molecular marker 分子標(biāo)記

1、分子標(biāo)記及輔助育種技術(shù)分子標(biāo)記及輔助育種技術(shù)分子標(biāo)記的類型：分子標(biāo)記的類型：第一類是以分子雜交為核心的分子標(biāo)記技術(shù)，包第一類是以分子雜交為核心的分子標(biāo)記技術(shù)，包括括RFLP、DNA指紋技術(shù)等；指紋技術(shù)等；第二類是以第二類是以PCR為核心的分子標(biāo)記技術(shù)，包括為核心的分子標(biāo)記技術(shù)，包括RAPD、簡單序列重復(fù)標(biāo)記、簡單序列重復(fù)標(biāo)記SSR、序標(biāo)位、序標(biāo)位STS、序列特征化擴增區(qū)域序列特征化擴增區(qū)域SCAR等；等；第三類是一些新型的分子標(biāo)記，如：第三類是一些新型的分子標(biāo)記，如：SNP標(biāo)記、標(biāo)記、表達(dá)序列標(biāo)簽表達(dá)序列標(biāo)簽EST標(biāo)記等。標(biāo)記等。分子標(biāo)記的特點：分子標(biāo)記的特點：（1）直接以）直接以DNA的形式

2、表現(xiàn)，表現(xiàn)穩(wěn)定的形式表現(xiàn)，表現(xiàn)穩(wěn)定（2）數(shù)量多）數(shù)量多（3）多態(tài)性高）多態(tài)性高（4）表現(xiàn)為中性，不影響目標(biāo)性狀的表達(dá)；）表現(xiàn)為中性，不影響目標(biāo)性狀的表達(dá)；（5）許多標(biāo)記表現(xiàn)為共顯性的特點，能區(qū)別）許多標(biāo)記表現(xiàn)為共顯性的特點，能區(qū)別 純合體和雜合體。純合體和雜合體。（6）成本不太高）成本不太高RFLP標(biāo)記標(biāo)記植物基因組植物基因組DNA上的上的堿基替換、插入、缺失堿基替換、插入、缺失或重復(fù)等，造成某種限或重復(fù)等，造成某種限制性內(nèi)切酶酶切位點的制性內(nèi)切酶酶切位點的增加或喪失，從而產(chǎn)生增加或喪失，從而產(chǎn)生限制性片斷長度多態(tài)限制性片斷長度多態(tài)性。性。 用用DNA限制性內(nèi)切酶消化限制性內(nèi)切酶消化South

3、ern雜交雜交 放射性自顯影或酶學(xué)檢測放射性自顯影或酶學(xué)檢測 DNA提取提取凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)移到濾膜上凝膠電泳分離，轉(zhuǎn)移到濾膜上A 無表型效應(yīng)，不受環(huán)境條件和發(fā)育階段的影響。無表型效應(yīng)，不受環(huán)境條件和發(fā)育階段的影響。B 等位基因之間是共顯性的，在配制雜交組合時不受等位基因之間是共顯性的，在配制雜交組合時不受雜交方式的影響。雜交方式的影響。C 在非等位的在非等位的RFLP標(biāo)記之間不存在上位效應(yīng)，因而互標(biāo)記之間不存在上位效應(yīng)，因而互不干擾不干擾D RFLP標(biāo)記起源于基因組標(biāo)記起源于基因組DNA的自身變異，在數(shù)量上的自身變異，在數(shù)量上幾乎不受限制幾乎不受限制E DNA需要量大，檢測技術(shù)繁雜，難以用于

4、大規(guī)模的需要量大，檢測技術(shù)繁雜，難以用于大規(guī)模的育種實踐中。在植物分子標(biāo)記輔助育種中需要將育種實踐中。在植物分子標(biāo)記輔助育種中需要將RFLP轉(zhuǎn)換成以轉(zhuǎn)換成以PCR為基礎(chǔ)的標(biāo)記。為基礎(chǔ)的標(biāo)記。RFLP標(biāo)記的特點標(biāo)記的特點RAPD標(biāo)記標(biāo)記RAPD引物擴增電泳檢測結(jié)果S104GGAAGTCGCCS105AGTCGTCCCCS106ACGCATCGCAS107CTGCATCGTGS108GAAACACCCCS109TGTAGCTGGGS110CCTACGTCAGS111CTTCCGCAGTS112ACGCGCATGT（1）不需）不需DNA探針，引物設(shè)計無須知道序列信息；探針，引物設(shè)計無須知道序列信息；

