血液中乙醇的測(cè)定頂空氣相色譜法SFZJD0107001

1、發(fā) 布中華人民共和國(guó)司法部司法鑒定管理局司法鑒定技術(shù)規(guī)范sf/z jd010700120162016-9-22實(shí)施2016-9-22發(fā)布血液中乙醇的測(cè)定頂空氣相色譜法目 次前言i1 范圍12 規(guī)范性引用文件13 原理14 試劑和材料15 儀器16 測(cè)定步驟27 結(jié)果計(jì)算3附錄a （資料性附錄） 乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖4附錄b （資料性附錄） 校準(zhǔn)曲線5前 言本技術(shù)規(guī)范按照gb/t 1.1-2009給出的規(guī)則起草。本技術(shù)規(guī)范的附錄a和附錄b為資料性附錄。本技術(shù)規(guī)范由司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所提出。本技術(shù)規(guī)范由司法部司法鑒定管理局歸口。本技術(shù)規(guī)范起草單位：司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所。本技術(shù)

2、規(guī)范主要起草人：卓先義、劉偉、向平、沈保華、卜俊、馬棟、嚴(yán)慧。本技術(shù)規(guī)范所代替規(guī)范的歷次版本發(fā)布情況為：sf/z jd01070012010。血液中乙醇的測(cè)定頂空氣相色譜法1 范圍本技術(shù)規(guī)范規(guī)定了血液中乙醇的頂空氣相色譜測(cè)定方法。本技術(shù)規(guī)范適用于血液中乙醇的定性及定量分析。本技術(shù)規(guī)范的方法檢出限為0.01mg/ml；定量下限為0.05mg/ml。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本技術(shù)規(guī)范的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本技術(shù)規(guī)范。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本技術(shù)規(guī)范。gb/t 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法（gb/t 668

3、2-2008，iso 3696：1987，mod）ga/t 122 毒物分析名詞術(shù)語(yǔ)3 原理本法利用乙醇的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)與平行操作的乙醇對(duì)照品比較，以保留時(shí)間進(jìn)行定性分析；以峰面積為依據(jù)，用內(nèi)標(biāo)法定量。4 試劑和材料除另有說(shuō)明外，水為gb/t 6682規(guī)定的二級(jí)水。4.1 乙醇色譜純。4.2 乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液精密稱取適量乙醇，用水配成10.0mg/ml乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。儲(chǔ)備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。試驗(yàn)中所用其它濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液均從上述儲(chǔ)備液稀釋而得，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為3個(gè)月。4.3 叔丁醇色譜純。4.4 叔丁醇溶液精密

4、稱取適量叔丁醇，用水配成5.0mg/ml叔丁醇儲(chǔ)備液。儲(chǔ)備液在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為12個(gè)月。將儲(chǔ)備液用水稀釋，得40.0g/ml叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，在冰箱中冷藏密閉保存，有效期為6個(gè)月。5 儀器 5.1 氣相色譜儀配火焰離子化檢測(cè)器（fid）。5.2 頂空進(jìn)樣器配1ml定量進(jìn)樣環(huán)。5.3 樣品瓶10ml，頂空自動(dòng)進(jìn)樣器用。5.4 硅橡膠墊5.5 鋁帽5.6 密封鉗5.7 精密移液器5.8 自動(dòng)稀釋儀6 測(cè)定步驟6.1 樣品處理用精密移液器或自動(dòng)稀釋儀取待測(cè)血液0.10 ml及0.50 ml 40.0g/ml 叔丁醇內(nèi)標(biāo)工作液，加入樣品瓶?jī)?nèi)，蓋上硅橡膠墊，用密封鉗加封鋁帽，混勻。6.2 測(cè)

5、定6.2.1 頂空氣相色譜測(cè)定參考條件a） 色譜柱（1）：db-alc1（30m´0.32mm´1.8mm）石英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者；柱溫：恒溫40°c； 色譜柱（2）：db-alc2（30m´0.32mm´1.2mm）石英毛細(xì)管柱或相當(dāng)者；柱溫：恒溫40°c；b） 載氣：氮?dú)?，純?9.999%，流速8ml/min；c） 進(jìn)樣口溫度：150°c；d） 檢測(cè)器溫度：250°c；e） 加熱箱溫度：65°c；f） 定量環(huán)溫度：105°c；g） 傳輸線溫度：110°c；h） 氣相循環(huán)時(shí)間：3.5

