銀翹散檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案

1、銀翹散檢驗(yàn)方法驗(yàn)證方案1、目的：確認(rèn)所用分析方法的有效性。2、范圍：所有用于與產(chǎn)品和驗(yàn)證有關(guān)的分析方法均應(yīng)驗(yàn)證3、責(zé)任：質(zhì)量部、工程部負(fù)責(zé)實(shí)施。4、內(nèi)容：4.1、定義：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證是證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求。4.2、驗(yàn)證對(duì)象：所有用于與產(chǎn)品和驗(yàn)證有關(guān)的分析方法4.3、驗(yàn)證范圍：在建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證；在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，則質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法也需進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品標(biāo)準(zhǔn)起草說明或修訂說明中。4.4、驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)，雜質(zhì)定量檢查或限度檢查，原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定，以及制劑中的其他成

2、分（如防腐劑等）的測(cè)定。4.5、驗(yàn)證的內(nèi)容：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。5、驗(yàn)證小組成員及職責(zé)5.1、驗(yàn)證小組成員：5.2、人員職責(zé)：人 員職 責(zé)驗(yàn)證小組組長組織相關(guān)的驗(yàn)證培訓(xùn)；負(fù)責(zé)起草驗(yàn)證方案、組織項(xiàng)目的具體驗(yàn)證、督促驗(yàn)證小組成員按照驗(yàn)證方案的要求做好驗(yàn)證記錄；起草并完成驗(yàn)證報(bào)告，對(duì)整個(gè)驗(yàn)證項(xiàng)目負(fù)責(zé)。驗(yàn)證小組成員按照方案實(shí)施驗(yàn)證、并做好記錄、意外情況及時(shí)匯報(bào)和記錄、協(xié)助起草驗(yàn)證方案和報(bào)告。6、驗(yàn)證程序：分析方法的驗(yàn)證內(nèi)容程序內(nèi)容建立驗(yàn)證方案1、 確定標(biāo)準(zhǔn)及方法2、 確定試驗(yàn)及檢查范圍3、 確定步驟4、 方案審批分析儀器的確認(rèn)1

3、、 安裝：確認(rèn)安裝、檢查、文件檢查及保存2、 儀器校正3、 適用性預(yù)試驗(yàn)4、 再確認(rèn)：制訂再確認(rèn)的周期5、 制訂使用、清潔、保養(yǎng)規(guī)程，建立記錄適用性試驗(yàn)1、 準(zhǔn)確度試驗(yàn)：回收率測(cè)定2、 精密度試驗(yàn)：重現(xiàn)性，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差常規(guī)<1.0，HPLC應(yīng)<2.03、 專屬性4、 檢測(cè)限5、 定量限6、 線性7、 范圍8、 耐用性驗(yàn)證報(bào)告評(píng)價(jià)及批準(zhǔn)驗(yàn)證證書審核、簽發(fā)7、 簡介：本品為棕黃色的粉未；氣特異，味微甘而涼，主要用于辛涼透表，清熱解毒。治溫病初起，發(fā)熱無汗，或有汗不暢，微惡寒，頭痛口渴，咳嗽咽痛，舌尖紅，苔薄白或薄黃等癥狀。8、驗(yàn)證實(shí)施步驟：8.1、為了確保驗(yàn)證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確可靠，采取以下幾個(gè)

4、先行保障措施8.1.1 儀器：己經(jīng)過校正并在有效期內(nèi)8.1.2 人員：均經(jīng)過培訓(xùn)，熟悉方法及使用的儀器8.1.3 對(duì)照品：金銀花對(duì)照藥材、綠原酸對(duì)照品、連翹對(duì)照藥材、連翹苷、牛蒡子苷。8.1.4 材料：均符合檢驗(yàn)要求8.1.5 參考資料：8.1.5.1 中國藥典2010年版一部8.1.5.2 藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南(2010版) 9、 鑒別：9.1、試驗(yàn)A: 取本品，置顯微鏡下觀察：花粉粒類圓球形，直徑約至76m，外壁有刺狀雕紋，具三個(gè)萌發(fā)孔。內(nèi)果皮纖維上下層縱橫交錯(cuò)，纖維短梭形。聯(lián)結(jié)乳管直徑1425m，含淡黃色顆粒狀物。非腺毛，多碎斷，完整者18細(xì)胞，稍彎曲，直徑1043m，疣狀突起較細(xì)密。氣孔多