5、（2）顯性遺傳（極少數(shù)共顯性），不能鑒別雜合子）顯性遺傳（極少數(shù)共顯性），不能鑒別雜合子和純合子；和純合子；（3）技術(shù)簡便，不涉及分子雜交和放射性自顯影等）技術(shù)簡便，不涉及分子雜交和放射性自顯影等技術(shù)；技術(shù)；（4）樣品需要量少，引物價格便宜，成本較低；）樣品需要量少，引物價格便宜，成本較低；（5）實驗重復(fù)性較差，結(jié)果可靠性較低。）實驗重復(fù)性較差，結(jié)果可靠性較低。 RAPD標(biāo)記的主要特點：標(biāo)記的主要特點：AFLP標(biāo)記標(biāo)記EcoR I / Mse I酶切酶切EcoRI接頭接頭ACPCR 預(yù)擴增預(yù)擴增連接連接 接頭接頭MseI接頭接頭A N NN N C選擇性選擇性 PCR聚丙烯凝膠聚丙烯凝膠電泳和

6、硝酸電泳和硝酸銀染色檢測銀染色檢測AFLP標(biāo)記PAGE電泳結(jié)果（1）由于）由于AFLP分析采用的限制性內(nèi)切酶及選擇性堿基種分析采用的限制性內(nèi)切酶及選擇性堿基種類、數(shù)目很多，所以該技術(shù)所產(chǎn)生的標(biāo)記數(shù)目是無限多類、數(shù)目很多，所以該技術(shù)所產(chǎn)生的標(biāo)記數(shù)目是無限多的；的；（2）每次反應(yīng)產(chǎn)物的譜帶在）每次反應(yīng)產(chǎn)物的譜帶在50-100條之間，所以一次分條之間，所以一次分析可以同時檢測到多個座位，且多態(tài)性極高；析可以同時檢測到多個座位，且多態(tài)性極高；（3）表現(xiàn)共顯性，呈典型孟德爾式遺傳；）表現(xiàn)共顯性，呈典型孟德爾式遺傳；（4）分辯率高，結(jié)果可靠；）分辯率高，結(jié)果可靠；（5）目前該技術(shù)受專利保護(hù)。）目前該技術(shù)受

7、專利保護(hù)。 AFLP標(biāo)記的主要特點：標(biāo)記的主要特點：（簡單重復(fù)序列）（簡單重復(fù)序列） SSR標(biāo)記標(biāo)記（1）數(shù)量豐富，廣泛分布于整個基因）數(shù)量豐富，廣泛分布于整個基因（2）具有較多的等位性變異；）具有較多的等位性變異；（3）共顯性標(biāo)記，可鑒別出雜合子和純合子；）共顯性標(biāo)記，可鑒別出雜合子和純合子；（4）實驗重復(fù)性好，結(jié)果可靠；）實驗重復(fù)性好，結(jié)果可靠；（5）由于創(chuàng)建新的標(biāo)記時需知道重復(fù)序列兩端）由于創(chuàng)建新的標(biāo)記時需知道重復(fù)序列兩端的序列信息，因此其開發(fā)有一定困難，費用也的序列信息，因此其開發(fā)有一定困難，費用也較高。較高。SSR標(biāo)記的主要特點：標(biāo)記的主要特點：簡單重復(fù)間序列（簡單重復(fù)間序列（ISS

8、R）標(biāo)記）標(biāo)記 SNP標(biāo)記標(biāo)記SNPSNP密度高，分布廣，平均約每密度高，分布廣，平均約每10001000對堿基出現(xiàn)對堿基出現(xiàn)一個一個SNPSNP。 兩個無關(guān)個體間約有兩個無關(guān)個體間約有300300萬個萬個SNPsSNPs。其它分子標(biāo)記技術(shù)其它分子標(biāo)記技術(shù)DAF (DNA amplification fingerprinting，DNA擴增指紋)AP-PCR (arbitrary primer PCR)SCAR (sequence characterized amplified region，序列特異性擴增區(qū))STS (sequence tagged site，序列標(biāo)簽位點)、SSCP (si