6、min；i） 樣品瓶加熱平衡時(shí)間：10.0min；j） 樣品瓶加壓時(shí)間：0.10min；k） 定量環(huán)充滿時(shí)間：0.10min；l） 定量環(huán)平衡時(shí)間：0.05min；m） 進(jìn)樣時(shí)間：1.00min。6.2.2 定性測(cè)定樣品溶液按照頂空氣相色譜測(cè)定條件測(cè)定，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，記錄色譜峰的保留時(shí)間。將待測(cè)樣品色譜峰的保留時(shí)間與乙醇標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的保留時(shí)間比較，相對(duì)誤差在±2%內(nèi)，空白對(duì)照樣品內(nèi)標(biāo)物色譜峰正常而無(wú)乙醇的色譜峰，一般可以認(rèn)為待測(cè)樣品中含有乙醇；必要時(shí)，選擇不同的色譜條件或用氣相色譜-質(zhì)譜法確證。如果內(nèi)標(biāo)物色譜峰正常，而無(wú)乙醇的色譜峰時(shí)，可認(rèn)為檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖

7、，參見(jiàn)附錄a。6.2.3 定量測(cè)定本方法采用內(nèi)標(biāo)法校準(zhǔn)曲線法或內(nèi)標(biāo)法單點(diǎn)校正法定量測(cè)定。6.2.3.1 內(nèi)標(biāo)法校準(zhǔn)曲線法采用內(nèi)標(biāo)-校準(zhǔn)曲線法測(cè)定（見(jiàn)附錄b）。將乙醇對(duì)照品溶液進(jìn)樣，以乙醇和內(nèi)標(biāo)峰面積比為縱坐標(biāo)，乙醇對(duì)照品工作溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量，所測(cè)樣品中乙醇的濃度值應(yīng)在線性范圍內(nèi)。6.2.3.2 內(nèi)標(biāo)法單點(diǎn)校正法待測(cè)血液樣品乙醇濃度在標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的±30%內(nèi)可用單點(diǎn)法定量。6.3 平行試驗(yàn)按以上步驟對(duì)同一待測(cè)樣品進(jìn)行平行試驗(yàn)。單柱單檢測(cè)器兩份樣品測(cè)定結(jié)果按兩份樣品的平均值計(jì)算，雙樣相對(duì)相差不得超過(guò)10（有凝血塊的血樣不超過(guò)15）。雙樣相對(duì)相差按

8、式（1）計(jì)算： | c1 - c2|雙樣相對(duì)相差（%） = ¾¾¾¾¾ ´ 100 （1） c式中：c1、c2¾¾兩份樣品平行定量測(cè)定的結(jié)果；c ¾¾兩份樣品平行定量測(cè)定結(jié)果的平均值(c1+c2)/2。雙柱雙檢測(cè)器兩份樣品測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd（%）若不超過(guò)5時(shí)（有凝血塊的血樣不超過(guò)10%），結(jié)果按兩份樣品結(jié)果的平均值計(jì)算。7 結(jié)果計(jì)算血液中乙醇濃度測(cè)定采用內(nèi)標(biāo)法校準(zhǔn)曲線法定量或按式(2)計(jì)算： a´ ai´c c = ¾¾¾¾&

9、#190;¾ （2） a´ai 式中：c¾¾血液樣品中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/ml)；a¾¾血液樣品中乙醇的峰面積；a¾¾標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醇的峰面積；ai¾¾標(biāo)準(zhǔn)溶液中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；ai¾¾血液樣品中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；c¾¾標(biāo)準(zhǔn)溶液中乙醇濃度，單位為毫克每毫升(mg/ml)。附錄a （資料性附錄）乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖a.1 按色譜柱（1）條件得乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，見(jiàn)圖a.1。叔丁醇(2.09)乙醇 (1.43)圖a.1 按色譜柱（1）條件得的乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖a.2 按色譜柱（2）條件得乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖，見(jiàn)圖a.2。叔丁醇(2.03)乙醇 (1.51)圖a.2 按色譜柱（2）條件得的乙醇對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)氣相色譜圖附錄b （資料性附錄）校準(zhǔn)曲線配制乙醇濃度為0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/ml的水溶液，按6.1和6.2項(xiàng)下分析，每一濃度點(diǎn)取2份，以乙醇與內(nèi)標(biāo)叔丁醇的峰面積比對(duì)乙