5、存于近葉脈兩側(cè)的下表皮上，保衛(wèi)細(xì)胞啞鈴狀。內(nèi)果皮組織碎片含草酸鈣方晶及淡棕色物質(zhì)。宿萼表皮細(xì)胞垂周壁狀彎曲。纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維。9.2 、試驗(yàn)B：取本品1.3g，加甲醇5ml，超聲處理30分鐘，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取金銀花對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取綠原酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（SOP·JC·013·04-00）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水（7:2.5:2.5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365

6、nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。9.3、試驗(yàn)C： 取本品4g，加水80ml，煎煮30分鐘，濾過，濾液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次25ml,合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)?0%乙醇5ml使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂（內(nèi)徑為1cm，柱高為24cm），用30%乙醇50ml洗脫，棄去洗脫液，在用稀乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解作為供試品溶液。另取連翹對(duì)照藥材2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取連翹苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法（SOP·JC·013&

7、#183;04-00）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同以偶硅膠G板薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸（17:2:1）位展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜盒對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。9.5、檢測(cè)結(jié)果:檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)果判斷試驗(yàn)A試驗(yàn)B試驗(yàn)C檢測(cè)人: 檢測(cè)日期: 年 月 日9.6、 驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn): 試驗(yàn)A供試品，置顯微鏡下觀察：花粉粒類圓球形，直徑約至76m，外壁有刺狀雕紋，具三個(gè)萌發(fā)孔。內(nèi)果皮纖維上下層縱橫交錯(cuò)，纖維短梭形。聯(lián)結(jié)乳管直徑1425m，含淡黃色顆粒狀物。非腺毛，多碎斷，完整者18細(xì)胞，稍彎曲，直

8、徑1043m，疣狀突起較細(xì)密。氣孔多存于近葉脈兩側(cè)的下表皮上，保衛(wèi)細(xì)胞啞鈴狀。內(nèi)果皮組織碎片含草酸鈣方晶及淡棕色物質(zhì)。宿萼表皮細(xì)胞垂周壁狀彎曲。纖維束周圍薄壁細(xì)胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維。試驗(yàn)B供試品色譜中，供試品在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。試驗(yàn)C供試品色譜中，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜盒對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。9.7、檢驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià):10、含量測(cè)定:照高效液相色譜法測(cè)定；儀器：LC-20AT高效液相色譜儀。10.1、準(zhǔn)確度：10.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（35:65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm

9、。理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，流速 ；色譜柱規(guī)格： ；粒度： ；進(jìn)樣量：10l。10.1.2 對(duì)照品溶液的制備：取牛蒡苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。10.1.3 供試品溶液的制備：取本品適量，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W,頻率30kHz）30分鐘，放冷，在稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。10.1.4 取本品粉末約0.25g，置25ml量瓶中，共稱九份。10.1.5 三份中分別加10.1.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液2.5ml，置具塞錐

10、形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W,頻率30kHz）30分鐘，放冷，在稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。10.1.6 三份中分別加10.1.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液5ml，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W,頻率30kHz）30分鐘，放冷，在稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。10.1.6 三份中分別加10.1.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液7.5ml，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W,頻率30kHz）30分鐘，放

11、冷，在稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。10.1.7 計(jì)算：注：式中f為對(duì)照品的濃度除以對(duì)照品峰面積得到的值的平均值； AT為對(duì)照品峰面積；單位v*sec ； n為供試品的稀釋倍數(shù)； WT為供試品的稱量；單位g。 10.1.8計(jì)算結(jié)果填入下表： 含量測(cè)定牛蒡苷加樣回收率試驗(yàn)表序號(hào)樣品稱量（g）樣品中牛蒡苷的含量（mg）對(duì)照品加入量（mg）實(shí)測(cè)值（mg）回收率（%）回收率的平均值（）RSD（%）123456789檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：10.1.9結(jié)果評(píng)價(jià)：10.2、精密度：10.2.1 重復(fù)性（設(shè)操作人員A）：10.2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅

12、烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（35:65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm。理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，流速 ；色譜柱規(guī)格： ；粒度： ；進(jìn)樣量：10l。10.2.1.2 對(duì)照品溶液的制備：取牛蒡苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。10.2.1.3 供試品溶液的制備：取本品適量，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W,頻率30kHz）30分鐘，放冷，在稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。10.2.1.4 計(jì)算：注：式中f為對(duì)照品的濃度除以對(duì)照品