9、ngle strand confirmation polymorphism，單鏈構(gòu)象多態(tài)性)、CAPS (cleave amplified polymorphic sequence)。等。等。分子標(biāo)記輔助選分子標(biāo)記輔助選擇的遺傳學(xué)基礎(chǔ)擇的遺傳學(xué)基礎(chǔ)標(biāo)記輔助選擇的主要方面是對目標(biāo)基因的選擇，有標(biāo)記輔助選擇的主要方面是對目標(biāo)基因的選擇，有人稱之為人稱之為前景選擇前景選擇（foreground selection）。）。前景選擇的可靠性主要取決于前景選擇的可靠性主要取決于標(biāo)記與目標(biāo)基因間連標(biāo)記與目標(biāo)基因間連鎖的緊密程度鎖的緊密程度。若只用一個標(biāo)記對目標(biāo)基因進(jìn)行選。若只用一個標(biāo)記對目標(biāo)基因進(jìn)行選擇，則

10、標(biāo)記與目標(biāo)基因間的連鎖必須非常緊密，才擇，則標(biāo)記與目標(biāo)基因間的連鎖必須非常緊密，才能夠達(dá)到較高的正確率。能夠達(dá)到較高的正確率。 供體受體 RR Rr rr (1-r)2r(1-r) rMRmrMRmr目標(biāo)基因與目標(biāo)基因與DNA標(biāo)記間的遺傳距離位標(biāo)記間的遺傳距離位p親本中親本中DNA標(biāo)記的帶型標(biāo)記的帶型F 雜種中雜種中DNA標(biāo)記的帶型標(biāo)記的帶型在在F 分離群體中分子標(biāo)記類型分離群體中分子標(biāo)記類型即即MM,Mm,mmMM類型的分子標(biāo)記所代表的目標(biāo)基類型的分子標(biāo)記所代表的目標(biāo)基因型及其頻率因型及其頻率利利用用MAS的的遺遺傳傳基基礎(chǔ)礎(chǔ)（以（以RFLP為為例）例） M抗性標(biāo)記抗性標(biāo)記 R抗性基因抗性基

11、因m感病標(biāo)記感病標(biāo)記 r感病基因感病基因 選擇的正確率隨重組率的增加而迅速下降。重組值越小，其錯選率越低。 如果要求至少選到一株目標(biāo)基因型的概率為P，則必須選擇具有標(biāo)記基因型MM的植株至少為： nlog（1-P）/log（1-p） 式中p（1r）2 對基因組中其他部分（即遺傳背景）選擇，稱為對基因組中其他部分（即遺傳背景）選擇，稱為背景選擇背景選擇（background selections）。背景選）。背景選擇的對象幾乎包括了整個基因組，因此，這里牽擇的對象幾乎包括了整個基因組，因此，這里牽涉到一個全基因組選擇的問題，在分離群體中，涉到一個全基因組選擇的問題，在分離群體中，由于在上一代形成配

12、子時同源染色體之間會發(fā)生由于在上一代形成配子時同源染色體之間會發(fā)生交換，因此每條染色體都可能是由雙親染色體重交換，因此每條染色體都可能是由雙親染色體重新組裝的雜合體。新組裝的雜合體。 分子標(biāo)記的優(yōu)越性分子標(biāo)記的優(yōu)越性1.1.克服性狀表現(xiàn)型鑒定的困難克服性狀表現(xiàn)型鑒定的困難2.2.允許早期選擇允許早期選擇3.3.控制單一性狀的多個（等位）基因的利用控制單一性狀的多個（等位）基因的利用4.4.允許同時選擇多個性狀允許同時選擇多個性狀5.5.可進(jìn)行性狀非破壞性評價和選擇可進(jìn)行性狀非破壞性評價和選擇6.6.從育種進(jìn)程考慮，可加快育種進(jìn)程，提高從育種進(jìn)程考慮，可加快育種進(jìn)程，提高育種效率育種效率開展分子

