亞硝酸鹽的測(cè)定

1、鹽酸蔡乙二胺法測(cè)定亞硝酸鹽的含量1亞硝酸鹽的測(cè)定（鹽酸蔡乙二胺法）1.1原理重氮化樣品經(jīng)沉淀蛋口質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸性條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺 酸（H亦一CH-SOJi）重氮化，產(chǎn)生重氮鹽，此重氮鹽再與偶合試劑（鹽酸蔡乙二胺） 偶合形成紫紅色染料，其最大吸收波長(zhǎng)為550nm,測(cè)定其吸光度后，可與標(biāo)準(zhǔn)比 較定量。2HC1+NaNO? + H2N-SOsHCl- N-SChH + NaCl+ 2H2ON2HC1-H2NH2CH2CHN-H3 o -S 0-N川N1- c +鹽酸蔡乙二胺2HC1-H2NH2CH2CHN-N= N-<>-SOsH + HC1紫紅色1. 2儀器和試劑1

2、. 2.1儀器 小型粉碎機(jī)。 分光光度計(jì)。 25ml具塞比色管。1. 2. 2試劑 氯化飲緩沖溶液：在1 000ml容量瓶中加人500ml水，然后準(zhǔn)確加入20. 0ml鹽酸，振蕩混勻后，再準(zhǔn)確加入50ml氫氧化鞍，用水稀釋至刻度。必要時(shí)用稀鹽酸和稀氫氧化鍍調(diào)試pH至9. 69. 7o 硫酸鋅溶液（0. 42mol/L）:稱取120g硫酸鋅（ZnSO,7H：0）,用水溶解,并稀釋至1000ml o 氫氧化鈉溶液(20g/L):稱取20g氫氧化鈉用水溶解，稀釋至1 000mlo 對(duì)氨基苯磺酸溶液：稱取10g對(duì)氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml 冰乙酸中，置棕色瓶中混勻，室溫保存。 鹽酸荼乙二

3、胺溶液(lg/L)：稱職0. lg鹽酸蔡乙二胺，加60%乙酸溶解 并稀釋至100ml,混勻后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，1周內(nèi)穩(wěn)定。 顯色劑：臨用前，將鹽酸蔡乙二胺溶液(lg/L)和對(duì)氨基苯磺酸溶液等體積 混合。僅供1次使用。 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取250. Omg于硅膠干燥器中干燥24h的 亞硝酸鈉，用水溶解后移入500ml容量瓶中，加100ml氯化鞍緩沖溶液，用水稀 釋至刻度，混勻，在4°C避光保存。此溶液每毫升相當(dāng)于500 ug的亞硝酸鈉。 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用前，吸取亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00ml,置 于100ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液每毫升相當(dāng)于5

4、.0 ug的亞 硝酸鈉。1. 3操作步驟1.3.1樣品的處理稱取約10. 00g (糧食稱取5. 00g)經(jīng)絞碎混勻的樣品，置于250ml燒杯中，力口。 70ml水和12ml氫氧化鈉溶液(20g/L),混勻，用氫氧化鈉溶液(20g/L)調(diào)樣品pH 至8,定量轉(zhuǎn)移至200ml容量瓶中，加10ml硫酸鋅溶液，混勻。如不產(chǎn)生白色 沉淀，可再補(bǔ)加23ml氫氧化鈉溶液，攪拌混勻。置60°C水浴中加熱10min, 取出后冷至室溫，加水至刻度，混勻。放置0. 5h,用濾紙過(guò)濾，棄去初濾液20ml, 收集濾液備用。1. 3. 2亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0

5、、5. 0ml亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于 0.0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25. 0 u g 的亞硝酸鈉)，分別置于 25ml 具 塞比色管中。分別加入4.5ml氯化鞍緩沖溶液，2. 5ml60%的乙酸，然后立即加 入5. 0ml顯色劑，加水至刻度，混勻，在暗處?kù)o置25min,用lcm比色杯(靈敬 度低時(shí)可換2cm比色杯)，以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)，于波長(zhǎng)ooOnm處測(cè)吸光度，繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線。1.3.3樣品的測(cè)定吸取10. 0ml樣品濾液于25ml具塞比色管中,按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備程序,自“分別加入45ml氯化鍍緩沖液”起依法操作。同時(shí)做試劑空白。1. 4結(jié)果計(jì)算X 加？ X OOP 心

6、X冷X】000V式中：X樣品中亞硝酸鹽的含量，mg/kg：nu樣品的質(zhì)量，g；m：測(cè)定用樣液中亞硝酸鹽的質(zhì)量，Mg；樣品處理液的總體積，ml；V：測(cè)定用樣液體積，ml。結(jié)果以算術(shù)平均值的二位有效數(shù)字表述。亞硝酸鈉含雖的標(biāo)準(zhǔn)曲OD538nmV=2O.81x-0.016R2 = 0.990亞硝酸鈉復(fù)/pg一純性（亞硝酸鈉量/此012345樣1樣200.100.2Q0.300.400.50才昭于亞6淳竣鋰屋心01.02.03.04.05.0/0.050.050.4%對(duì)氛呈責(zé)1.001-001.001.001.001.001.001.00$583 35miii0.500.500.500.500J0O.

