胺基的藥物。重氮化-偶合顯色反應(yīng)：適用于含ar-nh2 或能產(chǎn)生ar-nh2的藥物。氧化還原顯色反應(yīng)）沉淀生成反應(yīng)鑒別法）沉淀生成反應(yīng)鑒別法與重金屬離子的沉淀反應(yīng)：重金屬指比重大于5的金屬，如cu，ni，pb，zn，sn，w等。與硫氰化鉻銨（雷氏鹽）的沉淀反應(yīng)：主要適用于生物堿及其鹽、具有芳香環(huán)的有機(jī)堿及其鹽。 3）熒光反應(yīng)鑒別法）熒光反應(yīng)鑒別法熒光熒光：是分子吸收了較短波長(zhǎng)的光（激發(fā)光，通常為可見和uv光），在很短時(shí)間內(nèi)發(fā)射出的較長(zhǎng)波長(zhǎng)的光。除去激發(fā)光源后，熒光立即熄滅。常用熒光發(fā)射形式常用熒光發(fā)射形式：藥物本身在uv或可見光下發(fā)射熒光-自發(fā)熒光。藥物溶液 + 硫酸呈酸性后，發(fā)射；藥物 + br2反應(yīng)后，發(fā)射；藥物 + 間苯二酚反應(yīng)后，發(fā)射- 衍生后發(fā)熒光。）氣體生成反應(yīng)鑒別法）氣體生成反應(yīng)鑒別法 氨氣（胺