13、峰面積得到的值的平均值；AT為對(duì)照品峰面積；單位v*sec ；n為供試品的稀釋倍數(shù)；WT為供試品的稱量；單位g。10.2.1.5 將計(jì)算的結(jié)果填入下表含量測(cè)定牛蒡苷重復(fù)性試驗(yàn)表序號(hào)樣品稱量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）123456檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：10.2.1.6 結(jié)果評(píng)價(jià)：10.2.2 中間精密度（換一時(shí)間，換一操作人員，設(shè)操作人員為B）：10.2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（35:65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm。理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，流速 ；色譜柱規(guī)格： ；粒度： ；進(jìn)樣量：10l。10.2

14、.2.2 對(duì)照品溶液的制備：取牛蒡苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。10.2.2.3 供試品溶液的制備：取本品適量，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W,頻率30kHz）30分鐘，放冷，在稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。10.2.2.4 計(jì)算：注：式中f為對(duì)照品的濃度除以對(duì)照品峰面積得到的值的平均值；AT為對(duì)照品峰面積；單位v*sec ；n為供試品的稀釋倍數(shù)；WT為供試品的稱量；單位g。10.2.2.5 將計(jì)算的結(jié)果填入下表含量測(cè)定牛蒡苷重復(fù)性試驗(yàn)

15、表序號(hào)樣品稱量（g）含量（g/g）含量的平均值（g/g）RSD（%）123456檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：10.2.2.6 結(jié)果評(píng)價(jià)：10.3、專屬性：10.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（35:65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm。理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，流速 ；色譜柱規(guī)格： ；粒度： ；進(jìn)樣量：10l。10.3.2 取牛蒡苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。10.3.3 供試品溶液的制備：取本品適量，混勻，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（

16、功率250W,頻率30kHz）30分鐘，放冷，在稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。10.3.4 空白溶液的制備：精密稱取陰性對(duì)照品0.5g，按供試品溶液的制備方法制備成陰性樣品溶液。含量測(cè)定專屬性試驗(yàn)表保留時(shí)間供試品溶液對(duì)照品溶液空白溶液檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：10.3.5 驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)：供試品溶液中應(yīng)呈現(xiàn)與牛蒡苷對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰；空白溶液中在這點(diǎn)應(yīng)無色譜峰。10.3.6 結(jié)果評(píng)價(jià)：10.4、線性及線性范圍：10.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（35:65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm。理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不

17、低于2500，流速 ；色譜柱規(guī)格： ；粒度： ；進(jìn)樣量：10l。10.4.2 取牛蒡苷對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含80ug的溶液，即得。10.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：分別吸取10.4.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml置5個(gè)2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，既得。10.4.4 以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。將結(jié)果填入下表。牛蒡苷不同濃度的峰面積濃度（mg/ml）峰面積（v*sec）回歸方程相關(guān)系數(shù)斜率： Y軸軸距：檢測(cè)人： 檢測(cè)日期：10.4.5 結(jié)果評(píng)價(jià)：10.5、系統(tǒng)重復(fù)性：10.5.1 配制工作濃度的0.02%

18、和0.05%樣品標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣6次10.5.2 計(jì)算：峰面積的平均值與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.02%的牛蒡苷面積序號(hào)峰面積峰面積平均值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1234560.05%的牛蒡苷峰面積序號(hào)峰面積峰面積平均值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差123456峰面積的平均值相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差10.6、檢測(cè)限：用系統(tǒng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)偏差和線性回歸方程中的斜率差計(jì)算： 計(jì)算：牛蒡苷的檢測(cè)限為：10.7、定量限：用系統(tǒng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)偏差和線性回歸方程中的斜率差計(jì)算： 計(jì)算：牛蒡苷的定量限為：10.8、范圍：10.9、耐用性：10.9.1 以流動(dòng)相的組成比例、同一規(guī)格的色譜柱為變動(dòng)因素，得出測(cè)定結(jié)果不受影響的程度，為使方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。10.9.2 對(duì)照品溶液的制備：取10.1.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液作為對(duì)照品溶液。10.9.3 供試品溶液的制備：取10.1.3項(xiàng)下供試品溶液作為供試品溶液。10.9.4 色譜條件1：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（35:65）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長為280nm。理論板數(shù)按牛蒡苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，流速 ；色譜柱規(guī)格： ；粒度： ；進(jìn)樣量：10l。10.9.5 色譜條件2：流動(dòng)相組