7、fioO.f00.50加1水至詡虞碎箝貿(mào)"mln00.0240.0480.0770.1020.1140.0650.06S1. 5說(shuō)明及注意事項(xiàng)硫酸鋅溶液作為蛋口質(zhì)沉淀劑使用，也可用亞鐵氛化鉀和乙酸鋅的混合 溶液，利用產(chǎn)生的亞鐵鼠化鋅與蛋白質(zhì)共沉淀；實(shí)驗(yàn)中使用重蒸水可以減少試驗(yàn) 誤差。2硝酸鹽的測(cè)定2.1原理樣品經(jīng)沉淀蛋口質(zhì)、除去脂肪后，將樣品提取液通過(guò)鎘柱，使其中的硝 酸根離子還原成亞硝酸根離子。在酸性條件下，亞硝酸根與對(duì)氨基苯磺酸重氮化 后，再與鹽酸蔡乙二胺偶合形成紅色染料，經(jīng)比色測(cè)得亞硝酸鹽總量，從還原詢 后亞硝酸鹽量即可求得硝酸鹽的含量。2. 2儀器和試劑2. 2.1儀器(1)

8、鎘柱a.海綿狀鎘粉的制備：投入足夠的鋅皮或鋅棒于500ml200g/L的硫酸鎘 溶液中，經(jīng)34h,當(dāng)溶液中的鎘全部被鋅置換后，用玻璃棒輕輕刮下，取出殘 余鋅皮，使鎘沉底，傾去上層清液，以蒸憎水用傾斜法洗滌，然后移入組織搗碎 機(jī)中，加500ml水。搗碎約2s,用水將金屬細(xì)粒洗至標(biāo)準(zhǔn)篩上，取2040|_|之 間的部分。置試劑瓶中，用水封蓋保存，備用。b.鎘柱裝填：如圖8-3所示。用蒸館水裝滿鎘柱玻璃管，并裝入2cm高的 玻璃棉作墊。將玻璃棉壓向柱底，并將其中所包含的空氣全部排出，在輕輕敲擊 下加入海綿狀鎘至810cm高,上面用lcm高的玻璃棉覆蓋，上置一個(gè)儲(chǔ)液漏斗, 末端穿過(guò)橡皮塞與鎘柱玻璃管緊密

9、連接。2. 2. 2試劑置示意圖柱玻璃管，也可用25ml酸式滴定管代用。好后，先用25ml鹽酸(0. lmol/L)洗滌，再以蒸憎水洗2次, 用時(shí)用水封蓋，隨時(shí)都要保持水平面在鎘層之上，不得使鎘 壬次使用完畢后，應(yīng)先以25ml鹽酸(0. lmol/L)洗滌，再以水最后用水覆蓋鎘柱。 氨緩沖溶液(pH9. 69. 7):量取20ml鹽酸加50ml蒸謂水，混勻后加 50ml氨水，用水定容至1 000ml。 稀氨緩沖溶液：取50ml氨緩沖溶液，用水定容至500mlo 對(duì)氨基苯磺酸溶液(4g/L)。 鹽酸蔡乙二胺溶液(2g/L) o 鹽酸溶液(0. lmol/L):吸取8. 4ml鹽酸,用水稀釋至1

10、000mlo 硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取0. 123 2g硝酸鈉(已于110120°C干燥 至恒重，相當(dāng)于0. 1000g亞硝酸鈉)，以重蒸水溶解，移于500ml容量瓶中并定 容。此液濃度為200 P g/ml亞硝酸鈉。 硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液：臨用時(shí)吸取標(biāo)準(zhǔn)液2. 50ml置于100ml容量瓶中， 加水定容。此液濃度為5 P mg/ml亞硝酸鈉。 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液同亞硝酸鹽的測(cè)定。2. 3操作步驟2. 3.1樣品的處理。同亞硝酸鹽測(cè)定。2. 32鎘柱還原效率的測(cè)定 先以25ml稀氨緩沖溶液沖洗鎘柱，流速控制在35ml/min(以滴定管 代替的，可控制在23ml/min) o 吸取20m

11、l硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液，加入5ml稀氨緩沖溶液，混勻，注入儲(chǔ) 液漏斗，使流經(jīng)鎘柱還原，以原燒杯收集流出液，當(dāng)儲(chǔ)液中溶液流完后，再加 5ml水置換柱內(nèi)留存溶液。將全部收集液如前經(jīng)鎘柱再還原一次，笫二次流出液 收集于100ml容量瓶中，再用20ml水洗滌鎘柱，共洗滌3次，洗滌液收集于同 一容量瓶中，加水至刻度，混勻。 吸取10. 00ml還原后的標(biāo)準(zhǔn)液(相當(dāng)于10mg亞硝酸鈉)于50ml比色管 中，加人2. 0ml對(duì)氨基苯磺酸溶液(4g/L),混勻，靜置35min,各加入1.0ml 鹽酸荼乙二胺溶液(2g/L),加水至刻度，混勻，靜置15min,用2cm比色杯，于 538nm處測(cè)定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

12、。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測(cè)得結(jié)果。還原效率大 于98%為符合要求。X = X 100式中:x還原效率，；A測(cè)得亞硝酸鹽的含量，ug：10測(cè)定用溶液相當(dāng)于亞硝酸鹽的含量，u go2. 3. 3樣品中亞硝酸鹽總量測(cè)定 樣液還原：吸取20ml樣品處理液于50ml燒杯中，加5ml氨緩沖溶液, 混勻后注入儲(chǔ)液漏斗中，使流經(jīng)鎘柱還原，以下按鎘柱還原效率測(cè)定操作進(jìn)行， 收集還原后的樣液于100ml容量瓶中并定容。 吸取1020ml還原后的樣液于50ml比色管中，以下按鎘柱還原效率 測(cè)定操作進(jìn)行，測(cè)得吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查岀亞硝酸鹽量。2. 3. 4亞硝酸鹽測(cè)定吸取40ml樣品處理液于50ml比色管中，按亞硝酸測(cè)定操作進(jìn)行，測(cè)定吸光 度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出亞硝酸鹽含量。2. 4結(jié)果計(jì)算式中：X硝酸鹽含