13、標(biāo)記輔助選開展分子標(biāo)記輔助選擇應(yīng)具備的主要條件擇應(yīng)具備的主要條件 A：與目標(biāo)基因緊密連鎖的分子：與目標(biāo)基因緊密連鎖的分子標(biāo)記標(biāo)記 B: 簡便快捷的標(biāo)記檢測方法簡便快捷的標(biāo)記檢測方法目標(biāo)基因的標(biāo)記篩選（目標(biāo)基因的標(biāo)記篩選（gene tagging）是進(jìn)行）是進(jìn)行分子標(biāo)記輔助選擇（分子標(biāo)記輔助選擇（MAS）育種的基礎(chǔ)。用于）育種的基礎(chǔ)。用于MASMAS育種的分子標(biāo)記須具備三個條件：育種的分子標(biāo)記須具備三個條件： 分子標(biāo)記與目標(biāo)基因緊密連分子標(biāo)記與目標(biāo)基因緊密連鎖鎖 標(biāo)記實用性強，重復(fù)性好，標(biāo)記實用性強，重復(fù)性好，而且能夠經(jīng)濟(jì)簡便地檢測大而且能夠經(jīng)濟(jì)簡便地檢測大量個體。量個體。 不同遺傳背景選擇有效

14、。不同遺傳背景選擇有效。遺傳作圖的原理遺傳作圖的原理 其原理是基于其原理是基于染色體的交換與重組染色體的交換與重組。在。在細(xì)胞減數(shù)分裂時，非同源染色體上的基因細(xì)胞減數(shù)分裂時，非同源染色體上的基因相互獨立，自由組合，而位于同源染色體相互獨立，自由組合，而位于同源染色體上的連鎖基因在減數(shù)分裂前期上的連鎖基因在減數(shù)分裂前期I I非姊妹染色非姊妹染色單體間的交換而發(fā)生基因重組，用重組率單體間的交換而發(fā)生基因重組，用重組率來表示基因間的遺傳距離。遺傳圖譜只顯來表示基因間的遺傳距離。遺傳圖譜只顯示基因間在染色體上的位置，并不反映示基因間在染色體上的位置，并不反映DNADNA的實際長度。的實際長度。遺傳圖譜

15、的構(gòu)建與農(nóng)藝性狀基因的標(biāo)記遺傳圖譜的構(gòu)建與農(nóng)藝性狀基因的標(biāo)記構(gòu)建遺傳圖譜的主要環(huán)節(jié)：構(gòu)建遺傳圖譜的主要環(huán)節(jié)： 根據(jù)遺傳材料之間的多態(tài)性確定親本根據(jù)遺傳材料之間的多態(tài)性確定親本組合，建立作圖群體。組合，建立作圖群體。 對群體中不同植株的標(biāo)記進(jìn)行基因性對群體中不同植株的標(biāo)記進(jìn)行基因性分析。分析。借助計算機程序構(gòu)建連鎖群借助計算機程序構(gòu)建連鎖群用于分子標(biāo)記的遺傳作圖可分為兩類：用于分子標(biāo)記的遺傳作圖可分為兩類： 暫時性分離群體：暫時性分離群體：包括F2、F3、F4、BC、三交群體等，這類群體中分離單位是個體，一經(jīng)自交或近交其遺傳組成就會發(fā)生變化，無法永久使用，由于每個單株所提供的DNA有限，且只能使

16、用一代，限制了該群體的作圖能力； 永久性分離群體永久性分離群體：包括RIL、DH等，這類群體中分離單位為株系，不同株系之間存在基因型的差異，而株系內(nèi)個體之間的基因型是相同且純合的，自交后不會發(fā)生分離，因此可通過自交或近交繁殖后代，而不會改變?nèi)后w的遺傳組成，可以永久使用。 親本親本1 親本親本2F1F2F2F2群體群體F2F2群體的特點群體的特點 F2群體構(gòu)建比較省時，不需很長時間便可得到一個較大的群體，這是使用F2群體進(jìn)行遺傳作圖的最大優(yōu)點。 F2群體中存在雜合基因型，對于顯性標(biāo)記將無法識別顯性純合基因型和雜合基因型，由于這種基因型信息簡并現(xiàn)象的存在，會降低作圖的精度。 通過遠(yuǎn)緣雜交而來的F2

