HPV臨床常用檢測(cè)方法

1、由于 HPV 不能在體外細(xì)胞培養(yǎng)，故不能用簡(jiǎn)便的血清血檢測(cè)進(jìn)行HPV 的診斷和分型。臨床上用于檢測(cè) HPV 的方法包括細(xì)胞學(xué)方法、免疫組化、原位雜交、斑點(diǎn)雜交、核酸印跡和PCR等，其中以 PCR 方法的敏感性最高，是目前應(yīng)用最多感染的 HPV 型別、含量、持續(xù)時(shí)間決定病變的發(fā)展與預(yù)后，是進(jìn)行 HPV 檢測(cè)的主要內(nèi)容。目前主要是通過應(yīng)用分子生物學(xué)方法進(jìn)行HPV DNA 勺檢測(cè)。1、現(xiàn)有的 HPV 實(shí)驗(yàn)室主要檢測(cè)手段：1聚合酶鏈反應(yīng)(PCR, Polymerase Cha in Reactio n):擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA 片斷的方法。該法有較高的敏感度，可進(jìn)行 HPV 分型，缺點(diǎn)是對(duì)實(shí)

2、驗(yàn)室環(huán)境要求較高，容易發(fā)生樣本間的交叉污染，從而導(dǎo)致假陽性率高。2核酸雜交檢測(cè)有較好的特異性和敏感度，還可以進(jìn)行 HPVDNA 勺分型，各種核酸雜交檢測(cè)方法有一定的 優(yōu)缺點(diǎn)。A 核酸印跡原位雜交適用于 HPV 分型和 HPV DNA 分子量鑒定，雖然靈敏度高，但因操作復(fù)雜，需要新鮮組織標(biāo) 本,不便在臨床上大規(guī)模使用。B 斑點(diǎn)印跡其敏感度和特異性均低于核酸印跡原位雜交法，雖然經(jīng)濟(jì)實(shí)用，但實(shí)驗(yàn)過程存在有放射性污染，是環(huán)保所不能輕視的問題。C 原位雜交(in situ hybridization，種核酸雜交技術(shù)，可用來測(cè)定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位，檢測(cè)重組體DNA 通過非放射性探針對(duì)

3、石蠟組織進(jìn)行檢測(cè),能作定位檢測(cè)，假陽性率低，但靈敏度不高，大大降低了臨床使用價(jià)值。D 雜交捕獲法(Hybrid Capture)雜交捕獲試驗(yàn)是利用化學(xué)發(fā)光對(duì)抗體捕獲的信號(hào)加以放大。首先使 DNA 雙鏈釋放并分解成為可以雜交的核苷酸單鏈，DNA 單鏈與 RNA 組合探針結(jié)合為 RNA-DNA 雜合體，特異性抗體將 RNA-DNA雜合體捕獲，偶聯(lián)有堿性磷酸酶的第二抗體與 RNA-DNA 雜合體結(jié)合,堿性磷酸酶使酶 底物發(fā)光，根據(jù)光的強(qiáng)弱可確定堿性磷酸酶的含量，從而確定 RNA-DNA 雜合體的含量。能檢測(cè) 13 種高危型 HPV,包括 HPV16 18、31、33、35、39、45、51、52、5

4、6、58、59、68。各種檢測(cè)方法的比較各種檢測(cè)方法的比較歡迎下載2方法學(xué)靈敏度特異性技術(shù)特點(diǎn)細(xì)胞學(xué)（Cytology）低低操作容易，成本較低，準(zhǔn)確度較差斑點(diǎn)印跡（Dot blot ）中中有一定放射性核酸印跡原位雜交（southernblothybridization ）高高標(biāo)準(zhǔn)、麻煩，不宜大規(guī)模使用原位雜交(In Situhybridization )高中蠟塊組織包埋內(nèi)檢測(cè) HPV雜交捕獲（HC HC2高中無放射性，易使用，高、低危型間有交叉反應(yīng)，且不能分型普通多聚酶鏈反應(yīng)（PCR很高中取材容易，但目前已應(yīng)用試劑的只能檢測(cè)少 數(shù)單一型別，如 6、11、18 等，且由于技術(shù)上的問 題存在假陽性

5、2、最新推出的 HPV 的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)高靈敏度高危型 HPV 分型多色熒光實(shí)時(shí) PCR 式劑：為歐洲著名分子生物學(xué)研究機(jī)構(gòu)專門針對(duì)宮頸癌篩查而全新設(shè)計(jì)的高危型HPV 分型多色熒光實(shí)時(shí) PCR 檢測(cè)試劑，可同時(shí)檢測(cè)高危型中最主要的 16、18、31/33、35/45 型。了解宮頸疾病人乳頭狀瘤病毒（ HPV ）感染患者中 HPV 亞型分布情況及高危型 HPV 的年 齡分布。方法采用專利 Invader 酶切信號(hào)放大法，利用 Cervista HPV HR Cervisat 核酸雜交基因分型試劑檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞HPV 的 14 個(gè)亞型 DNA。HPV 型組亞型備注A5/A651，56，66A71

6、8，39，45，59，68A916，31，33，35，52，58歡迎下載31 HFV DtSAHybriM居用核酸井子雜交儀*ONA槎取試 劑盒和人乳頭狀*SIS毒植Bfi分子快速親交基閃分型 試劑款（HyhriVU札 美國專利W2CI87）均為凱齋 生物科技有限公謝產(chǎn)品口采用低密度撰因芯片利導(dǎo) 流雜交技術(shù)（nothnxi#! byfcricHzaiifin）應(yīng)用專核 昔魄探師雜兗叮栓岀13種離危亞型（HPV 16. I仏31、33、35、39x4仇51、J2. 56, 58, 59, 68）. 5種低危亞型（HPV6. LU 42、43和44）及中國人特有的離危亞型（CPW04、53. 66

7、）。M休步驟如下;利用凱普生物化學(xué)科技公可的基 因組抽提試閘盒提取樣本DNA,FTC-200 MJ Rrsch） PCR擴(kuò)增由反應(yīng)體系25條件為列T9 miuF95 T：20 s, 55 3G aT72 12 M .r擴(kuò)增40亍循環(huán)，72無廷伸3 iniru的七預(yù)熱后*在HybriMa醫(yī)用機(jī)匯分子快極雜交儀乎臺(tái)上放人標(biāo) 記有21種HPV莘因盤專核昔醉探針的低密度華因 芯片，將擴(kuò)増產(chǎn)物置95變性5 min,冰浴2 tnin.加入檢涮亂內(nèi)進(jìn)行10 min的診瞳雜交酶標(biāo)猊 色：加人封阻液封用為反蠱的空白徹孔”SI扳顯色 垢觀察栓伺結(jié)卑彳陽性點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)幫色凰點(diǎn)，爭(zhēng)個(gè)圓 點(diǎn)陽性即為多據(jù)感堅(jiān)心每獻(xiàn)芯片上有P

8、CR反應(yīng)質(zhì) 桂點(diǎn)和衆(zhòng)奩顯色質(zhì)控點(diǎn)各I個(gè)。HPV 基因分型檢測(cè)試劑盒（PCR-反向點(diǎn)雜交法）【產(chǎn)品用途】對(duì)人乳頭瘤病毒（HPV ）的感染情況進(jìn)行定性檢測(cè)并加以分型，能夠檢測(cè)23 種 HPV 基因型，直接提示感染 HPV 的基因型；包括 18 種高危和 5 種低危型，可用于臨床 HPV 感染的輔助診斷?！井a(chǎn)品優(yōu)勢(shì)】1. 精確分型：能同時(shí)對(duì) 23 種 HPV 基因型進(jìn)行精確分型，包括 18 種高危型和 5 種地位型；2. 效率高：?jiǎn)未螜z測(cè)標(biāo)本數(shù)量可達(dá) 96 份；3. 性能好：特異性強(qiáng)、重復(fù)性好，均高于98% ；4. 設(shè)備通用：如普通 PCR 儀和雜交儀，適應(yīng)于大、中、小型實(shí)驗(yàn)室；5. 內(nèi)部質(zhì)控：具有真正意義上的內(nèi)部質(zhì)控，檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確；6. 可以檢測(cè)多種臨床標(biāo)本?！炯夹g(shù)方法】采用 PCR 和反向點(diǎn)雜交法相結(jié)合的基因芯片技術(shù)【檢測(cè)原理】將大量不同序列的探針分子固定于支持物的不同位置上，然后與已做標(biāo)記的樣本進(jìn)行雜交,信號(hào)的強(qiáng)度和分布來進(jìn)行分析。通過檢測(cè)雜交歡迎下載4【檢測(cè)