17、分離群體，則遠(yuǎn)緣雜交親本后代向兩極瘋狂分離，標(biāo)記比例易偏離3：1。 延長延長F2F2使用時間的措施使用時間的措施 采用無性繁殖，如進(jìn)行組織培養(yǎng)擴繁、留蔸再生等。 使用F2單株的衍生系（F3株系或F4家系），將衍生系內(nèi)多個單株混合提取DNA，則能代表原F2單株的DNA組成。從衍生系中選取單株必須是隨機的，且株數(shù)要足夠多。 BC1群體群體親本親本1 親本親本2F1 親本親本1或或2BC1BC1BC1群體的特點群體的特點 BC1群體中每一分離的基因座只有兩種基因型，它直接反映了F1代配子的分離比例，因而BC1群體的作圖效率是最高的。 由于該群體的配子類型較少，統(tǒng)計及作圖分析較為簡單，但提供的信息量少

18、于F2群體，且可供作圖的材料有限，不能多代使用。 對于一些人工雜交比較困難的植物，BC1群體不太適合用來作圖，一是難以建立較大的BC1群體，二是容易出現(xiàn)假雜種，造成作圖的誤差。 RILRIL群體群體 RIL的特點的特點 RIL群體一旦建立，就可以代代繁衍保存，有利于不同實驗室的協(xié)同研究，而且作圖的準(zhǔn)確度更高。 異花授粉植物由于存在自交衰退和不結(jié)實現(xiàn)象，構(gòu)建RIL群體比較困難。 建立RIL群體相當(dāng)費時。DHDH群體群體DHDH群體的特點群體的特點 DH植株是純合的，自交后即產(chǎn)生純系，因此DH群體能夠穩(wěn)定繁殖，長期使用。 DH群體的遺傳結(jié)構(gòu)直接反映了F1配子中基因的分離和重組，因此DH群體與BC1

19、群體一樣其作圖效率是最高的。 構(gòu)建DH群體需精湛的花培技術(shù)和染色體加倍技術(shù)，同時所提供的信息量也明顯低于F2群體。 植物的花培能力跟基因型關(guān)系較大，因而花培過程會對不同基因型的花粉產(chǎn)生選擇效應(yīng)，從而破壞DH群體的遺傳結(jié)構(gòu)，造成嚴(yán)重的偏分離現(xiàn)象，影響到遺傳作圖的準(zhǔn)確性。 F2F2BC1BC1DHDHRILRIL群體形成 F1自交后代F1回交后代F1花粉分化個體F2個體自交后代性狀研究對象個體個體品系品系準(zhǔn)確度低低高高必要的群體規(guī)模大大中中分離比例1:2:3或3:11:11:11:1近等基因系的培育與農(nóng)藝性狀基因的標(biāo)記近等基因系的培育與農(nóng)藝性狀基因的標(biāo)記PF1BC1F1BCnFnNIL群體分離分析

20、法與重要農(nóng)藝性狀基因的標(biāo)記群體分離分析法與重要農(nóng)藝性狀基因的標(biāo)記群體分離分析法（bulked segregant analysis, BSA）是Michelmore等在萵苣的抗病性研究中提出的， 簡稱法。法是從近等基因系分析法演化而來的， 它省去了費時費工的選育近等基因系過程， 克服了許多作物沒有或難以創(chuàng)建相應(yīng)的限制， 在自交和異交物種中均有廣泛的應(yīng)用前景。對于尚無連鎖圖或連鎖圖飽和程度較低的植物，利用 法也是進(jìn)行快速獲得與目標(biāo)基因連鎖的分子標(biāo)記的有效方法。此法是根據(jù)性狀在此法是根據(jù)性狀在 代的極端表現(xiàn)分成二組，代的極端表現(xiàn)分成二組， 用這二組提取的用這二組提取的 分別混合成分別混合成 庫，庫

21、， 用此兩個用此兩個 庫，庫， 篩選出與被測性狀篩選出與被測性狀相關(guān)的分子標(biāo)記。相關(guān)的分子標(biāo)記。 然后，然后， 用此標(biāo)記在分析群體中進(jìn)行標(biāo)記與性狀間的共分離分析，用此標(biāo)記在分析群體中進(jìn)行標(biāo)記與性狀間的共分離分析， 確定是確定是否連鎖及彼此間的遺傳距離，否連鎖及彼此間的遺傳距離， 進(jìn)行基因定位。進(jìn)行基因定位?？?感 雜 雜 雜 感 雜 抗 感 雜 抗 雜 雜 抗 感分離分離群體群體分子分子標(biāo)記標(biāo)記輔助輔助選擇選擇抗性抗性鑒定鑒定結(jié)果結(jié)果作物作物MAS育種須具備的條件育種須具備的條件分子標(biāo)記與目標(biāo)基因共分離或緊密連鎖，一般要求兩者間的遺傳距離小于5cM,最好1cM或更小。具有在大群體中利用分子標(biāo)記

22、進(jìn)行篩選的有效手段，主要是應(yīng)用PCR技術(shù)。篩選技術(shù)在不同實驗室間重復(fù)性好，且具有經(jīng)濟(jì)、易操作的特點。具有實用化程度高并能協(xié)助育種家作出抉擇的計算機數(shù)據(jù)處理軟件。MAS策略策略（一）回交育種（一）回交育種（二）（二）大范圍群體內(nèi)的單目標(biāo)基因大范圍群體內(nèi)的單目標(biāo)基因(SLS-MAS)（三）（三）MAS聚合育種聚合育種SLS-MAS基本原理是在一個隨機雜交的混合群體中，首先在一個很大群體中利用分子標(biāo)記輔助選擇目標(biāo)性狀，盡可能使選擇群體足夠大，使中選的植株就目標(biāo)位點純合，使中選的植株就目標(biāo)位點純合，而在目標(biāo)位點以外的其它基因位點上保持有大的遺傳而在目標(biāo)位點以外的其它基因位點上保持有大的遺傳多樣性，多樣

23、性，最好仍呈孟德爾分離，這樣，分子標(biāo)記篩選后，仍有很大遺傳多樣性供育種家通過傳統(tǒng)育種方法選擇，產(chǎn)生新的品種和雜交種。這種方法對于分子標(biāo)記輔助選擇質(zhì)量性狀或數(shù)量性狀均適用。 利用傳統(tǒng)育種方法結(jié)合DNA指紋圖譜選擇用于MAS的優(yōu)異親本，特別對于數(shù)量性狀而言，不同親本針對同一目標(biāo)性狀要具有不同的重要的QTL。即具有更多的等位多樣性。 確定某重要農(nóng)藝性狀QTL標(biāo)記。利用中選親本與測驗系雜交，將F1自交產(chǎn)生分離群體，一般200-300株，結(jié)合F2-3株行田間調(diào)查結(jié)果，以確定主要QTL的分子標(biāo)記。 結(jié)合篩選的QTL標(biāo)記，對上述分離群體中單株進(jìn)行SLS-MAS。 根據(jù)標(biāo)記有無選擇目標(biāo)材料。由于連鎖累贅，除中

24、選QTL標(biāo)記外，使其附近其它位點保持最大的遺傳多樣性。進(jìn)一步通過中選單株自交，根據(jù)本地生態(tài)需要進(jìn)行系統(tǒng)選擇，育成新的優(yōu)異品系?；?qū)⒅羞x單株與測驗系雜交產(chǎn)生新雜種。 受體親本受體親本 供體親本供體親本A(無優(yōu)質(zhì)基因無優(yōu)質(zhì)基因) (含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因A)受體親本受體親本 供體親本供體親本B(無優(yōu)質(zhì)基因無優(yōu)質(zhì)基因) (含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因B) F1(含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因A) F1(含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因B)復(fù)雜雜種復(fù)雜雜種(分離群體分離群體)受體親本受體親本 供體親本供體親本C(無優(yōu)質(zhì)基因無優(yōu)質(zhì)基因) (含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因C)中選雜種個體中選雜種個體 F1 (含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因A和和B) (含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因C)復(fù)雜雜種復(fù)雜雜種(分離群體分離群體)中選雜種個體中選雜種個體 受體親本受體親本(含優(yōu)質(zhì)基因含優(yōu)質(zhì)基因A、B和和C) 新育成的優(yōu)質(zhì)品種新育成的優(yōu)質(zhì)品種 (受體親本遺傳背景受體親本遺傳背景+優(yōu)質(zhì)基因優(yōu)質(zhì)基因A、B和和C)回交回交12代，標(biāo)記輔助選擇代，標(biāo)記輔助選擇自交自交標(biāo)記輔助選擇標(biāo)記輔助選擇標(biāo)記輔助選擇標(biāo)記輔助選擇提高分子標(biāo)記的篩選效率（一）多重（一）多重PCRPCR方法方法（二）用相斥相分子標(biāo)記進(jìn)行育種選擇（二）用相斥相分子標(biāo)記進(jìn)行育種選擇（三）克服連鎖累贅（